Name: isolating stem cells from soft musculoskeletal tissues
Uploaded: 2010-07-05T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues at JoVE.com

החוקרים מעריכים מאוד של גב &#39;Haiying פאן מר איאן Bellayr לעזרה הטכנית שלהם על בידוד התא הסרטים הנוכחי מר קייל הולדן ומר יונתן לוקאס על עזרתם על עריכת שקופיות. תודה רבה על הרשימה הבאה של אנשים שהיו מעורבים בפיתוח של טכניקות preplate השתנה בשנים האחרונות: בני הזוג. בורהאן Gharaibeh, BaoHong קאו, דיזי ברידג&#39;ט, תומס ר &#39;פיין, Aiping לו, Hairong פנג, הידקי אושימה, בו זנג, Xiaodong מו, Kimimasa Tobita, רון ינקובסקי, Makato Ikezawa. אנו אסירי תודה על הסיוע הטכני של ג&#39;יימס ה &#39;Cummins, ריאן Pruchnic, יוסף Feduska, רבקה ג Schugar, Haiying פאן וג&#39;סיקה Tebbets. המחבר גם רוצה להכיר תמיכה כספית עבור עבודה זו מפני ניוון האגודה שרירים (מד&quot;א), המכון הלאומי לבריאות (NIH), משרד ההגנה (DOD), בית החולים לילדים של פיטסבורג של UPMC, המחלקה ניתוח אורתופדי, של אוניברסיטת פיטסבורג.

ככלל, הנוהל המלא preplate שונה דורש 1-2 ימים של הכנות, 1 שבוע של ביצוע הליך טכני, 2-3 ימים של הזדהות עם התא immunocytochemistry, וכן תוספת של 2-3 שבועות הרחבה בתאי גזע האוכלוסייה. הציוד הנדרש תרבות בתאי גזע הם דומה לזו של מערכות תרבות אחרים תא הכולל ספסל העליונה צנטריפוגות, CO 2 באינק?...

<ol>
	<li>Gharaibeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+slowly+adhering+cell+fraction+containing+stem+cells+from+murine+skeletal+muscle+by+the+preplate+technique.">Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique.</a> Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).</li><li>Qu-Petersen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+population+of+muscle+stem+cells+in+mice:+potential+for+muscle+regeneration.">Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration.</a> J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).</li><li>Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+muscle-derived+cells+into+myofibroblasts+in+injured+skeletal+muscle.">Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle.</a> Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).</li><li>Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+donor+muscle+precursor+cells+into+an+area+of+muscle+regeneration+in+the+host+mouse.">Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse.</a> J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).</li><li>Lu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+myogenic+progenitor+populations+from+Pax7-deficient+skeletal+muscle+based+on+adhesion+characteristics.">Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics.</a> Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).</li><li>Lee, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+isolation+of+muscle-derived+cells+capable+of+enhancing+muscle+regeneration+and+bone+healing.">Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing.</a> J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).</li><li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+receptors+in+the+maturation-dependent+adenoviral+transduction+of+myofibers.">The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers.</a> Gene Ther. 8, 627-637 (2001).</li><li>Cao, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells+differentiate+into+haematopoietic+lineages+but+retain+myogenic+potential.">Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential.</a> Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).</li><li>Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine+based+on+muscle+stem+cells.">Regenerative medicine based on muscle stem cells.</a> J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).</li><li>Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+medicine+for+the+musculoskeletal+system+based+on+muscle-derived+stem+cells.">Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells.</a> J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).</li></ol>

זה כבר הכיר בכך כמה רקמות בוגרות מכילים בתאי גזע מרובים. במהלך השנים האחרונות של המחקר, בתאי גזע זוהו ברקמות השלד רך, כולל שריר גיד השלד. זה פרוטוקול הנוכחית פרטים הליך המכונה הטכניקה preplate שונה, כי שימש בהצלחה במעבדה שלנו לבודד בתאי גזע בוגרים של גידים שרירי השלד. באמצ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMEM</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#11995-073</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#10437-028</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heat-inactivated horse serum</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#26050-088</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chick embryo extract</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Accurate Chemical</td>
<td>#CE650T-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>100U ml penicillin/streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#14190-250</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hank&#x2019;s Buffered Salt Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#24020-117</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase type XI 0.2%(wt/vol)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>#C7657</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dispase2.4U ml</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#17105-041</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>#15400-054</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>#C-9791</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>#D-2650</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolating stem cells from soft musculoskeletal tissues

בתאי גזע בוגרים כבר מזמן דנו לגבי היישום שלהם ברפואה רגנרטיבית. בתאי גזע בוגרים יצרו מידה רבה של התרגשות לטיפול רקמות פצועים וחולים בגלל היכולות המרשימות שלהם לעבור רב השושלת התמיינות תאים ויכולת התחדשות עצמית שלהם. והכי חשוב, התכונות הללו הפכו אותם יתרון לשימוש טיפולים עצמיים השתלת תאים. הפרוטוקול הנוכחי יהיה להכניס את הקוראים לטכניקה preplate שונה שבו הרקמות הרכות של מערכת השלד, שריר גיד למשל ואת, הם 1<sup&gt; רחוב</sup&gt; ניתק enzymatically ואז להציב צלוחיות קולגן מצופה בינוני. Supernatant, המורכבת בינוני התאים הצפים הנותרים, מועבר סדרתי היומי צלוחיות חדשות. בתאי גזע האיטי ביותר לדבוק צלוחיות אשר בדרך כלל לוקח 5-7 ימים (העברות סדרתי או preplates). באמצעות טכניקה זו, בתאי גזע בוגרים הנמצאים ברקמות אלה ניתן לקצור בקלות דרך למדי פולשני ההליכים.

Watch this Scientific Journal Video about Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues at JoVE.com

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

בידוד גזע בוגרים תאים ברקמות הרכות השלד מבוסס על מהירות הדבקות של התא בקבוק.

בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft

Adult stem cells have long been discussed in regards to their application in regenerative medicine. Adult stem cells have generated a great deal of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

גזירת בתאי גזע hematopoietic מ Murine בתאי גזע עובריים

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Isolation and Analysis of Hematopoietic Stem Cells from the Placenta

בידוד ניתוח בתאי גזע hematopoietic מן השליה

Hematopoietic stem cells (HSCs) have the ability to self-renew and generate all cell types of the blood lineages throughout the lifetime of an individual. ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

הכרומטין immunoprecipitation מן בתאי גזע עובריים אנושיים

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Derivation of Mouse Trophoblast Stem Cells from Blastocysts

גזירת Trophoblast עכבר בתאי גזע Blastocysts

Specification of the trophectoderm is one of the earliest differentiation events of mammalian development. The trophoblast lineage derived from the ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

בידוד של בתאי גזע xenografts סרטן הלבלב האנושי

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

בידוד של גזע תאים רשתית העין של העכבר

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

בחירה בידוד מושבות של בתאי גזע pluripotent מושרה לתכנות מחדש של Fibroblasts למבוגרים

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

דור של עכברים שמקורם בתאי גזע pluripotent מושרים

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

בידוד תאים כמו Melanocyte-ראשיים מלב העכבר

We identified a novel population of melanocyte-like cells (also known as cardiac melanocytes) in the hearts of mice and humans that contribute to atrial ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

אינדוקציה וניתוח של אפיתל לmesenchymal מעבר

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...