Для начала выберите плоские прямоугольные магниты для сборки наборов магнитов для узоров полос. Силиконовые пластины толщиной 2 миллиметра разрежьте на прямоугольники размером 2 х 8 х 30 миллиметров. Затем соберите прямоугольные магниты и силиконовые пластины слой за слоем.
Для точечных массивов соберите миниатюрные цилиндрические магниты, убедившись, что каждый набор магнитов состоит из 36 цилиндрических магнитов, расположенных в сетке 6 x 6. Чтобы подготовить устройство для культивирования клеток, используйте перфоратор, чтобы создать прямоугольное отверстие размером 1 x 1 сантиметр в силиконовой пластине толщиной 2 миллиметра. Обрежьте силиконовую пластину вокруг отверстия, чтобы создать круглую форму с отверстием в центре.
Для стерилизации поместите формы в ультразвуковой очиститель. Стерилизуйте формочки чистой водой в течение 10 минут. Затем замените воду на 75%-ный этиловый спирт на 10 минут.
Высушите формы в стерилизаторе при температуре 65 градусов Цельсия в течение 60 минут. Затем прикрепите стерилизованную силиконовую форму к предметному стеклянному предметному стеклу диаметром 25 миллиметров и аккуратно прижмите форму, чтобы силикон прилип к стеклу. Поместите наборы магнитов на планшет 6 лунок и расположите устройство для культивирования клеток поверх набора магнитов.
Для приготовления 30 миллимолярного раствора для инъекций Gd-DTPA смешайте 30 микролитров Gd-DTPA с 470 микролитрами полной питательной среды клеток. Для создания клеточных узоров центрифугируют суспензию HUVECs при 200 г в течение 5 минут. И повторно суспендировать гранулу в среде, содержащей Gd-DTPA.
После подсчета клеток отрегулируйте плотность клеток примерно до 2 раз по 10 до 5 клеток на миллилитр, используя среду, содержащую Gd-DTPA. Аккуратно перемешайте клеточную суспензию и добавьте 200 микролитров в полость формы для клеточной культуры, чтобы создать жидкую поверхность до краев. Выдерживают тарелку в течение 3-6 часов, пока клетки не прилипнут к субстрату.
После инкубации замените среду, содержащую Gd-DTPA, на полную питательную среду и извлеките устройство для культивирования клеток из набора магнитов. Чтобы подготовить устройство для культивирования клеток к нанесению полосатого клеточного рисунка, замените толстые силиконовые пластины от устройства тонкими пластинами. После создания образца клеток первого типа, как было показано ранее, переместите устройство для культивирования клеток на 1 миллиметр от магнитов внизу вправо.
Примените ту же процедуру создания шаблона ко второму типу клеток. И переместите третье устройство для культивирования клеток на 1 миллиметр от магнитов внизу вправо. Выкройте третий тип клеток, как показано на рисунке.
После нанесения рисунка на все типы клеток дважды промойте предметные стекла 200 микролитрами PBS. Наконец, замените PBS полной средой для клеточной культуры. Тесты на жизнеспособность, проведенные на HUVEC, обработанных Gd-DTPA в течение 12 часов, не показали значительного снижения жизнеспособности клеток, за исключением 50 миллимолярных Gd-DTPA, что привело к статистической разнице, но сохранило уровень жизни около 90%.
