Comece medindo a concentração neonatal de cardiomiócitos ventriculares de rato usando um hemocitômetro. Diluir a solução de suspensão celular para 3.000 células por mililitro, com alfa MEM contendo 10% de FBS inativado pelo calor. Distribuir 100 microlitros do cardiomiócito ventricular diluído em cada poço das placas não adesivas de 96 poços da célula.
Centrifugar as células por cinco minutos a 100 G. E cultivá-las por dois a três dias na incubadora de cultura celular, com 5% de dióxido de carbono a 37 graus Celsius. Após a incubação, aspirar o meio de cultura das bolas de cardiomiócitos de rato semeadas na placa não adesiva de 96 poços. Em seguida, transfira as bolas de cardiomiócitos de cada poço para um tubo de 15 mililitros.
Centrifugar as bolas de cardiomiócitos e aspirar o sobrenadante. Em seguida, lave-os usando um buffer ADS. Para facilitar o rastreamento das células do cardiomiócito no Rato após a enxertia, corar as células com PKH26.
Antes de centrifugar as células, acompanhe o desenvolvimento de bolas de cardiomiócitos bidim observando-as sob o microscópio regularmente após a semeadura. Comece a preparar o aparelho de injeção principal para uma injeção neonatal de bola de cardiomiócitos usando uma agulha de calibre 29 e 50 milímetros de comprimento equipada com uma seringa. Conecte uma agulha de seringa de transferência de potência de 18 mililitros a um tubo fino de polipropileno com baixa capacidade de expansão do lúmen.
Aspirar a água usando uma seringa e remover todas as bolhas da seringa e dos tubos conectados. Repita para outra agulha calibre 18. Em seguida, conecte o outro lado do tubo de transferência de energia à agulha de calibre 18 da mesma seringa de um mililitro.
Confirme a transição de energia bem-sucedida empurrando um êmbolo de seringa para baixo e outro êmbolo de seringa para cima. Uma vez feito, coloque a seringa em uma bomba de seringa. Em seguida, configure o sistema de resfriamento conectando o tubo de cobre firmemente enrolado à célula que contém parte da seringa de injeção celular.
Deixando 10 milímetros de excesso de tubulação em ambas as extremidades. Conecte o tubo de cobre ao tubo de plástico flexível antes de conectar as outras extremidades do tubo de plástico a uma bomba externa. Encha a linha com água de resfriamento e mergulhe o excesso de cobre no gelo triturado para resfriar a água.
Este sistema de arrefecimento mantém a solução de suspensão da célula no cilindro a aproximadamente 2 graus Celsius.