Name: in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons
Uploaded: 2010-10-15T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons at JoVE.com

SG es apoyado por fondos de la Universidad Estatal de Nueva York en Buffalo y de John R. Oishei Fundación. MK fue apoyado por un Premio de Investigación de Estudiantes de la UB por curca.

1. Preparación de los reactivos <ol><li> Prepare la preparación de amortiguación disección mediante la adición de los siguientes compuestos: 128 mM NaCl, 1 mM EGTA, 4 mM de MgCl 2, 2 mM KCl, HEPES 5 mM y 36 mM de sacarosa en 1000 ml, el pH a 7,2 y el filtro de esterilización. </li></ol> 2. Preparación para la disección <ol><li> Cubo Siligard: El gel se corta a aproximadamente una pulgada de ancho, una pulgada de largo y aproximadamente 1 cm de alto. El cubo de gel se coloca...

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Hurd, D. D., Saxton, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinesin+mutations+cause+motor+neuron+disease+phenotypes+by+disrupting+fast+axonal+transport+in+Drosophila.">Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila.</a> Genetics. 144, 1075-1085 (1996).</li><li>Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+axonal+transport+by+loss+of+huntingtin+or+expression+of+pathogenic+polyQ+proteins+in+Drosophila.">Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila.</a> Neuron. 40, 25-40 (2003).</li></ol>

Imágenes in vivo de transporte de vesículas sinápticas en Drosophila nervios larvas segmentaria es una poderosa herramienta para el estudio de los mecanismos en el transporte axonal. Hemos utilizado anteriormente este protocolo para evaluar la dinámica de transporte dentro de los nervios larvas expresar ampliado repite polyQ para dilucidar cómo la expansión de repeticiones afectan a la dinámica del transporte de vesículas 3. El uso de este protocolo la velocidad de movimient...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>1 Pair Micro Dissection Scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spring scissors &#x2013; 6mm blade. 0.125 mm tip diameter</td>
</tr>
<tr>
<td>2 Pair Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fischer Scientific</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps</td>
</tr>
<tr>
<td>Box of Dissection Pins</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Minutien Pins 0.1mm diameter</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vivo visualization of synaptic vesicles within drosophila larval segmental axons

Elucidar los mecanismos de transporte axonal ha demostrado ser muy importante para determinar cómo los defectos en el transporte de larga distancia afecta a diferentes enfermedades neurológicas. Los defectos en este proceso esencial puede tener efectos perjudiciales en el funcionamiento neuronal y el desarrollo. Hemos desarrollado un protocolo de disección que está diseñado para exponer los<em&gt; Drosophila</em&gt; Nervios larvas segmentaria para ver el transporte axonal en tiempo real. Hemos adaptado este protocolo para obtener imágenes en vivo desde el publicado por Hurd y Saxton (1996) utiliza para immunolocalizatin de las larvas de los nervios segmentarios. Disección cuidadosa y condiciones adecuadas de amortiguación son críticos para maximizar la vida útil de las larvas disecadas. Cuando se hace correctamente, las larvas disecados han demostrado el transporte de vesículas robusta durante 2-3 horas en condiciones fisiológicas. Usamos el método de UAS-GAL4<sup&gt; 1</sup&gt; Para expresar GFP-etiquetados APP o vesículas sinaptotagmina dentro de un solo axón o axones muchos nervios en las larvas segmentaria mediante el uso de diferentes neuronal GAL4 conductores. Otros marcadores marcados con fluorescencia, por ejemplo, mitocondrias (MitoTracker) o lisosomas (LysoTracker), puede aplicarse también a las larvas antes de ver. GFP-vesícula movimiento y el movimiento de partículas se pueden ver simultáneamente con longitudes de onda diferentes.

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In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

Este protocolo describe la disección en vivo de<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvas con el propósito de la imagen del movimiento de las buenas prácticas agrarias etiquetados vesículas axonal en rieles de microtúbulos.

Visualización en vivo de las vesículas sinápticas En Drosophila segmentaria axones larvas

Elucidating the mechanisms of axonal transport has shown to be very important in determining how defects in long distance transport affect different ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Visualization of Synaptic Vesicles Within Drosophila Larval Segmental Axons

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

La visualización de larvas Nervios segmentarios en 3 Rd Instar Drosophila Preparación de larvas

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Investigación

Neurociencias

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Análisis morfológico de Drosophila Larvas dendritas neurona sensorial periférica y axones Con mosaicos genéticos

Nervous system development requires the correct specification of neuron position and identity, followed by accurate neuron class-specific dendritic ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

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Visualización de los propioceptores<em&gt; Drosophila</em&gt; Las larvas y pupas

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

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The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

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Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

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Imágenes en vivo de<em&gt; Drosophila</em&gt; larvales neuroblastos

Stem cells divide asymmetrically to generate two progeny cells with unequal fate potential: a self-renewing stem cell and a differentiating cell. Given ...

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The AWESAM (a low-cost easy stellate astrocyte method) protocol entails a fast, simple, and inexpensive way to generate large quantities of in vivo-like ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

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Combinando Optogenetics con microRNAs artificiales para caracterizar los efectos de Gene caída en la función presináptica en circuitos neuronales intactas

The purpose of this protocol is to characterize the effect of gene knockdown on presynaptic function within intact neuronal circuits. We describe a ...

In Vivo Optical Calcium Imaging of Learning-Induced Synaptic Plasticity in Drosophila melanogaster

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Decades of research in many model organisms have led to the current concept of synaptic plasticity underlying learning and memory formation. ...