Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Dit werk werd mede ondersteund door het National Cancer Institute P30 CA23074, de American Cancer Society Institutional Research Grant 74-001-31, en van de Univ. van Arizona GI SPORE (NCI / NIH CA9506O).

1. Voorbereiden S2 cellen voor microscopie Schneider S2 cellen waren afkomstig van getrypsineerd late embryo&#39;s van Oregon R Drosophila. Oorspronkelijke cultuur Schneider bestond uit een mengsel van celtypen, maar werd steeds homogener bij voortzetting van de passage 1. Ze zijn beschreven als macrofaag-achtige (zij zijn fagocyterende) met hemocyte-achtige genexpressie. S2 cellen kunnen worden verkregen bij de ATCC, DGRC of Invitrogen. A. Selecti...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

Voor de celbiologie veld, zou een ideaal systeem goedkoop te onderhouden, gemakkelijk te manipuleren, en vatbaar voor een verscheidenheid aan technieken. Drosophila S2 cellen voldoen aan deze eisen, en dus ze hebben het systeem van de keuze snel te worden voor een groeiend aantal van de cel biologie labs. We hebben presenteerde een kort overzicht van de methoden om S2 cellen voor te bereiden op microscopie. Een opmerkelijk hoofde van S2 cellen is het feit dat ze goed groeien in een ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

De ideale experimentele systeem zou zijn goedkoop en gemakkelijk te onderhouden, vatbaar voor een verscheidenheid aan technieken, en zou worden ondersteund door een uitgebreide literatuurstudie en de genoomsequentie database. Gekweekte Drosophila S2 cellen, het product van gedistantieerd 20-24 uur oude embryo&#39;s 1, bezitten al deze eigenschappen. Bijgevolg, S2 cellen zijn uitermate geschikt voor de analyse van cellulaire processen, waaronder de ontdekking van de genen die coderen voor de moleculaire componenten van het proces of mechanisme van belang. De kenmerken van S2 cellen die het meest verantwoordelijk zijn voor hun nut zijn het gemak waarmee ze worden onderhouden, hun gevoeligheid voor exquise dubbelstrengs (ds) RNA-gemedieerde interferentie (RNAi), en hun volgzaamheid aan fluorescentie microscopie als live of vaste cellen. S2 cellen kunnen worden gekweekt in een verscheidenheid aan media, waaronder een aantal goedkope, in de handel verkrijgbare, volledig gedefinieerd, serum-vrije media 2. Daarnaast, ze groeien optimaal en snel bij 21-24 ° C en kan worden gekweekt in een verscheidenheid van containers. In tegenstelling tot de cellen van zoogdieren, hoeft S2 cellen niet nodig een geregelde atmosfeer, maar in plaats daarvan doen het goed met normale lucht en kan zelfs worden gehandhaafd in verzegelde flessen. Als aanvulling op het gemak van RNAi in S2 cellen is de mogelijkheid om gemakkelijk experimenteel geïnduceerde fenotypes analyseren door fase of fluorescentie microscopie van vaste of levende cellen. S2 cellen groeien in de cultuur als een monolaag maar niet tonen contact remming. In plaats daarvan, cellen hebben de neiging om te groeien in kolonies in dichte culturen. Bij een lage dichtheid, S2 culturen geteeld op glas of weefselkweek behandelde plastic zijn rond en losjes bevestigd. Echter, de cytologie van de S2-cellen sterk verbeterd worden door hen ertoe te uitgebreid plat door kort kweken ze op een oppervlak bedekt met de lectine, Concanavaline A (ConA) 3. S2 cellen kunnen ook stabiel getransfecteerd worden met fluorescent-gemerkte markers te labelen structuren of organellen van belang in levende of vaste cellen. Daarom is de usual scenario voor de microscopische analyse van cellen is dit: ten eerste, S2-cellen (die kan bezitten transgenen te getagd markers te uiten), worden behandeld door RNAi naar een doelwit eiwit (s) te elimineren. RNAi behandeling tijd kan worden gecorrigeerd voor verschillen in eiwit-turn-over kinetiek en naar cel trauma / overlijden te minimaliseren als het doel eiwit is belangrijk voor de levensvatbaarheid. Vervolgens worden de behandelde cellen overgebracht naar een schotel met een dekglaasje aan pre-gecoat met ConA tot cellen te verspreiden induceren en strak houden aan het glas. Tot slot worden de cellen afgebeeld met de keuze van de onderzoeker van de microscopie modi. S2-cellen zijn bijzonder goed voor studies die uitgebreide visualisatie van levende cellen, omdat deze cellen gezond te blijven bij kamertemperatuur en normale atmosfeer.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Drosophila Schneider (S2)-cellen zijn een steeds populairder systeem voor de ontdekking en functionele analyse van genen. Ons doel is het beschrijven van een aantal van de microscopische technieken die S2 cellen te maken die een steeds belangrijker experimenteel systeem.

De voorbereiding van Drosophila S2 cellen voor lichtmicroscopie

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Onderzoek van<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvale Tracheale Terminal cellen door lichtmicroscopie

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organel Transport in gekweekte<em&gt; Drosophila</em&gt; Cellen: S2 cellijn en primaire neuronen.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klonale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen Gekenmerkt door Five fluorescerende eiwitten met behulp van confocale microscopie en Multiphoton

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Het genereren van een &quot;gehumaniseerde&quot;<em&gt; Drosophila</em&gt; S2 cellijn Gevoelig voor farmacologische remming van Kinesin-5

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

Drosophila Voorbereiding en longitudinale beeldvorming van het hart functie in vivo met behulp van Optical Coherence Microscopy (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Bereiding van de biologische monsters door hogedruk bevriezing, magnetron-bijgewoonde contrastverbetering, en minimale hars inbedding voor Volume Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Licht spot-gebaseerde assay voor analyse van Drosophila larval phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

Cryo-Elektron Microscopische Rastervoorbereiding voor tijd-opgeloste studies met behulp van een nieuw robotsysteem, Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...