Microinyección de colorante de bromofenol en la región cerebral dirigida en ratones

Comience colocando los instrumentos quirúrgicos estériles en el banco de trabajo. Para asegurar el ratón anestesiado en el marco estereotáxico, mezcle los incisivos superiores con una pinza nasal y estabilice la cabeza con dos barras para las orejas. Con unas tijeras oculares, haga una incisión de 0,5 centímetros en el cuero cabelludo para exponer el cráneo.

Con un bastoncillo de algodón humedecido en peróxido de hidrógeno al 3%, frote el cráneo expuesto para eliminar el periostio. Deja que el cráneo se seque. Fije el taladro al instrumento estereotáxico y ajuste las perillas del brazo estereotáxico.

Con la ayuda de una lupa, coloque la punta del taladro con precisión en la bregma. Registre el valor del eje Z en el bregma utilizando la pantalla digital LCD. Ahora, coloque la punta del taladro en la lambda y registre el valor del eje Z.

Ajuste la pinza nasal para minimizar la diferencia entre los dos valores Z. Coloque la broca en las coordenadas menos 5,2 para X y más 0,8 para Y para medir el valor del eje Z en la dirección ventral dorsal. Vuelva a colocar el taladro en las coordenadas menos 5,2 para X menos 0,8 para Y y vuelva a medir el valor del eje Z.

Ajuste las barras de los oídos a una escala específica. Coloque el taladro en el bregma y ajuste tres coordenadas en la pantalla digital LCD a cero. Con las coordenadas de referencia, coloque el taladro por encima de la región de interés.

Inicie el taladro y bájelo gradualmente con el brazo vertical hasta que el taladro penetre en el cráneo. Limpie los escombros y la sangre con hisopos de algodón. Agregue 25 microlitros de tampón de carga SDS-PAGE que contiene azul de bromofenol y 50 microlitros de agua bidestilada a un tubo de 200 microlitros.

Cubra la ventana craneal con una almohadilla de algodón humedecida con solución salina. Cargue 0,3 microlitros de tinte en la microjeringa. Conecte la jeringa y el microinyector estereotáxico motorizado al brazo estereotáxico.

Coloque la punta de la jeringa en el bregma y ajuste las coordenadas a cero en la pantalla digital LCD. De acuerdo con las coordenadas de referencia, ajuste la aguja en la región de interés. Ajuste la velocidad del inyector a 0,1 microlitros por minuto y encienda el microinyector motorizado, entregando 0,3 microlitros de tinte en la región objetivo.

Después de 10 minutos, retire lentamente el inyector.