首先使用血细胞计数器测量新生儿大鼠心室心肌细胞浓度。将细胞悬浮液稀释至每毫升 3, 000 个细胞,用含有 10% 热灭活 FBS 的 α MEM。将100微升稀释的心室心肌细胞分布在细胞的非粘性96孔板的每个孔中。
将细胞以 100 G 离心 5 分钟,然后在细胞培养箱中用 5% 二氧化碳在 37 摄氏度下培养 2 至 3 天。孵育后,从接种在非粘性96孔板中的大鼠心肌细胞球中吸出培养基。然后,将心肌细胞球从每个孔转移到15毫升管中。
离心肌细胞球并吸出上清液。然后,使用 ADS 缓冲液清洗它们。为了便于在植入后追踪大鼠中的心肌细胞,用PKH26染色细胞。
在离心细胞之前,通过在接种后定期在显微镜下观察它们来跟踪bidim心肌细胞球的发育。开始准备用于新生儿心肌细胞球注射的主要注射装置,使用配备注射器的 29 号、50 毫米长针头。将 18 号 1 毫升动力转移注射器针头连接到具有低管腔膨胀性的薄聚丙烯管上。
使用注射器吸出水,并从注射器和连接的管子中去除所有气泡。对另一个 18 号针重复此操作。然后,将动力传输管的另一侧连接到同一毫升注射器的 18 号针头。
通过向下推动一个注射器柱塞,向上推动另一个注射器柱塞来确认电源转换成功。完成后,将注射器放入注射泵中。接下来,通过将紧密盘绕的铜管连接到包含部分细胞注射注射器的细胞来设置冷却系统。
在两端留出 10 毫米的多余管道。在将塑料管的另一端连接到外部泵之前,将铜管连接到柔性塑料管。用冷却水填充管路,将多余的铜管浸入碎冰中以冷却水。
该冷却系统将圆柱体内的细胞悬浮液保持在大约 2 摄氏度。