Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

وأيد هذا العمل في جزء من المعهد الوطني للسرطان P30 CA23074 ، والجمعية الأميركية لأبحاث السرطان المؤسسية 74-001-31 غرانت ، وجامعة ل. من بوغ GI أريزونا (NCI / CA9506O NIH).

1. إعداد S2 الخلايا للفحص المجهري وكان شنايدر الخلايا المشتقة من الأجنة في وقت متأخر S2 trypsinized أوريجون R ذبابة الفاكهة. وتألفت شنايدر الثقافة الأصلية من خليط من أنواع الخلايا ولكنها أصبحت أكثر تجانسا مع مرور تابع 1. وقد وصفت...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

للخلية حقل البيولوجيا ، فإن نظام مثالي للحفاظ على أن تكون غير مكلفة وسهلة التعامل معها ، وقابلة لمجموعة متنوعة من التقنيات. خلايا ذبابة الفاكهة S2 تلبية هذه الاحتياجات ، وهكذا أصبحت بسرعة هذا النظام خيارا بالنسبة لعدد متزايد من الخلايا مختبرات البيولوجيا. <p clas...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

فإن النظام المثالي التجريبية تكون رخيصة وسهلة للحفاظ على ، قابلة لمجموعة متنوعة من التقنيات ، وسوف تكون معتمدة من قبل دراسات واسعة النطاق وقاعدة بيانات الجينوم التسلسل. مثقف خلايا ذبابة الفاكهة S2 ، نتاج نأت الأجنة 20-24 ساعة قديمة 1 ، تمتلك كل هذه الخصائص. وبالتالي ، فإن خلايا S2 هي غاية مناسبة تماما لتحليل العمليات الخلوية ، بما في ذلك اكتشاف الجينات ترميز المكونات الجزيئية لعملية أو آلية للاهتمام. ملامح من الخلايا التي هي الأكثر S2 المسؤولة عن فائدتها هي السهولة التي يتم الحفاظ عليها ، لحساسيتها بديعة المزدوج تقطعت بهم السبل التدخل بوساطة الحمض النووي الريبي (دي إس) ([رني) ، وقابلية الإستطراق لالمجهري مضان إما مباشرة أو ثابتة الخلايا. يمكن زراعة الخلايا S2 في مجموعة متنوعة من وسائل الإعلام ، بما في ذلك عدد من غير مكلفة وسائل الاعلام المتاحة تجاريا المصل الحرة ، كامل المعرفة ، 2. بالإضافة إلى ذلك ، أنها تنمو بشكل أمثل وبسرعة في 21-24 درجة مئوية ، ويمكن تربيتها في مجموعة متنوعة من الحاويات. خلافا لخلايا الثدييات والخلايا S2 لا تتطلب مناخا للوائح ، ولكن بدلا من ذلك بلاء حسنا مع الهواء العادي ، ويمكن أن يستمر حتى في قوارير مختومة. استكمالا للتخفيف من [رني في الخلايا S2 هو القدرة على تحليل الظواهر بسهولة تجريبيا ، الناجمة عن مرحلة أو مضان المجهري للخلايا الحية أو الثابتة. S2 الخلايا تنمو في الثقافة باعتبارها المونولاير واحد ولكن لا تعرض تثبيط للإتصال به. بدلا من ذلك ، تميل إلى الخلايا تنمو في مستعمرات كثيفة في الثقافات. في منخفض الكثافة ، والثقافات S2 نمت على الزجاج أو البلاستيك نسيج الثقافة المعالجة هي جولة وفضفاضة يعلق. ومع ذلك ، يمكن أن تكون خلايا من خلايا S2 تحسنت كثيرا حثها على نطاق واسع في زراعة تتسطح منهم لفترة وجيزة على السطح المطلي مع lectin ، كونكانافالين A (كونا) 3. ويمكن أيضا أن تكون الخلايا S2 transfected ستابلي مع علامات fluorescently الموسومة للهياكل التسمية أو العضيات الفائدة في الخلايا الحية أو الثابتة. ولذلك ، فإن السيناريو المعتاد لتحليل مجهري للخلايا هو هذا : يتم التعامل مع الأولى ، خلايا S2 (التي يمكن أن تمتلك الجينات المحورة للتعبير عن علامات الموسومة) بواسطة رني للقضاء على البروتين الهدف (ق). يمكن ضبط الوقت رني العلاج للسماح للاختلافات في البروتين بدوره على حركية وتقليل الصدمات خلية / الموت إذا كان الهدف هو بروتين مهم لبقاء. المقبل ، يتم نقل الخلايا المعالجة إلى صحن يحتوي على ساترة قبل المغلفة مع كونا للحث الخلايا على الانتشار والتقيد باحكام الزجاج. أخيرا ، يتم تصوير الخلايا مع اختيار الباحث من وسائط المجهري. S2 خلايا جيدة خاصة بالنسبة للدراسات التي تتطلب رؤية طويلة من الخلايا الحية لأن هذه الخلايا البقاء في صحة جيدة في درجة حرارة الغرفة العادية والغلاف الجوي.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

ذبابة الفاكهة شنايدر (S2) الخلايا نظام شعبية متزايدة لاكتشاف وتحليل وظيفي من الجينات. هدفنا هو وصف بعض التقنيات التي تجعل الخلايا المجهرية S2 مثل هذا النظام أهمية متزايدة التجريبية.

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

إعداد الأجنة المجهري للإلكترون من ذبابة الفاكهة أنبوب القلب الجنينية

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

فحص<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات الخلايا الطرفية الرغامي بواسطة المجهر الضوئي

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

النقل عضية في مثقف<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا: S2 الخط الخليوي والخلايا العصبية الابتدائية.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

في الجسم الحي تتبع نسيلي من الخلايا الجذعية المكونة للدم والسلف تميزت خمسة البروتينات الفلورية باستخدام الميكروسكوب متحد البؤر وMultiphoton

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

في فيفو تتبع 4 الأبعاد للالجذعية المكونة للدم والسلف الكبار في خلايا الفأر قبي نخاع العظم

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

توليد &quot;أنسنة&quot;<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; S2 خط خلية حساسة للالدوائية تثبيط كينيسين-5

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

إعداد ذبابة الفاكهة والتصوير الطولي من وظيفة القلب في فيفو باستخدام البصرية بالاتساق المجهري (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

إعداد العينات البيولوجية بالتجميد ذات الضغط العالي، وتعزيز النقيض ساعدت الموجات الدقيقة، والحد الأدنى راتنج التضمين لتصوير حجم

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

الفحص الضوئي القائم علي الضوء لتحليل دروتواكسيس

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

إعداد الشبكة المجهرية كريو إلكترون للدراسات التي تم حلها عبر الزمن باستخدام نظام روبوتي جديد، Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...