Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
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Este trabalho foi financiado em parte pelo Instituto Nacional do Câncer P30 CA23074, a American Cancer Society Research Grant Institucional 74-001-31, ea Univ. do Arizona GI SPORE (NCI / NIH CA9506O).

1. Preparar as células para microscopia S2 Schneider células S2 foram derivadas de embriões tripsinizados tardia de Oregon R Drosophila. Cultura original Schneider consistia em uma mistura de tipos de células, mas tornou-se mais homogênea com passagem contínua 1. Eles foram descritos como sendo de macrófagos-like (são fagocíticas) com hemócitos-como a expressão do gene. Células S2 pode ser obtido a partir da ATCC, DGRC, ou Invitrogen. A...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

Para o campo de biologia celular, um sistema ideal seria barato de manter, fácil de manipular, e passíveis de uma variedade de técnicas. Células Drosophila S2 satisfazer essas exigências, e assim eles tornaram-se rapidamente o sistema de escolha para um crescente número de celular laboratórios de biologia. Nós apresentamos um breve resumo dos métodos para preparar células S2 para microscopia. Uma virtude notável de células S2 é o fato de que eles crescem bem em atmosfer...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

O sistema experimental ideal seria barato e fácil de manter, passíveis de uma variedade de técnicas, e seria apoiado por uma extensa literatura e banco de dados seqüência do genoma. Células cultivadas Drosophila S2, o produto de embriões disassociated 20-24 horas de idade 1, possui todas essas propriedades. Conseqüentemente, as células S2 são extremamente bem adaptados para a análise de processos celulares, incluindo a descoberta de genes que codificam os componentes moleculares do processo ou mecanismo de interesse. As características de células S2 que são mais responsáveis ​​pela sua utilidade é a facilidade com que eles sejam mantidos, a sua sensibilidade apurada para double-stranded (ds) RNA de interferência mediada (RNAi), e sua docilidade para microscopia de fluorescência como ao vivo ou fixo células. Células S2 podem ser cultivadas em uma variedade de meios, incluindo uma série de baixo custo, disponíveis comercialmente, totalmente definido, sem soro media 2. Além disso, eles crescem de forma otimizada e rapidamente a 21-24 ° C e podem ser cultivadas em uma variedade de recipientes. Ao contrário das células de mamíferos, as células S2 não necessitam de um ambiente regulado, mas sim fazer o bem com o ar normal e pode até mesmo ser mantido em frascos lacrados. Complementando a facilidade de RNAi em células S2 é a capacidade de analisar rapidamente fenótipos experimentalmente induzida por fase ou microscopia de fluorescência de células fixas ou ao vivo. Células S2 crescer em cultura como uma monocamada única, mas não exibem inibição por contato. Em vez disso, as células tendem a crescer em colônias nas culturas densas. Em baixa densidade, culturas S2 cultivadas em vidro ou plástico da cultura de tecidos tratados são redondos e fracamente ligados. No entanto, a citologia de células S2 pode ser muito melhorada, induzindo-os a se achatar extensivamente através da cultura brevemente as sobre uma superfície revestida com a lectina, concanavalina A (ConA) 3. Células S2 também pode ser estavelmente transfectadas com marcadores fluorescentes marcadas para estruturas rótulo ou organelas de interesse em células vivas ou fixos. Portanto, o cenário habitual para a análise microscópica de células é esta: primeiro, as células S2 (que pode possuir para expressar transgenes marcadores marcados) são tratados por RNAi para eliminar uma proteína-alvo (s). RNAi tempo de tratamento pode ser ajustado para permitir que as diferenças em proteína turn-over cinética e para minimizar o trauma celular / morte, se a proteína-alvo é importante para a viabilidade. Em seguida, as células tratadas são transferidos para um prato contendo uma lamela pré-revestida com ConA para induzir as células a se espalhar e firmemente aderem ao vidro. Finalmente, as células são gravadas com a escolha do pesquisador de modos de microscopia. Células S2 são particularmente bons para estudos que necessitem de visualização alargado de células vivas uma vez que estas células se manter saudável à temperatura ambiente e atmosfera normal.

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Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Drosophila Schneider (S2), as células são um sistema cada vez mais popular para a descoberta e análise funcional de genes. Nosso objetivo é descrever algumas das técnicas microscópicas que formam células S2 tal sistema cada vez mais importante experimental.

Preparação de Drosophila Células S2 para microscopia de luz

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

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Preparação de embriões de Microscopia Eletrônica do Drosophila Tubo cardíaco embrionário

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Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

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Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

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Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Gerando um &quot;humanizado&quot;<em&gt; Drosophila</em&gt; S2 linha de células sensíveis a inibição farmacológica de cinesina-5

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