Bioink Preparation, Acoustic Device Assembly, and Viability Analysis of Cell Spheroids

바이오 잉크 용액을 준비하려면 적당량의 C3A 세포 현탁액을 멸균된 gelMA 용액과 혼합합니다. C3A 세포 스페로이드를 2개의 마이크로몰 세포 추적기 용액으로 37도에서 20분 동안 사전 염색합니다. 세포를 세척하려면 먼저 원심분리를 통해 슈퍼나틴을 제거한 다음 신선한 세포 배양 배지를 추가합니다.

멸균된 음향 장치 챔버에 최소 2ml의 바이오 잉크를 추가합니다. 함수 발생기와 전력 증폭기를 켜서 각 PZT 변환기의 작동을 시작하여 세포 응집체의 3D 어레이를 생성합니다. 청색광을 사용하여 바이오 잉크를 30초 동안 가교하여 3D 하이드로겔 스캐폴드를 만들고 조립된 세포 응집체를 음향적으로 캡슐화합니다.

다음으로, 챔버에서 3D 하이드로겔 스캐폴드를 페트리 접시로 조심스럽게 옮깁니다. 깨끗한 면도기를 사용하여 작은 조각으로 자른 다음 페트리 접시에 세포 배양 배지를 추가합니다. C3A 세포 스페로이드를 섭씨 37도에서 15분 동안 1마이크로리터의 칼슘암과 2마이크로리터의 요오드화 프로피듐을 함유한 PBS 1밀리리터에 서로 다른 배양 시점에서 배양합니다.

하이드로겔 스캐폴드에 내장된 샘플을 PBS로 두 번 헹굽니다. 회수된 스페로이드의 경우 200G에서 5분 동안 원심분리를 수행하고 PBS로 두 번 세척합니다. 형광 현미경을 사용하여 스페로이드를 관찰하고 이미지를 캡처합니다.

세포 응집체는 녹색 형광 신호가 있는 일반 3D 도트 어레이 패턴으로 배열되었습니다. 조립된 C3A gelMA 응집체는 점차적으로 통합되어 3일째에 단단한 스페로이드를 형성했으며 스페로이드 직경이 증가했습니다. 세포 스페로이드의 생존력은 3일째 이전에는 양호했지만 배양 일주일 후에는 약간 감소했습니다.

방출된 스페로이드는 바람직한 생존력 및 알부민의 발현과 함께 좁은 크기 분포를 갖는 양호한 구형 형태를 유지했습니다.