Name: human t lymphocyte isolation, culture and analysis of migration in vitro
Uploaded: 2010-06-01T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro at JoVE.com

Dieses Projekt wurde von den National Institutes of Health Grants HL087088 (MK) und HL18208 (MK) unterstützt.

1. Isolierung von humanen T-Lymphozyten <ol><li> Erhalten menschlichem Blut von einem gesunden Spender. Lassen Sie das Blut auf Raumtemperatur (~ 30 min), bevor Sie den nächsten Schritt zu kühlen. </li><li> Gently Pipette 3 ml Raumtemperatur Polymorph Dichtegradienten Medien in einer 8 ml-Polystyrol Röhre. Vorsichtig 3 ml Vollblut auf der Oberseite des Polymorph Medien. Es ist wichtig zur Vermeidung einer Vermischung der beiden Reagenzien. </li><li> Zentrifugieren bei 500 xg für 45 Minuten bei Raumtemperatur. </li...

<ol>
	<li>Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+integrin+VLA-4+localizes+to+the+lamellipodia+and+mediates+t+cell+migration+on+VCAM-1.">Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1.</a> J Immunol. 183, 359-369 (2009).</li><li>Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonmuscle+myosin+heavy+chain+IIA+mediates+integrin+LFA-1+de-adhesion+during+T+lymphocyte+migration.">Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration.</a> The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).</li><li>Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+integrins+and+their+ligand+interactions.">Leukocyte integrins and their ligand interactions.</a> Immunologic research. , (2009).</li></ol>

In diesem Experiment, bieten wir Informationen über ein einfaches System, um die Beweglichkeit der primären menschlichen T-Lymphozyten zu analysieren. In-vitro-Assays Migration wurden verwendet, um die Rollen von vielen Molekülen und Signalwege in der Fortbewegung verschiedener Zelltypen beteiligt zu sezieren. Einige kritische Steuerungen im Auge zu behalten, wenn die Gestaltung Ihrer eigenen Experiment aus unserem Protokoll gehören: 1) Non-Klebstoff oder Nicht-Integrin-Haftgrund Beschichtungen, wie Rinders...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>RPMI 1640</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>11875</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>SH300070.03</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Penicillin-Streptomycin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-Step Polymorphs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Accurate Chemical</td>
<td>AN221725</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PHA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Remel/Fisher Scientific</td>
<td>R30852801</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human IL-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>202-IL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human IL-15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>247-IL</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Protein G</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>19459</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human ICAM-1/Fc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>720-IC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rec. human SDF-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems</td>
<td>350-NS</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

human t lymphocyte isolation, culture and analysis of migration in vitro

Die Migration von T-Lymphozyten besteht der Klebstoff Wechselwirkung von Zelloberflächen Integrine mit Liganden auf anderen Zellen oder mit der extrazellulären Matrix exprimiert. Die genaue raumzeitliche Aktivierung der Integrine aus einer geringen Affinität Zustand in einen Zustand hoher Affinität an die Zelle Vorderkante ist für T-Lymphozyten-Migration wichtige<sup&gt; 1</sup&gt;. Ebenso Zurückziehen der Zelle Hinterkante oder uropod, ist ein notwendiger Schritt bei der Aufrechterhaltung persistent Integrin-abhängigen T-Lymphozyten-Motilität<sup&gt; 2</sup&gt;. Viele Therapieansätze für Autoimmun-und entzündlichen Erkrankungen Ziel Integrine als ein Mittel zur Hemmung der übermäßige Rekrutierung und Migration von Leukozyten<sup&gt; 3</sup&gt;. Zur Untersuchung der molekularen Vorgänge, die menschlichen T-Lymphozyten-Migration zu regulieren, haben wir eine genutzt<em&gt; In-vitro-</em&gt; System Zellwanderung auf einer zweidimensionalen Substrat, das die Umgebung, die eine T-Lymphozyten Begegnungen bei der Einstellung aus dem Gefäßsystem imitiert zu analysieren. T-Lymphozyten sind zuerst von menschlichen Spendern isoliert und anschließend angeregt und kultiviert 7-10 Tage. Während des Tests sind T-Lymphozyten erlaubt, festhalten und auf einem Substrat mit ICAM-1 (ICAM-1), einem Liganden für Integrin LFA-1, und Stromazellen cell-derived factor-1 (SDF-1) beschichtet migrieren. Unsere Daten zeigen, dass T-Lymphozyten eine wandernde Geschwindigkeit von ca. 15 mu m / min aufweisen. T-Lymphozyten-Migration kann durch Integrin-Blockade gehemmt werden<sup&gt; 1</sup&gt; Oder durch Inhibitoren des zellulären Actomyosin Maschinen, regelt die Zellwanderung<sup&gt; 2</sup&gt;.

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Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

T-Lymphozyten-Migration tritt bei der Referenzfahrt zu lymphatischen Organen, Ausfahrt aus dem Gefäßsystem, und das Eintreten in den peripheren Geweben. Hier beschreiben wir ein Protokoll, das verwendet werden, um T-Lymphozyten-Migration zu analysieren lassen<em&gt; In-vitro-</em&gt;.

Menschliche T-Lymphozyten-Isolierung, Kultur und Analyse der Migration In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon-System Modifikation von primären menschlichen T-Zellen

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolierung von menschlicher Haut für phänotypische Analyse und<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Zellkultur

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Maus Naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zell-Isolierung und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Differenzierung in T-Zell-Populationen

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

Imaging CD4 T-Zell-Interstitial Migration in den entzündeten Dermis

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Durchflusszytometrische Analyse von natürlichen Killerzellen lytische Aktivität in menschlichem Vollblut

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

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Isolierung und Analyse über Durchflusszytometrie der Menschen Endozervikale Gamma-Delta-T-Zellen

The female reproductive tract (FRT) mucosal immune system serves as the first line of defense. Better knowledge of the genital mucosa is therefore ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analyse von Lymphozyten-Extravasation einer Verwendung<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell des Barrier Menschliches Blut-Hirn

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

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Quantifizierung der menschliche Monocyte Chemotaxis In Vitro und murinen Lymphozyten Menschenhandel In Vivo

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Marginal zone B cells (MZBs) are a population of B cells that reside in the mouse splenic marginal zones that envelop follicles. To reach the follicles, ...