Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis av National Cancer Institute P30 CA23074, American Cancer Society Institutional Research Grant 74-001-31, och Univ.. Arizona GI SPORE (GNI / NIH CA9506O).

1. Förbereda S2 celler för mikroskopi Schneider S2 celler från trypsinized sent embryon i Oregon R Drosophila. Schneiders ursprungliga kulturen bestod av en blandning av celltyperna, men de blev mer homogen med fortsatt passage 1. De har beskrivits som makrofager-liknande (de är fagocytos) med hemocyte-liknande genuttryck. S2 celler kan erhållas från ATCC, DGRC eller Invitrogen. A. Val av odlingsmedium Ett antal m...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

För cellbiologi området, skulle ett idealiskt system vara billig att underhålla, lätt att manipulera, och kan bli föremål för en mängd olika tekniker. Drosophila S2 celler uppfyller dessa krav, och så de har snabbt blivit det system med valet för ett växande antal celler biologi labb. Vi har presenterat en kort översikt av de metoder för att förbereda S2 celler för mikroskopi. En anmärkningsvärd kraft av S2 celler är att de växer bra i normal atmosfär och rumstem...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

Det idealiska experimentella system skulle vara billig och lätt att underhålla, som lämpar sig för olika tekniker, och skulle stödjas av en omfattande litteratur och arvsmassa databas. Odlade Drosophila S2 celler, en produkt av skiljas 20-24 timmar gamla embryon 1, har alla dessa egenskaper. Följaktligen S2 celler är mycket väl lämpad för analys av cellulära processer, inklusive upptäckten av gener som kodar för de molekylära komponenterna i processen eller mekanism av intresse. Funktionerna i S2 celler som är mest ansvariga för deras nytta är den lätthet med vilken de underhålls, deras utsökta känslighet för dubbel-strängat (DS) RNA-medierad interferens (RNAi), och deras spårbarhet för att fluorescensmikroskopi som antingen bor eller fast celler. S2 celler kan odlas i en mängd olika medier, inklusive ett antal billiga, kommersiellt tillgänglig, fullt definierat, serum-fria medier 2. Dessutom växer de optimalt och snabbt vid 21-24 ° C och kan odlas i en mängd olika behållare. Till skillnad från däggdjursceller, kräver S2 celler inte är en reglerad atmosfär, utan istället göra bra med vanlig luft och kan även hållas i slutna kärl. Som komplement till enkel RNAi i S2 celler är förmågan att snabbt analysera experimentellt inducerad fenotyper av fas eller fluorescensmikroskopi av fasta eller levande celler. S2 celler växer i kultur som ett enda monolager men visa inte kontakt hämning. Istället celler tenderar att växa i kolonier i täta kulturer. Vid låga densitet, S2 kulturer som odlas på glas eller vävnadsodling behandlade plast är runda och löst bifogade. Däremot kan cytologi på S2 celler bli mycket bättre genom att få dem att platta i stor utsträckning av kort odling dem på en yta belagd med lectin, concanavalin A (Cona) 3. S2 celler kan också vara stabilt transfererats med fluorescerande-märkta markörer för att märka strukturer och organeller av intresse i levande eller fasta celler. Därför är det vanliga scenariot för mikroskopisk analys av celler här: för det första S2 celler (som kan ha transgener uttrycka taggade markörer) behandlas med RNAi för att eliminera ett målprotein (s). RNAi behandlingstiden kan justeras för att möjliggöra för skillnader i protein omsättning kinetik och för att minimera cell trauma / dödsfall om målprotein är viktigt för lönsamheten. Vidare är de behandlade cellerna överföras till en maträtt som innehåller ett täckglas före belagda med Cona att få celler att sprida och tätt följa glaset. Slutligen celler avbildas med forskaren val av mikroskopi lägen. S2 celler är särskilt bra för studier som kräver längre visualisering av levande celler eftersom dessa celler hålla sig frisk i rumstemperatur och normal atmosfär.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Drosophila Schneider (S2) celler är ett allt populärare system för upptäckt och funktionell analys av gener. Vårt mål är att beskriva några av de mikroskopiska tekniker som gör S2 celler såsom en allt viktigare experimentellt system.

Beredning av Drosophila S2 celler för ljusmikroskop

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Undersökning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvernas Trakealtuber Terminal Celler med ljusmikroskop

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organell Transport i Odlade<em&gt; Drosophila</em&gt; Celler: S2 cellinje och primär nervceller.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Klon Spårning av hematopoetiska stam och progenitorceller märkta med fem fluorescerande proteiner med hjälp Konfokal och multifoton mikroskopi

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Spårning av Hematopoietic Stem och stamceller i vuxen mus calvarial Benmärg

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generera en &quot;humaniserad&quot;<em&gt; Drosophila</em&gt; S2 cellinje Känslig för farmakologisk Hämning av Kinesin-5

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

Drosophila Upprättande och Längs avbildning av hjärtfunktionen In Vivo Använda optisk koherens mikroskopi (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiska provberedning genom högtrycks frysning, mikrovågsugn-assisted kontrastförbättring, och Minimal harts inbäddning för volym Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Ljusspot-baserat test för analys av Drosophila larval phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

Cryo-Elektron mikroskopiska rutnät förberedelse för tidsuppgjorda studier med hjälp av ett nytt robotsystem, Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...