ابدأ بقياس تركيز الخلايا العضلية البطينية البطينية للفئران الوليدية باستخدام مقياس الدم. قم بتخفيف محلول تعليق الخلية إلى 3000 خلية لكل ملليلتر ، مع alpha MEM الذي يحتوي على 10٪ FBS معطل بالحرارة. توزيع 100 ميكرولتر من عضلة القلب البطينية المخففة في كل بئر من لوحات البئر 96 غير اللاصقة للخلية.
أجهزة الطرد المركزي الخلايا لمدة خمس دقائق عند 100 G.وزرعها لمدة يومين إلى ثلاثة أيام في حاضنة زراعة الخلايا ، مع 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. بعد الحضانة ، قم باستنشاق وسط الثقافة من كرات خلايا عضلة القلب للفئران المصنفة في لوحة البئر 96 غير اللاصقة. ثم ، نقل كرات عضلة القلب من كل بئر إلى أنبوب 15 ملليلتر.
أجهزة الطرد المركزي كرات عضلة القلب ونضح طاف. ثم اغسلها باستخدام مخزن مؤقت ADS. لتسهيل تتبع خلايا عضلة القلب في الفئران بعد التطعيم ، قم بتلطيخ الخلايا باستخدام PKH26.
قبل الطرد المركزي للخلايا ، تتبع تطور كرات عضلة القلب بيديم من خلال مراقبتها تحت المجهر بانتظام بعد البذر. ابدأ في تحضير جهاز الحقن الرئيسي لحقن كرة عضلة القلب الوليدية باستخدام إبرة قياس 29 وطول 50 ملم مزودة بحقنة. قم بتوصيل إبرة حقنة نقل الطاقة بقياس 18 ملليلتر واحد بأنبوب رفيع من مادة البولي بروبيلين مع قابلية توسعة منخفضة التجويف.
نضح الماء باستخدام حقنة ، وإزالة جميع الفقاعات من المحقنة والأنابيب المتصلة. كرر ذلك لإبرة قياس 18 أخرى. بعد ذلك ، قم بتوصيل الجانب الآخر من أنبوب نقل الطاقة بإبرة قياس 18 لنفس المحقنة المليلتر.
قم بتأكيد انتقال الطاقة الناجح عن طريق دفع مكبس حقنة لأسفل ، ومكبس حقنة آخر لأعلى. بمجرد الانتهاء من ذلك ، ضع المحقنة في مضخة حقنة. بعد ذلك ، قم بإعداد نظام التبريد عن طريق توصيل الأنبوب النحاسي الملفوف بإحكام بالخلية التي تحتوي على جزء من حقنة حقن الخلية.
ترك 10 ملليمتر من الأنابيب الزائدة في كلا الطرفين. قم بتوصيل الأنبوب النحاسي بالأنبوب البلاستيكي المرن قبل توصيل الأطراف الأخرى للأنبوب البلاستيكي بمضخة خارجية. املأ الخط بماء التبريد ، واغمر الأنبوب النحاسي الزائد في الثلج المجروش لتبريد الماء.
يحافظ نظام التبريد هذا على محلول تعليق الخلية في الأسطوانة عند حوالي 2 درجة مئوية.