Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
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Diese Arbeit wurde teilweise von der National Cancer Institute P30 CA23074, die American Cancer Society Institutional Research Grant 74-001-31, und der Univ unterstützt. of Arizona GI SPORE (NCI / NIH CA9506O).

1. Vorbereitung S2-Zellen für die Mikroskopie Schneider S2-Zellen wurden aus trypsiniert späten Embryonen von Oregon R Drosophila abgeleitet. Schneider ursprünglichen Kultur bestand aus einer Mischung von Zelltypen, sondern wurde mehr homogen weiterhin Passage 1. Sie haben als Makrophagen-like (sie sind Phagozyten) mit hemocyte wie Genexpression beschrieben worden. S2-Zellen können aus der ATCC, DGRC oder Invitrogen bezogen werden. A. Auswahl d...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

Für die Zellbiologie Feld wäre ein ideales System kostengünstig in der Wartung, leicht zu manipulieren, und zugänglich für eine Vielzahl von Techniken. Drosophila S2-Zellen erfüllen diese Anforderungen, und so haben sie schnell das System der Wahl für eine wachsende Zahl von Zellen Biologie-Labors. Wir haben einen kurzen Überblick über die Methoden, die S2-Zellen für die Mikroskopie vorbereitet präsentiert. Eine bemerkenswerte Tugend der S2-Zellen ist die Tatsache, dass s...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

Die ideale experimentelles System wäre billig und leicht zu pflegen, zugänglich für eine Vielzahl von Techniken und würde durch eine umfangreiche Literatur-und Genom-Sequenz-Datenbank unterstützt werden. Cultured Drosophila S2-Zellen, das Produkt der distanzierte 20-24 Stunden alte Embryonen 1, besitzen alle diese Eigenschaften. Folglich sind S2-Zellen extrem für die Analyse von zellulären Prozessen, einschließlich der Entdeckung der Gene, die molekularen Komponenten des Prozesses oder der Mechanismus von Interesse gut geeignet. Die Features von S2-Zellen, die die größte Verantwortung für deren Nutzen sind, sind die Leichtigkeit, mit der sie gehalten werden, ihren exquisiten Sensibilität für doppelsträngige (ds) RNA-Interferenz (RNAi), und ihre Handhabbarkeit zu Fluoreszenzmikroskopie als entweder live oder feste Zellen. S2-Zellen können in einer Vielzahl von Medien gezüchtet werden, darunter eine Reihe von preiswerten, handelsüblichen, vollständig definierte, Serum-freien Medien 2. Darüber hinaus wachsen sie optimal und schnell auf 21-24 ° C und kann in einer Vielzahl von Containern kultiviert werden. Im Gegensatz zu Säugerzellen tun S2-Zellen benötigen kein geregelter Atmosphäre, sondern tun auch mit normaler Luft und können sogar in verschlossenen Flaschen aufrechterhalten werden. Ergänzend zu der einfachen RNAi in S2-Zellen ist die Fähigkeit, leicht zu analysieren experimentell induzierten Phänotypen von Phase oder Fluoreszenzmikroskopie von festen oder lebenden Zellen. S2 Zellen wachsen in Kultur als eine einzige Monolage aber nicht angezeigt, wenden Sie Hemmung. Stattdessen neigen Zellen in Kolonien in dichten Kulturen wachsen. Bei geringer Dichte, S2 Kulturen auf Glas-oder Gewebekultur-behandelte Kunststoff gewachsen sind rund und lose befestigt. Allerdings kann die Zytologie von S2-Zellen stark durch die sie dazu veranlassen weitgehend flach durch kurzes kultiviert auf einer Fläche mit dem Lektin Concanavalin A (ConA) 3 beschichtet verbessert werden. S2-Zellen können auch stabil mit Fluoreszenz-markierten Marker zu beschriften Strukturen oder Organellen Interesse an Live-oder fixierten Zellen transfiziert werden. Daher ist das Szenario für die mikroskopische Analyse von Zellen: Erstens, S2-Zellen (die Transgene mit Tags Marker zum Ausdruck besitzen) werden durch RNAi behandelt, um ein Zielprotein (s) zu beseitigen. RNAi-Behandlung Zeit kann eingestellt werden, um Unterschiede in Protein zu ermöglichen turn-over-Kinetik und die Zelle Trauma / Tod zu minimieren, wenn das Zielprotein für die Lebensfähigkeit wichtig. Anschließend werden die behandelten Zellen zu einer Schale mit einem Deckglas vorbeschichtet mit conA, um Zellen zu verbreiten induzieren und fest mit dem Glas haften übertragen. Schließlich werden die Zellen mit dem Forscher die Wahl der Mikroskopie-Modi abgebildet. S2 Zellen sind besonders gut für Studien erfordern erweiterte Visualisierung von lebenden Zellen, da diese Zellen bei Raumtemperatur und normaler Atmosphäre gesund zu bleiben.

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Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Drosophila Schneider (S2) Zellen sind ein zunehmend beliebtes System für die Entdeckung und funktionelle Analyse von Genen. Unser Ziel ist es, einige der mikroskopischen Techniken, die S2-Zellen zu machen, wie eine zunehmend wichtige experimentelle System zu beschreiben.

Vorbereitung der Drosophila S2-Zellen für Lichtmikroskopie

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Vorbereitung der Embryonen für Elektronenmikroskopie der Drosophila Embryonale Herz Rohr

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Forschung

Biologie

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Prüfung der<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven Tracheal Terminal-Cells durch Lichtmikroskopie

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organell-Transport in kultivierten<em&gt; Drosophila</em&gt; Zellen: S2-Zelllinie und primären Neuronen.

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In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

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In vivo Klonale Verfolgung von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen durch Fünf Fluoreszierende Proteine ​​mit Hilfe der konfokalen und Multiphotonen Mikroskopie Markierte

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

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In-vivo-4-Dimensional-Tracking von hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen im erwachsenen Maus Schädeldachknochenmark

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Erzeugen eines &quot;humanisierte&quot;<em&gt; Drosophila</em&gt; S2-Zelllinie Sensitive pharmakologische Hemmung der Kinesin-5

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Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

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Biologische Probenvorbereitung durch Hochdruck gefrieren, Mikrowellen-gestützte Kontrastverstärkung und minimale Harz einbetten für Volume Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Licht-Spot-basierter Assay zur Analyse von Drosophila Larval Phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

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Kryo-elektronenmikroskopische Gittervorbereitung für zeitaufgelöste Studien mit einem neuartigen Robotersystem, Spotiton

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