Name: human t lymphocyte isolation, culture and analysis of migration in vitro
Uploaded: 2010-06-01T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro at JoVE.com

Dit project werd ondersteund door National Institutes of Health subsidies HL087088 (MK) en HL18208 (MK).

1. Isolatie van menselijke T-lymfocyten <ol><li> Verkrijgen menselijk bloed van een gezonde donor. Laat het bloed op kamertemperatuur (~ 30 min) afkoelen voordat u verder gaat met de volgende stap. </li><li> Voorzichtig Pipetteer 3 ml kamertemperatuur Polymorph dichtheidsgradiënt media in een 8 ml ronde bodem polystyreen buis. Voorzichtig Voeg 3 ml bloed op de top van de Polymorph media. Het is belangrijk om te voorkomen dat het mengen van de twee reagentia. </li><li> Centrifugeer de buizen op 500 xg gedurende 45 min...

<ol>
	<li>Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+integrin+VLA-4+localizes+to+the+lamellipodia+and+mediates+t+cell+migration+on+VCAM-1.">Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1.</a> J Immunol. 183, 359-369 (2009).</li><li>Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonmuscle+myosin+heavy+chain+IIA+mediates+integrin+LFA-1+de-adhesion+during+T+lymphocyte+migration.">Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration.</a> The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).</li><li>Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+integrins+and+their+ligand+interactions.">Leukocyte integrins and their ligand interactions.</a> Immunologic research. , (2009).</li></ol>

In dit experiment geven we details over een eenvoudig systeem om de beweeglijkheid van de primaire menselijke T-lymfocyten te analyseren. In vitro migratie testen zijn gebruikt om de rol van de vele moleculen en signaalwegen die betrokken zijn bij de motoriek van de verschillende celtypes ontleden. Een aantal kritische controles in gedachten te houden bij het ontwerpen van je eigen experiment uit ons protocol zijn: 1) Niet-klevende en niet-klevende integrine substraat coatings, zoals bovine serum albumine (BSA)...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11875</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH300070.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-Step Polymorphs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Accurate Chemical</td>
<td>AN221725</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PHA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Remel/Fisher Scientific</td>
<td>R30852801</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human IL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>202-IL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human IL-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>247-IL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein G</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>19459</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human ICAM-1/Fc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>720-IC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human SDF-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>350-NS</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human t lymphocyte isolation, culture and analysis of migration in vitro

De migratie van T-lymfocyten houdt de lijm interactie van het celoppervlak integrines met liganden uitgedrukt op andere cellen of met extracellulaire matrix eiwitten. De precieze spatiotemporele activering van integrines van een lage affiniteit staat om een ​​hoge affiniteit toestand bij de cel leading edge is belangrijk voor de T-lymfocyt migratie<sup&gt; 1</sup&gt;. Ook terugtrekken van de cel achterrand of uropod, is een noodzakelijke stap in het onderhouden van aanhoudende integrine-afhankelijke T-lymfocyt motiliteit<sup&gt; 2</sup&gt;. Vele therapeutische benaderingen van auto-immuunziekten of ontstekingsziekten doel integrines als een middel om het buitensporige werving en migratie van leukocyten remmen<sup&gt; 3</sup&gt;. De studie van de moleculaire gebeurtenissen die de menselijke T-lymfocyten migratie te reguleren, hebben we gebruik gemaakt een<em&gt; In vitro</em&gt; Systeem naar cel migratie te analyseren op een twee-dimensionale substraat dat de omgeving die een T-lymfocyt tegenkomt bij de werving van het vaatstelsel nabootst. T-lymfocyten worden eerst geïsoleerd uit menselijke donoren en worden vervolgens gestimuleerd en gekweekt voor zeven tot tien dagen. Tijdens de test, zijn T-lymfocyten mogen hechten en migreren op een substraat bekleed met intercellulaire adhesie molecule-1 (ICAM-1), een ligand voor integrine LFA-1, en stromale cel-afgeleide factor-1 (SDF-1). Onze gegevens tonen aan dat T-lymfocyten een trekkende snelheid van ~ 15 micrometer / min vertonen. T-lymfocyt migratie kan worden geremd door integrine blokkade<sup&gt; 1</sup&gt; Of door remmers van de cellulaire actomyosin machines die regelt celmigratie<sup&gt; 2</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro at JoVE.com

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

T-lymfocyt migratie vindt plaats tijdens homing aan lymfoïde organen, het verlaten van het vaatstelsel en het aangaan van perifere weefsels. We beschrijven hier een protocol dat gebruikt kan worden om T-lymfocyten migratie te analyseren<em&gt; In vitro</em&gt;.

Human T-lymfocyt Isolatie, Cultuur en Analyse van de migratie In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon Systeem Wijziging van primaire menselijke T-cellen

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymfocyt Isolatie van Human Skin voor Fenotypische Analyse en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Muis Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolatie en<em&gt; In vitro</em&gt; Differentiatie in T cel subsets

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

Beeldvorming CD4 T Cell interstitiële Migratie in de ontstoken Dermis

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Flow cytometrische analyse van de NK-cel lytische activiteit in humaan volbloed

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Gamma Delta T Cells

Isolatie en Flow cytometrische analyse van Human Endocervicale Gamma Delta T-cellen

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analyse van lymfocyt extravasatie gebruik van een<em&gt; In Vitro</em&gt; Model van het menselijk bloed-hersenbarrière

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Quantifying Human Monocyte Chemotaxis In Vitro and Murine Lymphocyte Trafficking In Vivo

Kwantificeren van menselijke monocyt Chemotaxis In Vitro en lymfkliertest lymfocyt handel In Vivo

Chemotaxis is migration along a specific chemical gradient1. Chemokines are chemotactic cytokines that promote cellular trafficking with anatomic and ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolatie en In Vitro cultuur van lymfkliertest en menselijke alveolaire macrofagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Analysis of Shear Flow-induced Migration of Murine Marginal Zone B Cells In Vitro

Analyse van Shear Flow-geïnduceerde migratie van RattenUitrustingen Marginal Zone B cellen In Vitro

Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...