Name: in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons
Uploaded: 2010-10-15T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons at JoVE.com

SG è sostenuto da fondi del State University di New York a Buffalo e da John R. Oishei Foundation. MK è stato sostenuto da un premio di ricerca da parte degli studenti CURCA UB.

1. Preparazione dei reagenti <ol><li> Preparare la preparazione del buffer dissezione aggiungendo i seguenti composti: 128 mM NaCl, 1mM EGTA, 4 mM MgCl 2, 2mM KCl, HEPES 5mm, e 36 mM saccarosio nel 1000 mL, PH a 7,2 e filtro sterilizzare. </li></ol> 2. Preparazione per la dissezione <ol><li> Cubo Siligard: Il gel viene tagliato a circa un centimetro di larghezza, 1 pollice di lunghezza e circa 1 cm di altezza. Il cubo di gel viene posto su un vetrino durante la dissezione. Cubi pos...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Hurd, D. D., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+mutations+cause+motor+neuron+disease+phenotypes+by+disrupting+fast+axonal+transport+in+Drosophila.">Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila.</a> Genetics. 144, 1075-1085 (1996).</li><li>Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40, 25-40 (2003).</li></ol>

In imaging in vivo di trasporto all&#39;interno delle vescicole sinaptiche Drosophila nervi larvale segmentale è un potente strumento per studiare i meccanismi di trasporto assonale. Abbiamo già utilizzato questo protocollo per valutare le dinamiche di trasporto all&#39;interno di nervi larvale esprimere ampliato ripete polyQ per chiarire come l&#39;espansione delle ripetizioni condizionare le dinamiche del trasporto delle vescicole 3. Utilizzando questo protocollo la velocità di...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1 Pair Micro Dissection Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spring scissors &#x2013; 6mm blade. 0.125 mm tip diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>2 Pair Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps</td>
</tr>
<tr>
<td>Box of Dissection Pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Minutien Pins 0.1mm diameter</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons

Chiarire i meccanismi di trasporto assonale ha dimostrato di essere molto importante nel determinare come i difetti nel trasporto a lunga distanza influenzare diverse malattie neurologiche. Difetti in questo processo essenziale può avere effetti negativi sul funzionamento dei neuroni e lo sviluppo. Abbiamo sviluppato un protocollo di dissezione che è stato progettato per esporre la<em&gt; Drosophila</em&gt; Nervi larvale segmentale per visualizzare trasporto assonale in tempo reale. Abbiamo adattato questo protocollo per l&#39;imaging dal vivo da quello pubblicato da Hurd e Saxton (1996) utilizzata per immunolocalizatin larvale di nervi segmentale. Dissezione attenta e condizioni di buffer corretta è fondamentale per massimizzare la durata della vita delle larve sezionato. Se correttamente eseguita, larve sezionato hanno dimostrato di trasporto robusta vescicole per 2-3 ore in condizioni fisiologiche. Usiamo il metodo UAS-GAL4<sup&gt; 1</sup&gt; Per esprimere la GFP-tagged APP o vescicole synaptotagmin all&#39;interno di un singolo assone o assoni molti larvale nervi segmentali utilizzando diversi neuronali GAL4 driver. Altri marcatori fluorescenti tag, per esempio mitocondri (MitoTracker) o lisosomi (LysoTracker), può essere applicato anche alle larve prima di visualizzarlo. GFP-vescicola movimento e il movimento delle particelle possono essere visualizzati contemporaneamente con lunghezze d&#39;onda separate.

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In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

Questo protocollo descrive la dissezione dal vivo di<em&gt; Drosophila</emLarve&gt; allo scopo di immagini del movimento di GFP vescicole tag assonale sulle piste microtubuli.

Nella visualizzazione in vivo delle vescicole sinaptiche In Drosophila assoni larvali segmentale

Elucidating the mechanisms of axonal transport has shown to be very important in determining how defects in long distance transport affect different ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

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