Name: double fluorescence in situ hybridization in fresh brain sections
Uploaded: 2010-08-14T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections at JoVE.com

NIH / NIDCD और श्मिट आरपी के लिए फाउंडेशन के अनुदान द्वारा समर्थित काम करना.

यह प्रोटोकॉल विकसित किया गया था और मानक रेडियोधर्मी और गैर रेडियोधर्मी में स्वस्थानी संकरण विधियों, पहले हमें और दूसरों के द्वारा विकसित मस्तिष्क ऊतक 1-7 में एक या दो प्रतिलेख प्रजातियों का पता...

<ol>
	<li>Jin, L., Lloyd, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization:+methods+and+applications.">In situ hybridization: methods and applications.</a> J Clin Lab Anal. 11, 2-9 (1997).</li><li>Stoler, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization.">In situ hybridization.</a> Clin Lab Med. 10, 215-236 (1990).</li><li>Komminoth, P., Werner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+and+signal+amplification:+approaches+to+increase+the+sensitivity+of+in+situ+hybridization.">Target and signal amplification: approaches to increase the sensitivity of in situ hybridization.</a> Histochem Cell Biol. 108, 325-3233 (1997).</li><li>Kessler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digoxigenin:anti-digoxigenin+(DIG)+technology--a+survey+on+the+concept+and+realization+of+a+novel+bioanalytical+indicator+system.">The digoxigenin:anti-digoxigenin (DIG) technology--a survey on the concept and realization of a novel bioanalytical indicator system.</a> Mol Cell Probes. 5, 161-205 (1991).</li><li>Panoskaltsis-Mortari, A., Bucy, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+hybridization+with+digoxigenin-labeled+RNA+probes:+facts+and+artifacts.">In situ hybridization with digoxigenin-labeled RNA probes: facts and artifacts.</a> Biotechniques. 18, 300-307 (1995).</li><li>Qian, X., Lloyd, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+in+signal+amplification+methods+for+in+situ+hybridization.">Recent developments in signal amplification methods for in situ hybridization.</a> Diagn Mol Pathol. 12, 1-13 (2003).</li><li>Mello, C. V., Jarvis, E. D., Denisenko, N., Rivas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+song-regulated+genes+in+the+brain+of+songbirds.">Isolation of song-regulated genes in the brain of songbirds.</a> Methods Mol Biol. 85, 205-217 (1997).</li><li>Pinaud, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GABAergic+neurons+participate+in+the+brain's+response+to+birdsong+auditory+stimulation.">GABAergic neurons participate in the brain's response to birdsong auditory stimulation.</a> Eur J Neurosci. 20, 1318-1330 (2004).</li><li>Velho, T. A., Pinaud, R., Rodrigues, P. V., Mello, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-induction+of+activity-dependent+genes+in+songbirds.">Co-induction of activity-dependent genes in songbirds.</a> Eur J Neurosci. 22, 1667-1678 (2005).</li><li>Tremere, L. A., Jeong, J. K., Pinaud, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estradiol+shapes+auditory+processing+in+the+adult+brain+by+regulating+inhibitory+transmission+and+plasticity-associated+gene+expression.">Estradiol shapes auditory processing in the adult brain by regulating inhibitory transmission and plasticity-associated gene expression.</a> J Neurosci. 29, 5949-5963 (2009).</li><li>Pinaud, R., Mello, C. V., Velho, T. A., Wynne, R. D., Tremere, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+two+mRNA+species+at+single-cell+resolution+by+double-fluorescence+in+situ+hybridization.">Detection of two mRNA species at single-cell resolution by double-fluorescence in situ hybridization.</a> Nat Protoc. 3, 1370-1379 (2008).</li><li>Pinaud, R., Jeong, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duplex+fluorescence+in+situ+hybridization+in+the+study+of+gene+co-regulation+in+the+vertebrate+brain.+Methods+Mol+Biol.">Duplex fluorescence in situ hybridization in the study of gene co-regulation in the vertebrate brain. Methods Mol Biol.</a> 611, 115-129 (2010).</li></ol>

हम इस प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया है के लिए अध्ययन कैसे हड्डीवाला मस्तिष्क neurochemically और कार्यात्मक आयोजन किया जाता है, और कैसे behaviorally - प्रासंगिक संवेदी उत्तेजनाओं के प्रभाव वयस्क मस्तिष्क 8-10 में न्यूरॉ?...

समाधान <ol><li> बफर धोने स्तंभ: 50 मिलीलीटर पानी DEPC इलाज में 10 मिमी Tris - एचसीएल, 0.15 एम NaCl, 0.05 मिमी EDTA, 50 μg / μl tRNA, 0.1% एसडीएस. </li><li> बफर अवरुद्ध स्तंभ: 10 Tris - एचसीएल मिमी, 50 मिमी NaCl, 50 मिलीलीटर पानी DEPC इलाज में 0.1 मिमी EDTA. </li><li> टीएनटी बफर: 60 मिलीलीटर 1 Tris - एचसीएल एम, 5 एम NaCl के 18 मिलीग्राम और ट्राइटन के 1.8 मिलीग्राम DEPC इलाज पानी की 600 मिलीलीटर में X-100. </li><li> TNB बफर: 100 Tris - एचसीएल मिमी, 8.3 μg / μl BSA, 0.15 एम NaCl और 3% DEPC इलाज पानी में X-100 ट्राइटन. </li><li> ते बफर: 10 मिमी Tris - एचसीएल, 7.5 पीएच प्लस 1 मिमी EDTA, 7.5 पीएच. </li><li> एसिटिलीकरण समाधान: triethanolamine प्लस DEPC इलाज पानी की 200 मिलीलीटर में एसिटिक एनहाइड्राइड के 0.5 मिलीलीटर के 2.7 मिलीलीटर. </li><li> संकरण समाधान: 50% formamide, 2X SSPE, 2 / μg μl tRNA, 1 / μg μl BSA और 1 μg / DEPC का इलाज पानी में एक μl पाली. यह अनुभाग प्रति 16 एल की जरूरत है. </li></ol>

double fluorescence in situ hybridization in fresh brain sections

यहाँ हम एक डबल प्रतिदीप्ति का एक संशोधित संस्करण का वर्णन<em&gt; बगल में</em&gt; संकरण विधि (dFISH) ताजा जमे हुए मस्तिष्क वर्गों में ब्याज की दो mRNAs का पता लगाने के लिए अनुकूलित. हमारे समूह सफलतापूर्वक इस दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया गया है सह - विनियमन जीन का अध्ययन. अधिक विशेष रूप से, हम इस dFISH विधि का इस्तेमाल किया है संरचनात्मक संगठन, neurochemical गुण, और केंद्रीय संवेदी सर्किट में संवेदी अनुभव के प्रभाव, का पता लगाने के एकल कक्ष संकल्प पर. इस प्रोटोकॉल चूहों, चूहों और songbirds से मस्तिष्क के ऊतकों में मान्य किया गया है, लेकिन आसानी से अन्य हड्डीवाला प्रजातियों के लिए अनुकूलनीय है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से गैर - तंत्रिका ऊतकों की एक सरणी के लिए होने की उम्मीद है. इस फिल्म में हम इस प्रक्रिया का मुख्य कदम के एक विस्तृत प्रदर्शन प्रदान करते हैं.

Watch this Scientific Journal Video about Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections at JoVE.com

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

इस प्रोटोकॉल के एक गैर रेडियोधर्मी शामिल<em&gt; स्वस्थानी</em&gt; संकरण प्रक्रिया है कि दो प्रतिलेख प्रजातियों के साथ - साथ पहचान के लिए सक्षम बनाता है, एक एकल कोशिका संकल्प पर, हड्डीवाला मस्तिष्क की पतली वर्गों में.

डबल प्रतिदीप्ति बगल में</emताजा ब्रेन धारा में> संकरण

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology

Lipophilic डाई संयोजन, बगल में संकरण, immunohistochemistry, और प्रोटोकॉल

Going beyond single gene function to cut deeper into gene regulatory networks requires multiple mutations combined in a single animal.  Such analysis of ...

Morphometric Analyses of Retinal Sections

रेटिना धारा की morphometric विश्लेषण

Morphometric analyses of retinal sections have been used in examining retinal diseases. For examples, neuronal cells were significantly lost in the ...

Design and Assembly of an Ultra-light Motorized Microdrive for Chronic Neural Recordings in Small Animals

डिजाइन और छोटे जानवरों में एक अल्ट्रा प्रकाश चिरकारी तंत्रिका रिकॉर्डिंग के लिए Motorized Microdrive की विधानसभा

The ability to chronically record from populations of neurons in freely behaving animals has proven an invaluable tool for dissecting the function of ...

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

Complete Spinal Cord Injury and Brain Dissection Protocol for Subsequent Wholemount In Situ Hybridization in Larval Sea Lamprey

इसके बाद wholemount के लिए पूरी स्पाइनल कॉर्ड चोट और मस्तिष्क विच्छेदन प्रोटोकॉल<em&gt; बगल में</em&gt; लारवल सागर एक प्रकार की मछली में संकरण

After a complete spinal cord injury, sea lampreys at first are paralyzed below the level of transection. However, they recover locomotion after several ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

उच्च संकल्प का उपयोग मस्तिष्क वर्गों में Axonally स्थानीयकृत mRNAs का पता लगाने<em&gt; बगल में</em&gt; संकरण

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

तीव्र<em&gt; बगल में</emसेरोटोनिन सिंड्रोम के साथ चूहे की Paraformaldehyde-उपसर्ग मस्तिष्क पर oligonucleotide जांच का उपयोग कर&gt; संकरण

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

डबल प्रतिदीप्ति का मेल<em&gt; बगल में</em&gt; माउस मस्तिष्क वर्गों में तीन जीनों की अभिव्यक्ति की जांच के लिए Immunolabelling साथ संकरण

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

आरएनए द्वारा टिड्ड एंटीना में गंधी रिसेप्टर जीन का स्थानीयकरण<em&gt; क्षेत्र में</em&gt; संकरण

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

ताजा मानव मस्तिष्क ऊतक से मस्तिष्क केशिकाओं का अलगाव

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Double Direct Injection of Blood into the Cisterna Magna as a Model of Subarachnoid Hemorrhage

सबराचनॉइड हेमरेज के मॉडल के रूप में सिस्टर्ना मैग्ना में रक्त का डबल डायरेक्ट इंजेक्शन

Among strokes, subarachnoid hemorrhage (SAH) consecutive to the rupture of a cerebral arterial aneurysm represents 5-9% but is responsible for about 30% ...

डबल प्रतिदीप्ति बगल में संकरण