Name: Preparation of the Neonatal Rat Cardiomyocyte Balls for the Slow Injection Method (Video) | JoVE
Uploaded: 2023-04-21T14:25:00
Duration: 2 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of the Neonatal Rat Cardiomyocyte Balls for the Slow Injection Method at JoVE.com

preparation of the neonatal rat cardiomyocyte balls for the slow injection method

A Novel Cell Injection Method with Minimum Invasion

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of the Neonatal Rat Cardiomyocyte Balls for the Slow Injection Method at JoVE.com

Preparation of the Neonatal Rat Cardiomyocyte Balls for the Slow Injection Method (Video) | JoVE 

Voorbereiding van de neonatale cardiomyocytenballen van ratten voor de langzame injectiemethode

Begin met het meten van de concentratie van neonatale ventriculaire cardiomyocyten bij ratten met behulp van een hemocytometer. Verdun de celsuspensieoplossing tot 3.000 cellen per milliliter, waarbij alfa-MEM 10% warmte-geïnactiveerde FBS bevat. Verdeel 100 microliter van de verdunde ventriculaire cardiomyocyt in elk putje van de niet-klevende 96-putjes van de cel.Centrifugeer de cellen gedurende vijf minuten bij 100 G.En kweek ze gedurende twee tot drie dagen in de celkweekincubator, met 5% koolstofdioxide bij 37 graden Celsius. Zuig na incubatie het kweekmedium op uit de rattencardiomyocytenballen die in de niet-klevende plaat met 96 putjes zijn gezaaid. Breng vervolgens de cardiomyocytenballen van elk putje over naar een buis van 15 milliliter.Centrifugeer de cardiomyocytenballen en zuig de supernatant op. Was ze vervolgens met behulp van een ADS-buffer. Om het volgen van de cardiomyocytcellen in de rat na implantatie te vergemakkelijken, kleurt u de cellen met PKH26.Voordat u de cellen centrifugeert, moet u de ontwikkeling van bidim-cardiomyocytenballen volgen door ze na het zaaien regelmatig onder de microscoop te observeren. Begin met het voorbereiden van het hoofdinjectieapparaat voor een neonatale cardiomyocytenbalinjectie met behulp van een 29 gauge, 50 millimeter lange naald uitgerust met een spuit. Sluit een 18 gauge injectiespuitnaald van één milliliter aan op een dunne polypropyleen buis met een lage uitbreidbaarheid van lumen.Zuig het water op met een injectiespuit en verwijder alle luchtbellen uit de spuit en de aangesloten slangen. Herhaal dit voor nog een naald van 18 gauge. Sluit vervolgens de andere kant van de aandrijfslang aan op de 18 gauge naald van dezelfde milliliterspuit.Bevestig de succesvolle krachtoverbrenging door de zuiger van de ene spuit naar beneden te duwen en de andere zuiger van de spuit omhoog. Als u klaar bent, plaatst u de spuit in een spuitpomp. Stel vervolgens het koelsysteem in door de strak opgerolde koperen buis te bevestigen aan de cel met een deel van de celinjectiespuit.Laat aan beide uiteinden 10 millimeter overtollige buis over. Sluit de koperen slang aan op de flexibele plastic slang voordat u de andere uiteinden van de plastic slang aansluit op een externe pomp. Vul de leiding met koelwater en dompel de overtollige koperen buis onder in gemalen ijs om het water af te koelen.Dit koelsysteem houdt de celsuspensieoplossing in de cilinder op ongeveer 2 graden Celsius.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Preparation of the Neonatal Rat Cardiomyocyte Balls for the Slow Injection Method

A Novel Minimally Invasive Slow Injection Method for Reducing Tissue Injury

A Novel Cell Injection Method with Minimum Invasion (Video) | JoVE 

Een nieuwe celinjectiemethode met minimale invasie

Directly injecting cells into tissues is a necessary process in cell administration and/or replacement therapy. The cell injection requires a sufficient ...

Preparation of Cardiomyocytes and Setting-Up the Apparatus for the Slow Injection Method

Preparation of Cardiomyocytes and Setting-Up the Apparatus for the Slow Injection Method (Video) | JoVE 

Bereiding van cardiomyocyten en opstelling van de apparatuur voor de langzame injectiemethode