Begynn med å måle konsentrasjonen av nyfødte rotteventrikulære kardiomyocytter ved hjelp av et hemocytometer. Fortynn cellesuspensjonsløsningen til 3.000 celler per milliliter, med alfa MEM inneholdende 10% varmeinaktivert FBS. Fordel 100 mikroliter av den fortynnede ventrikulære kardiomyocytten i hver brønn av cellens ikke-klebende 96 brønnplater.
Sentrifuge cellene i fem minutter ved 100 G.Og kultur dem i to til tre dager i cellekulturinkubatoren, med 5% karbondioksid ved 37 grader Celsius. Etter inkubering, aspirer kulturmediet fra rottekardiomyocytkulene frøet i den ikke-klebende 96-brønnplaten. Deretter overfører du kardiomyocytballene fra hver brønn til et 15 milliliter rør.
Sentrifuge kardiomyocyttkulene og aspirer supernatanten. Deretter vasker du dem med en ADS-buffer. For å lette sporingen av kardiomyocyttcellene i rotta etter engraftment, flekk cellene med PKH26.
Før sentrifugering av cellene, følg utviklingen av bidim kardiomyocyttkuler ved å observere dem under mikroskopet regelmessig etter såing. Begynn å klargjøre hovedinjeksjonsapparatet for en neonatal kardiomyocyttkuleinjeksjon ved hjelp av en 29 gauge, 50 millimeter lang nål utstyrt med en sprøyte. Koble en 18 gauge en milliliter kraftoverføring sprøytenål til et tynt polypropylenrør med lav lumen utvidelsesevne.
Aspirer vannet ved hjelp av en sprøyte, og fjern alle boblene fra sprøyten og de tilkoblede rørene. Gjenta det for en annen 18 gauge nål. Deretter kobler du den andre siden av kraftoverføringsrøret til 18 gauge nålen på samme en milliliter sprøyte.
Bekreft den vellykkede kraftovergangen ved å skyve ett sprøytestempel ned og et annet sprøytestempel opp. Når du er ferdig, sett sprøyten i en sprøytepumpe. Deretter setter du opp kjølesystemet ved å feste det tett kveilede kobberrøret til cellen som inneholder en del av celleinjeksjonssprøyten.
Etterlater 10 millimeter overflødig rør i begge ender. Koble kobberrøret til det fleksible plastrøret før du kobler de andre endene av plastslangen til en ekstern pumpe. Fyll linjen med kjølevann, og senk overflødig kobberrør i knust is for å avkjøle vannet.
Dette kjølesystemet opprettholder cellesuspensjonsløsningen i sylinderen ved ca. 2 grader Celsius.
