Name: preparation of drosophila s2 cells for light microscopy
Uploaded: 2010-06-03T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Kanser Enstitüsü P30 CA23074, Amerikan Kanser Derneği Kurumsal Araştırma Bursu 74-001-31 ve Üniv tarafından desteklendi. Arizona GI SPOR (NCI / NIH CA9506O).

1. Mikroskopi için S2 hücrelerin hazırlanması Schneider S2 hücreleri Oregon R Drosophila tripsinize geç embriyolar elde edildi. Schneider orijinal kültür hücre tiplerinin bir karışımı oluşuyordu ancak 1 ile devam eden geçit daha homojen hale geldi . Hemocyte gibi gen ekspresyonu (onlar fagositik) makrofaj gibi olmak olarak tarif edilmiştir. ATCC, DGRC veya Invitrogen S2 hücreler elde edilebilir. Büyüme orta A. Seçim <p class...

<ol>
	<li>Schneider, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+lines+derived+from+late+embryonic+stages+of+Drosophila+melanogaster.">Cell lines derived from late embryonic stages of Drosophila melanogaster.</a> J Embryol Exp Morphol. 27, 353-365 (1972).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Drosophila+S2+cells+and+their+use+for+RNAi-mediated+loss-of-function+studies+and+immunofluorescence+microscopy.">Culture of Drosophila S2 cells and their use for RNAi-mediated loss-of-function studies and immunofluorescence microscopy.</a> Nat Protoc. 3, 606-611 (2008).</li><li>Rogers, S. L., Rogers, G. C., Sharp, D. J., Vale, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+EB1+is+important+for+proper+assembly,+dynamics,+and+positioning+of+the+mitotic+spindle.">Drosophila EB1 is important for proper assembly, dynamics, and positioning of the mitotic spindle.</a> J Cell Biol. 158, 873-884 (2002).</li><li>Goshima, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genes+required+for+mitotic+spindle+assembly+in+Drosophila+S2+cells.">Genes required for mitotic spindle assembly in Drosophila S2 cells.</a> Science. 316, 417-421 (2007).</li></ol>

Hücre biyolojisi alan için ideal bir sistem, kolay manipüle korumak için ucuz olacağını ve çeşitli teknikler için uygun. Drosophila S2 hücreleri bu gereksinimleri karşılamak ve böylece hızla büyüyen bir hücre sayısı için tercih edilen sistem haline gelmiştir biyoloji laboratuvarları. Biz yöntemleri mikroskopi için S2 hücreleri hazırlamak için kısa bir özetini sundu. Dikkate değer bir erdemdir S2 hücreler normal atmosfer ve oda sıcaklığında iyi bü...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CRL-1963</td>
<td><a href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>DGRC</td>
<td>stock number 6</td>
<td><a href="https://dgrc.cgb.indiana.edu/">https://dgrc.cgb.indiana.edu/</a></td>
</tr>
<tr>
<td>S2 cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>R690-07</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sf900 II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10902-096</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>HyClone SFX-Insect</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH30278</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Insect-Xpress</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BioWhittaker</td>
<td>12-730</td>
<td>serum-free medium</td>
</tr>
<tr>
<td>Schneider's S2 medium</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11720-034</td>
<td>Add 10% (final) heat-inactivated FBS to make complete medium.</td>
</tr>
<tr>
<td>Fetal bovine serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>10438026</td>
<td>heat inactivated</td>
</tr>
<tr>
<td>100x antibiotic solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>91674049</td>
<td>contains penicillin (10000 U/mL), streptomycin (10000 &mu;g/mL), and amphotericin B (25 &mu;g/mL)</td>
</tr>
<tr>
<td>Concanavalin A</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biomedicals</td>
<td>195283</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Formaldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15714</td>
<td>32% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>Methanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mallinckrodt Baker</td>
<td>9049</td>
<td>anhydrous, ACS grade</td>
</tr>
<tr>
<td>Molecular sieves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Acros Organics</td>
<td>19724</td>
<td>type 3A</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

preparation of drosophila s2 cells for light microscopy

Ideal bir deney sistemi, çeşitli teknikler için uygun bakımı için ucuz ve kolay olacağını ve geniş bir literatür ve genom dizisi veritabanı tarafından desteklenen olurdu. Kültüre Drosophila S2 hücreleri, ilişkisiz 20-24 saat eski embriyolar 1 ürün, bütün bu özelliklere sahip. Sonuç olarak, S2 hücreler moleküler sürecin bileşenleri veya ilgi mekanizması kodlayan genlerin keşfi de dahil olmak üzere hücresel süreçlerin analizi için son derece uygundur. Onların yardımcı programı en çok sorumlu olan S2 hücreleri canlı veya sabit olarak korunur kolaylığı, çift iplikli RNA-aracılı (ds) girişim (RNAi), kendine has duyarlılığı ve floresan mikroskopi için tractability hücreleri. S2 hücreleri, ucuz, piyasada bulunan, tam olarak tanımlanmış, serum ücretsiz medya 2 çok sayıda dahil olmak üzere, çeşitli medya yetiştirilebilir . Buna ek olarak, 21-24 ° C&#39;de en iyi ve hızlı bir şekilde büyür ve konteynerlerin çeşitli kültür olabilir. Memeli hücrelerinin aksine, S2 hücrelerinin düzenli bir atmosfer gerektirmez, ancak bunun yerine normal hava ile iyi ve hatta kapalı şişelerde muhafaza edilebilir. S2 hücreleri RNAi kolaylığı tamamlayan faz ya da sabit veya canlı hücrelerin floresan mikroskobu ile deneysel olarak indüklenmiş fenotipleri kolayca analiz yeteneği. S2 hücreleri tek tek tabaka olarak kültür yetişen ancak temas inhibisyonu gösterilecek. Bunun yerine, hücreler yoğun kültürlerde koloniler halinde büyürler. Düşük yoğunluklu, S2 kültürleri, yuvarlak ve gevşek bağlı cam veya doku kültürü ile tedavi edilen plastik yetişir. Ancak, S2 hücrelerinin sitoloji lektin, Concanavalin A (CONA) 3 ile kaplanmış bir yüzey üzerine kısaca kültür onlar tarafından yaygın bir biçimde düzleştirmek için onları teşvik ederek büyük ölçüde geliştirilmiş olabilir. S2 hücreleri de stabil bir şekilde etiket yapıları veya canlı ya da sabit hücrelerin ilgi organelleri floresan etiketli işaretleri ile transfekte olabilir. Bu nedenle, hücrelerin mikroskobik analizi için her zamanki senaryo şudur: Birincisi, S2 hücreleri (etiketli işaretleyicileri ifade transgenlerin sahip) bir hedef protein (ler) ortadan kaldırmak için RNAi tarafından tedavi edilir. RNAi tedavi süresi protein farklılıkların izin ayarlanabilir hedef protein canlılığı için önemli ise kinetiği ters çevirin ve hücre travma / ölümü en aza indirmek için. Daha sonra, tedavi edilen hücrelerin yaymak için hücreler neden ve sıkıca cama yapışır CONA önceden kaplı lamel içeren bir çanak aktarılır. Son olarak, hücreler araştırmacı mikroskopi modları seçimi ile görüntülü. S2 hücreler, bu hücrelerin, oda sıcaklığında ve normal atmosfer sağlıklı kalmak, canlı hücreleri, uzun görselleştirme gerektiren çalışmalar için özellikle iyi.

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy at JoVE.com

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Drosophila Schneider (S2) hücreleri genlerin keşfi ve fonksiyonel analiz için giderek daha popüler bir sistem. Amacımız giderek daha önemli bir deneysel sistem S2 hücrelerin mikroskobik teknikler bazı tanımlamak için.

Hazırlanması Drosophila Işık Mikroskopi S2 hücreleri

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Elektron Mikroskobu için embriyo Hazırlık Drosophila Embriyonik kalp tüpü

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

İncelenmesi<em&gt; Drosophila</emIşık Mikroskopi tarafından&gt; Larva Trakeal Terminal Hücreleri

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Organelle Transport in Cultured Drosophila Cells: S2 Cell Line and Primary Neurons.

Kültürlü organel Ulaşım<em&gt; Drosophila</em&gt; Hücreler: S2 Hücre Hattı ve İlköğretim Nöronlar.

Drosophila S2 cells plated on a coverslip in the presence of any actin-depolymerizing drug form long unbranched processes filled with uniformly polarized ...

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

In vivo Clonal Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells Marked by Five Fluorescent Proteins using Confocal and Multiphoton Microscopy

Eşodaklı ve multiphoton Mikroskopi kullanarak beş Floresan Proteinleri ile işaretlenmiş Hematopoetik kök hücrelerin in vivo klonal Takip

We developed and validated a fluorescent marking methodology for clonal tracking of hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) with high spatial and ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

Yetişkin Fare Kalvaryal Kemik İliği içinde Hematopoietik kök hücrelerin Vivo 4-Boyutlu Takip

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Generating a &#34;Humanized&#34; Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Generating a "Humanized" Drosophila S2 Cell Line Sensitive to Pharmacological Inhibition of Kinesin-5

Bir &quot;humanize&quot; oluşturuluyor<em&gt; Drosophila</emKinesin-5 Farmakolojik inhibisyonu için&gt; S2 Hücre Hattı Duyarlı

Kinetochores are large protein-based structures that assemble on centromeres during cell division and link chromosomes to spindle microtubules. Proper ...

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy (OCM)

Drosophila Preparation and Longitudinal Imaging of Heart Function In Vivo Using Optical Coherence Microscopy OCM

Drosophila Hazırlama ve Optik Koherens Mikroskobu Kullanımı In Vivo Kalp Fonksiyonu Boyuna Görüntüleme (OCM)

Longitudinal study of the heartbeat in small animals contributes to understanding structural and functional changes during heart development. Optical ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Yüksek basınç dondurucu, mikrodalga destekli kontrast geliştirme ve en az reçine birim görüntüleme için katıştırma tarafından biyolojik örnek hazırlama

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Drosophila Larva Fototaksisanalizi için Hafif Nokta Tabanlı Tahlil

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Cryo-Electron Microscopic Grid Preparation for Time-Resolved Studies using a Novel Robotic System, Spotiton

Yeni Bir Robotik Sistem Kullanarak Zaman Çözümlenen Çalışmalar için Kriyo-Elektron Mikroskobik Izgara Hazırlığı, Spotiton

The capture of short-lived molecular states triggered by the early encounter of two or more interacting particles continues to be an experimental ...