Name: in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons
Uploaded: 2010-10-15T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons at JoVE.com

SG wird durch Mittel aus der State University of New York at Buffalo und von John R. Oishei Foundation unterstützt. MK wurde von einem Student Research Award CURCA bei UB unterstützt.

1. Vorbereitung der Reagenzien <ol><li> Bereiten Sie die Dissektion Puffer Vorbereitung, indem Sie die folgenden Verbindungen: 128 mM NaCl, 1 mM EGTA, 4 mM MgCl 2, 2 mM KCl, 5 mM HEPES und 36 mM Saccharose in 1000 ml, pH auf 7,2 und Filter zu sterilisieren. </li></ol> 2. Vorbereitung für die Präparation <ol><li> Siligard cube: Das Gel wird auf etwa einen Zentimeter breit, 1 cm lang und ca. 1cm hoch geschnitten. Das Gel Würfel ist auf einem Glasträger beim Präparieren platziert...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Hurd, D. D., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+mutations+cause+motor+neuron+disease+phenotypes+by+disrupting+fast+axonal+transport+in+Drosophila.">Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila.</a> Genetics. 144, 1075-1085 (1996).</li><li>Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40, 25-40 (2003).</li></ol>

In-vivo-Bildgebung der synaptischen Vesikel Transport innerhalb Drosophila Larve segmentalen Nerven ist ein leistungsfähiges Werkzeug für die Erforschung der Mechanismen in axonalen Transport. Wir haben bereits dieses Protokoll verwendet, um den Transport Dynamik innerhalb larvalen Nerven Ausdruck erweitert polyQ wiederholt, um aufzuklären, wie Ausbau der wiederholt die Dynamik der Vesikeltransport beeinflussen 3 zu bewerten. Über dieses Protokoll die Geschwindigkeit der Vesikel Bewegung...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1 Pair Micro Dissection Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spring scissors &#x2013; 6mm blade. 0.125 mm tip diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>2 Pair Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps</td>
</tr>
<tr>
<td>Box of Dissection Pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Minutien Pins 0.1mm diameter</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons

Die Aufklärung der Mechanismen der axonalen Transport hat gezeigt, dass sehr wichtig bei der Bestimmung, wie Mängel in Ferntransport verschiedenen neurologischen Erkrankungen beeinflussen. Mängel in diesem wichtigen Prozess kann nachteilige Auswirkungen auf die neuronale Funktion und Entwicklung. Wir haben eine Dissektion Protokoll, das entworfen, um das Expose wird entwickelt<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven segmentalen Nerven axonalen Transport in Echtzeit anzeigen. Wir haben dieses Protokoll für Live-Aufnahmen von der von Hurd und Saxton (1996) für immunolocalizatin der Larven segmentalen Nerven verwendet veröffentlicht angepasst. Eine sorgfältige Präparation und richtige Puffer-Bedingungen sind entscheidend für die Maximierung der Lebensdauer des seziert Larven. Wenn es richtig getan haben, seziert Larven robust Vesikeltransport für 2-3 Stunden unter physiologischen Bedingungen gezeigt. Wir nutzen die UAS-GAL4-Methode<sup&gt; 1</sup&gt; Zum Ausdruck zu bringen GFP-markierten APP oder Synaptotagmin Vesikel innerhalb eines einzigen Axon oder viele Axone in Larven segmentalen Nerven durch verschiedene neuronale GAL4-Treiber. Andere fluoreszenzmarkierten Marker, zum Beispiel Mitochondrien (MitoTracker) oder Lysosomen (LysoTracker), kann auch für die Larven vor der Anzeige angewendet werden. GFP-Vesikel Bewegung und der Bewegung von Teilchen können gleichzeitig angezeigt werden mit unterschiedlichen Wellenlängen.

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In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

Dieses Protokoll beschreibt die Live-Präparation<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven zum Zwecke der Abbildung der Bewegung der GFP markierten axonalen Bläschen auf Mikrotubuli.

In-vivo-Visualisierung von synaptischen Vesikeln Innerhalb Drosophila Larven Segmentale Axone

Elucidating the mechanisms of axonal transport has shown to be very important in determining how defects in long distance transport affect different ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Visualisierung von Larven segmentalen Nerven in 3 Rd Instar Drosophila Larven Vorbereitungen

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Forschung

Neurowissenschaften

Morphological Analysis of Drosophila Larval Peripheral Sensory Neuron Dendrites and Axons Using Genetic Mosaics

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Morphologische Analyse Drosophila Larven peripheren sensorischen Neuron Dendriten und Axone mit Genetic Mosaike

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

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Visualisierung von Propriozeptoren in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven und Puppen

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

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Funktionelle Analyse der Larvenfütterung Circuit in Drosophila</i

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

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Laser-Nanochirurgie der Kleinhirn-Axone<em&gt; In Vivo</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

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Live-Imaging von<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven Neuroblasten

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

Culturing In Vivo-like Murine Astrocytes Using the Fast, Simple, and Inexpensive AWESAM Protocol

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The AWESAM (a low-cost easy stellate astrocyte method) protocol entails a fast, simple, and inexpensive way to generate large quantities of in vivo-like ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

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Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...

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Kombination von Optogenetik mit künstlichen Mikro-RNAs, die Effekte gen Knockdown präsynaptischen Funktion innerhalb intakte neuronale Schaltkreise zu charakterisieren

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a ...

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

In Vivo Optische Calcium-Bildgebung der lerninduzierten synaptischen Plastizität bei Drosophila melanogaster

Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. ...