Name: the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow
Uploaded: 2010-05-06T16:22:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке гранта NIH HD-32116, Сандлер Семья Поддержка Фонда Джона Bowes стволовых клеток фонда, МПКСНТ, MHLW и HFSP. ZM поддерживается Карлос Baldoceda фонда и UCSF Krevans стипендий. AA-B. держит Хизер и Мелани Мусса Наделенный Председателя.

<ol>
	<li>Doetsch, F., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Network+of+tangential+pathways+for+neuronal+migration+in+adult+mammalian+brain.">Network of tangential pathways for neuronal migration in adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 14895-14900 (1996).</li><li>Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+SVZ+stem+cells+lie+in+a+vascular+niche:+a+quantitative+analysis+of+niche+cell-cell+interactions.">Adult SVZ stem cells lie in a vascular niche: a quantitative analysis of niche cell-cell interactions.</a> Cell Stem Cell. 3, 289-300 (2008).</li><li>Tavazoie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+specialized+vascular+niche+for+adult+neural+stem+cells.">A specialized vascular niche for adult neural stem cells.</a> Cell Stem Cell. 3, 279-288 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Merkle, F. T., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+confer+unique+pinwheel+architecture+to+the+ventricular+surface+in+neurogenic+regions+of+the+adult+brain.">Neural stem cells confer unique pinwheel architecture to the ventricular surface in neurogenic regions of the adult brain.</a> Cell Stem Cell. 3, 265-278 (2008).</li><li>Mirzadeh, Z., Han, Y. G., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cilia+organize+ependymal+planar+polarity.">Cilia organize ependymal planar polarity.</a> J Neurosci. 30, 2600-2610 (2010).</li><li>Doetsch, F., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+a+germinal+layer+in+the+adult+mammalian+brain.">Regeneration of a germinal layer in the adult mammalian brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 96, 11619-11624 (1999).</li><li>Sawamoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+neurons+follow+the+flow+of+cerebrospinal+fluid+in+the+adult+brain.">New neurons follow the flow of cerebrospinal fluid in the adult brain.</a> Science. 311, 629-632 (2006).</li><li>Coskun, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD133++neural+stem+cells+in+the+ependyma+of+mammalian+postnatal+forebrain.">CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal forebrain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 1026-1031 (2008).</li><li>Merkle, F. T., Mirzadeh, Z., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+organization+of+neural+stem+cells+in+the+adult+brain.">Mosaic organization of neural stem cells in the adult brain.</a> Science. 317, 381-384 (2007).</li><li>Young, K. M., Fogarty, M., Kessaris, N., Richardson, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+zone+stem+cells+are+heterogeneous+with+respect+to+their+embryonic+origins+and+neurogenic+fates+in+the+adult+olfactory+bulb.">Subventricular zone stem cells are heterogeneous with respect to their embryonic origins and neurogenic fates in the adult olfactory bulb.</a> J Neurosci. 27, 8286-8296 (2007).</li><li>Waclaw, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zinc+finger+transcription+factor+Sp8+regulates+the+generation+and+diversity+of+olfactory+bulb+interneurons.">The zinc finger transcription factor Sp8 regulates the generation and diversity of olfactory bulb interneurons.</a> Neuron. 49, 503-516 (2006).</li><li>Kohwi, M., Osumi, N., Rubenstein, J. L., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pax6+is+required+for+making+specific+subpopulations+of+granule+and+periglomerular+neurons+in+the+olfactory+bulb.">Pax6 is required for making specific subpopulations of granule and periglomerular neurons in the olfactory bulb.</a> J Neurosci. 25, 6997-7003 (2005).</li><li>Kohwi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+subpopulation+of+olfactory+bulb+GABAergic+interneurons+is+derived+from+Emx1-+and+Dlx5/6-expressing+progenitors.">A subpopulation of olfactory bulb GABAergic interneurons is derived from Emx1- and Dlx5/6-expressing progenitors.</a> J Neurosci. 27, 6878-6891 (2007).</li><li>Hack, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+fate+determinants+of+adult+olfactory+bulb+neurogenesis.">Neuronal fate determinants of adult olfactory bulb neurogenesis.</a> Nat Neurosci. , (2005).</li><li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain.">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li><li>Kelsch, W., Mosley, C. P., Lin, C. W., Lois, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+mammalian+precursors+are+committed+to+generate+neurons+with+defined+dendritic+projection+patterns.">Distinct mammalian precursors are committed to generate neurons with defined dendritic projection patterns.</a> PLoS Biol. 5, e300 (2007).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+centrosome+inheritance+maintains+neural+progenitors.">Asymmetric centrosome inheritance maintains neural progenitors.</a> Nature. 461, 947-955 (2009).</li></ol>

Большинство исследований нейрогенез в желудочка и субвентрикулярной зоны опирались на классические секционирования методы для проверки микроанатомии и сотовой связи в этих регионах. Здесь мы опишем альтернативный метод, впервые примененный для анализа сети миграционной цепочки нейробластов генерируется в СВЗ 1, то для изучения регенерации населения предшественников СВЗ следующие анти-митотического лечения 6, а в последнее время используется для изучения точных апикальной и базальных межклеточных взаимодействий взрослых СВЗ нервные стволовые клетки 2,3,4. Интересно, что этот метод показал, что нервные стволовые клетки, или клетки типа B1, среди взрослого СВЗ являются частью смешанных нейроэпителия с дифференцированными без деления эпендимальных клеток. En-лицо визуализации с использованием wholemounts показал, что это смешанная нейроэпителия имеет вертушки архитектуру, состоящую из апикальной окончаний типа В1 клетки окружены большими апикальной поверхности клетки эпендимальных 4. Это ан-лицо анализ разъяснил нашему пониманию из рода нервные стволовые клетки в эмбриональные и взрослые мозги как состоящую из клеток с окончаниями на апикальной поверхности желудочка и базальных процессов связавшись сосудистой нишу. Эти результаты были бы практически невозможно с использованием классических методов секционирования. Wholemounts также способствуют выявлению нейронных стволовых клеток с помощью своих желудочка контактирующих апикального процесса. Поскольку все больше специфических маркеров на эти стволовые клетки находятся, wholemounts будет неотъемлемой частью выявления и анализа поведения нейронных стволовых клеток. Wholemounts боковых стенок желудочка также обеспечивают идеальную перспективу для изучения плоских полярность эпендимальных клеток. Эпендимальных клетки multiciliated клеток, выстилающих желудочки, которые функционируют, чтобы продвинуть КСФ в скоординированной основе. С wholemount технику, весь эпендимальных эпителий подвергается ан-лица и могут быть окрашены и изучены всесторонне от передних к задним и спины к брюху границ. Кроме того, эпендимальных анализы потока осуществляется на остро рассеченные, жить wholemounts энергично продемонстрировать плоского поляризованного потока, порожденного эпендимальных реснички. Последние работы с использованием wholemount подходы обнаружила сотовой детерминант этой эпендимальных полярности плоских 5. Интересно, что wholemount исследования также показали, что эпендимальных генерируемых CSF потока устанавливает градиенты chemorepellents, что руководство миграция молодых нейронов в СВЗ 7. Wholemount подходы, которые были первоначально определены сеть нейронных цепей миграционных поэтому продолжают оказывать понимание механизмов, регулирующих цепной миграции. Анализ VZ и СВЗ по wholemount изображений добавляет новый подход для будущих исследований и способ прояснить наше понимание существующих исследований. Например, недавнее исследование показало, что нервные стволовые клетки во взрослом СВЗ были CD133 + / CD24-клеток в контакт с желудочка 8. Основываясь на их иммунной в разделах, эти авторы утверждают, что эти клетки субпопуляции multiciliated эпендимальных клеток. Однако в нашем исследовании с использованием wholemount подход, который дает более полное представление о всей эпендимальных эпителия, мы обнаружили, что все эпендимальных клетки экспрессируют CD24 и единственный желудочек контактирующих клеток, которые были CD133 + / CD24-были подмножество типа В1 клетки 4. Кроме того, wholemount техника обещает быть полезными в будущих исследованиях изучались недавно описал мозаики организации нервных стволовых клеток во взрослом мозге 9. Несколько исследований показали, что нервные стволовые клетки в мозгу взрослого организма не являются однородным населением, но регионально определены и обычно производят только определенные подтипы обонятельных интернейронов лампочки. Эти исследования предположили, что различные субпопуляции нервные стволовые клетки могут быть выделены либо путем выражения специфических факторов транскрипции 10,11,12,13,14 и / или их региональные локализации по спинно-брюшной и передне-задней экстентов боковой стенке 9,15,16. Поскольку все больше молекулярных маркеров региональном указанных субпопуляций взрослых нервных стволовых клеток будут определены, wholemount изображений должны обеспечивать полное представление о parcelation этих различных областях предшественников по желудочковой стенки. Wholemount вскрытие и методы визуализации, представленные здесь, могут также быть использованы для анализа желудочка стен в зародыше. Рассечение эмбриональных боковой стенке выполняется, шаг за шагом, в той же манере. Есть только небольшие различия в уровне сложности; эмбриональных желудочки сравнительно больших решений рассечение проще, но ткань мягкая решения манипуляции сложнее. В частности, аналогичные воздействия бокового желудочка может быть использован в ЭмбриОС препарировать корковых стены желудочка учиться коркового нейрогенез. Последние данные свидетельствуют о том, что асимметричные центросомы наследования поддерживает радиальной глии в желудочковой поверхности во время корковых нейрогенез 17. En лицу изображений радиальной глии апикальной поверхности могут дать представление о том, как центросомы в рамках этих делящихся клеток асимметрично унаследовал. Как и большинство методов, особенно связанных с точным ловкость, мастерство требует практики. Есть, однако, несколько элементов в рассечение, которые являются ключом к лучшим результатам: 1) освещение настройки освещения образца для создания теней оказывает неоценимую контраст во время рассечения ткани, которая в противном случае относительно однородные, 2) с помощью щипцов, как два насекомое пинцетом контактов в этой технике никогда не используются ущипнуть вместе или подобрать ткань, но используются в качестве маневренного булавки, которые можно постоянно корректировать по стабилизации ткани при резке, 3) баланс нежной опровержение и режущего ножа не должно быть использованы только сократить, но и обеспечивают мягкий опровержение отделить средние и боковые стены, помня, что большая часть этого рассечение на самом деле осуществляется через нежный ретракцией только прерывистого резания.

the subventricular zone en-face: wholemount staining and ependymal flow

Стены боковых желудочков содержат наибольшее зародышевых региона во взрослом мозге млекопитающих. Субвентрикулярной зону (СВЗ) в этих стенах хорошо изучена модельная система для понимания поведения нейронных стволовых клеток и регуляции взрослого нейрогенеза. Традиционно, эти исследования опирались на классические методы секционирования для гистологического анализа. Здесь мы представляем альтернативный подход, wholemount технику, которая обеспечивает комплексный, ан-лицо Ввиду этого зародышевого регионе. По сравнению с разделами, wholemounts сохранить полную cytoarchitecture и сотовой связи в СВЗ. Этот подход недавно выяснилось, что взрослые нервные стволовые клетки, или клетки типа В1, входят в состав смешанных нейроэпителия с дифференцированными эпендимальных клеток, выстилающих боковых желудочков. Кроме того, этот подход был использован для изучения плоской поляризации эпендимальных клеток и поток спинномозговой жидкости они порождают в желудочке. С учетом последних свидетельств того, что взрослые нервные стволовые клетки являются гетерогенной популяции, что является регионально указано, wholemount подход, вероятно, будет важным инструментом для понимания организации и parcellation этой ниши стволовых клеток.

Watch this Scientific Journal Video about The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow at JoVE.com

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Боковые стенки желудочка содержат наибольшее зародышевых региона во взрослом мозге млекопитающих. Традиционно, изучение нейрогенеза в этой области сделали ставку на классические методы секционирования для гистологического анализа. Здесь мы представляем альтернативный подход, wholemount технику, которая обеспечивает комплексный, ан-лицо Ввиду этого зародышевого регионе.

Субвентрикулярной зоне En-лицо: Wholemount Окрашивание и эпендимальных потока

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Нейробластов Анализ: Анализ для создания и обогащения нейронов клетки-предшественники из Дифференцируя нейронных потомков стволовых клеток методом проточной цитометрии

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

Wholemount иммуногистохимии для выявления сложной топографии мозга

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Новорожденных субвентрикулярной Electroporation зоны

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Immunohistochemical and Calcium Imaging Methods in Wholemount Rat Retina

Иммуногистохимические и кальция способы визуализации в Wholemount сетчатке крыс

In this paper we describe the tools, reagents, and the practical steps that are needed for: 1) successful preparation of wholemount retinas for ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Полное Травма спинного мозга и мозга Вскрытие протокол для последующего Wholemount<em&gt; На месте</em&gt; Гибридизация в личинок морская минога

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

Живая съемка в эпендимных ресничек боковых желудочков головного мозга мыши

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Сотовый Сортировка нейронных стволовых и прогениторных клеток из взрослых мышей субвентрикулярной зоны и Live-визуализация клеточного цикла динамика

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Выделение и культуры взрослых нервные стволовые клетки от мыши зоны расположенный под мозолистым телом

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Measuring Post-Stroke Cerebral Edema, Infarct Zone and Blood-Brain Barrier Breakdown in a Single Set of Rodent Brain Samples

Измерение посттактного церебрального отека, зоны инфаркта и пробок гемо-мозгового барьера в одном наборе образцов мозга грызунов

One of the most common causes of morbidity and mortality worldwide is ischemic stroke. Historically, an animal model used to stimulate ischemic stroke ...