Begynd med at måle koncentrationen af neonatal rotteventrikulær kardiomyocytter ved hjælp af et hæmocytometer. Fortynd cellesuspensionsopløsningen til 3.000 celler pr. Milliliter, med alfa MEM indeholdende 10% varmeinaktiveret FBS. Fordel 100 mikroliter af den fortyndede ventrikulære kardiomyocyt i hver brønd i cellens ikke-klæbende 96 brøndplader.
Centrifuger cellerne i fem minutter ved 100 G.Og kultur dem i to til tre dage i cellekulturinkubatoren med 5% kuldioxid ved 37 grader Celsius. Efter inkubation aspireres kulturmediet fra rottekardiomyocytkuglerne podet i den ikke-klæbende 96 brøndplade. Overfør derefter kardiomyocytkuglerne fra hver brønd til et 15 ml rør.
Kardiomyocytkuglerne centrifugeres og supernatanten suges til aspatiner. Vask dem derefter ved hjælp af en ADS-buffer. For at lette sporingen af kardiomyocytcellerne i rotten efter engraftment, pletter cellerne med PKH26.
Før du centrifugerer cellerne, skal du spore udviklingen af bidim cardiomyocytkugler ved at observere dem under mikroskopet regelmæssigt efter såning. Begynd at forberede hovedinjektionsapparatet til en neonatal kardiomyocytkugleinjektion ved hjælp af en 29 gauge, 50 millimeter lang nål udstyret med en sprøjte. Tilslut en 18 gauge en milliliter sprøjtenål til en tynd polypropylenrør med lav lumen udvidelsesevne.
Opsug vandet ved hjælp af en sprøjte, og fjern alle boblerne fra sprøjten og de tilsluttede rør. Gentag det for en anden 18 gauge nål. Tilslut derefter den anden side af kraftoverføringsrøret til 18 gauge nålen på den samme en milliliter sprøjte.
Bekræft den vellykkede strømovergang ved at skubbe et sprøjtestempel ned og et andet sprøjtestempel op. Når du er færdig, skal du sætte sprøjten i en sprøjtepumpe. Opsæt derefter kølesystemet ved at fastgøre det tæt oprullede kobberrør til cellen, der indeholder en del af celleinjektionssprøjten.
Efterlader 10 millimeter overskydende rør i begge ender. Tilslut kobberrøret til den fleksible plastslange, før du tilslutter de andre ender af plastslangen til en ekstern pumpe. Fyld ledningen med kølevand, og nedsænk det overskydende kobberrør i knust is for at afkøle vandet.
Dette kølesystem opretholder celleophængsopløsningen i cylinderen ved ca. 2 grader Celsius.