हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके नवजात चूहे वेंट्रिकुलर कार्डियोमायोसाइट्स एकाग्रता को मापकर शुरू करें। सेल निलंबन समाधान को 3,000 कोशिकाओं प्रति मिलीलीटर तक पतला करें, जिसमें अल्फा एमईएम में 10% गर्मी निष्क्रिय एफबीएस होता है। सेल के गैर-चिपकने वाले 96 वेल प्लेटों के प्रत्येक कुएं में पतला वेंट्रिकुलर कार्डियोमायोसाइट के 100 माइक्रोलीटर वितरित करें।
100 डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज करें और उन्हें सेल कल्चर इनक्यूबेटर में दो से तीन दिनों के लिए कल्चर करें, जिसमें 37 डिग्री सेल्सियस पर 5% कार्बन डाइऑक्साइड हो। इनक्यूबेशन बाद, गैर-चिपकने वाला 96 वेल प्लेट में बीज ति चूहे कार्डियोमायोसाइट गेंदों से कल्चर माध्यम को एस्पिरेट करें। फिर, कार्डियोमायोसाइट्स गेंदों को प्रत्येक कुएं से 15 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें।
कार्डियोमायोसाइट्स गेंदों को सेंट्रीफ्यूज करें और सुपरनैटेंट को एस्पिरेट करें। फिर, उन्हें एडीएस बफर का उपयोग करके धो लें। एनग्राफमेंट के बाद चूहे में कार्डियोमायोसाइट्स कोशिकाओं की ट्रैकिंग की सुविधा के लिए, पीकेएच 26 के साथ कोशिकाओं को दाग दें।
कोशिकाओं को सेंट्रीफ्यूज करने से पहले, बीज बोने के बाद नियमित रूप से माइक्रोस्कोप के नीचे उन्हें देखकर बिडिम कार्डियोमायोसाइट्स गेंदों के विकास को ट्रैक करें। सिरिंज से लैस 29 गेज, 50 मिलीमीटर लंबी सुई का उपयोग करके नवजात कार्डियोमायोसाइट बॉल इंजेक्शन के लिए मुख्य इंजेक्शन उपकरण तैयार करना शुरू करें। कम लुमेन विस्तार क्षमता के साथ एक पतली पॉलीप्रोपाइलीन ट्यूब के लिए 18 गेज एक मिलीलीटर पावर ट्रांसफर सिरिंज सुई को कनेक्ट करें।
एक सिरिंज का उपयोग करके पानी को एस्पिरेट करें, और सिरिंज और जुड़े ट्यूबों से सभी बुलबुले हटा दें। इसे एक और 18 गेज सुई के लिए दोहराएं। फिर, पावर ट्रांसफर ट्यूब के दूसरे पक्ष को उसी एक मिलीलीटर सिरिंज की 18 गेज सुई से कनेक्ट करें।
एक सिरिंज प्लंजर को नीचे धकेलकर और दूसरे सिरिंज को ऊपर धकेलकर सफल बिजली संक्रमण की पुष्टि करें। एक बार हो जाने के बाद, सिरिंज को एक सिरिंज पंप में सेट करें। इसके बाद, सेल इंजेक्शन सिरिंज के हिस्से वाले सेल में कसकर कुंडलित तांबे की ट्यूब को संलग्न करके शीतलन प्रणाली स्थापित करें।
दोनों सिरों पर 10 मिलीमीटर अतिरिक्त पाइप छोड़ दें। प्लास्टिक टयूबिंग के अन्य सिरों को बाहरी पंप से जोड़ने से पहले कॉपर ट्यूब को लचीली प्लास्टिक टयूबिंग से कनेक्ट करें। ठंडा पानी के साथ लाइन भरें, और पानी को ठंडा करने के लिए अतिरिक्त तांबे की ट्यूब को कुचल बर्फ में डुबोएं।
यह शीतलन प्रणाली सिलेंडर में सेल निलंबन समाधान को लगभग 2 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखती है।