Preparation of Cardiomyocytes and Setting-Up the Apparatus for the Slow Injection Method

ゼラチンを秤量してADS緩衝液に溶解し、溶液をオートクレーブ滅菌することにより、10%ゼラチン原液を調製します。10%ゼラチンストックを摂氏37度で液体になるまで温め直します。次に、予熱したADS緩衝液を使用してゼラチンストックを希釈し、最終的な注射可能な5%ゼラチン溶液を得ます。

96個の心筋細胞ボールを100マイクロリットルの予熱した注射液に懸濁します。心筋細胞ボール懸濁液を、余分な空気を吸引せずに細胞注射シリンジにロードします。次に、針を上に向けてシリンジを垂直に持ち、シリンジをタップしてシリンジの上部の隆起部に気泡を集めます。

また、心筋細胞ボールがプランジャーのゴムシールに徐々に沈殿していく様子を観察します。シリンジの垂直位置を維持し、プランジャーをゆっくりと押して、20マイクロリットルの細胞懸濁液がシリンジに残り、心筋細胞ボールがプランジャーのゴム製シールに載ったままになるまで、気泡と余分な細胞懸濁液を捨てます。完了したら、キャップしたシリンジを氷浴に5分間浸し、注射シリンジ装置を動物ステージに固定してから、麻酔ラットへの経皮的細胞移植中にメインシリンジポンプを作動させます。