Name: in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide
Uploaded: 2011-01-20T18:30:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

وقد تم تمويل العمل من قبل NIDCD / NIH R01DC003915 لBakaletz LO.

1. في تشكيل بيوفيلم المختبر <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> علقت المستعمرات البكتيرية (التي كانت تزرع على أجار المناسبة بين عشية وضحاها) ، في وسائل الإعلام وعدل OD 490-،65 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ثم تم تخفيفه تعليق الجرثومية الناتجة 01:06 (1 مل ​​تعليق البكتيرية + 5 مل قبل حرارة متوسطة) وحضنت في 37 درجة مئوية مع نسبة 5 ٪ CO 2 لحوالي 3 ساعات للوصول إلى مرحلة منتصف السجل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمييع تعليق النمو منتصف سجل 1:2500 مع تحسنت وسائل الاعلام قبل ومكان 200 ميكرولتر من التخفيف في كل بئر من الشريحة 8 الغرفة جيدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> احتضان عند 37 درجة مئوية مع نسبة 5 ٪ CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد حوالي 16 ساعة والمتوسطة نضح من ركلة ركنية من كل غرفة وإضافة 200 ميكرولتر العذبة ، وقبل حرارة متوسطة -- على طول جدار الاستغناء الغرفة حتى لا تخلق قوى القص داخل الغرفة التي يمكن أن تعطل بيوفيلم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إذا احتضان أكثر من 24 ساعة ، وتغير متوسط ​​ساعات كل 12 أو حسب الحاجة للمحافظة على سلامة البكتيريا. </li></ol> 2. تصور بيوفيلم <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح المتوسطة من كل غرفة ، على النحو الموصوف أعلاه ، ويغسل بيوفيلم المقيمين بلطف مرتين مع المياه المالحة عقيمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 ميكرولتر لايف / الميت وصمة عار BacLight (العنصر 3 ميكرولتر A ​​+ B 3 لكل عنصر ميكرولتر مليلتر من المياه المالحة) إلى كل بئر ويحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. حماية الثقافة من الضوء من هذه النقطة فصاعدا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نضح وصمة عار ، ويغسل مرتين بلطف مع المالحة عقيمة كما كان من قبل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 200 ميكرولتر من الفورمالين محايدة مخزنة على كل بئر واحتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لإصلاح العينة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة تثبيتي ، والتصرف بشكل صحيح وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل مرتين مع المياه المالحة والتخلص من السوائل التي تحتوي على غسل الفورمالين على النحو الوارد أعلاه. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الآبار من الشريحة البلاستيكية ، إضافة إلى ما يكفي من المياه المالحة كل ذلك جيدا انه عندما يتم وضع ساترة على وحشية ، لا فقاعات الهواء موجودة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ساترة وختم حواف مع ساترة المتوسطة المتزايدة. ويمكن استخدام طلاء الأظافر لختم الشرائح غير الشرائح لن تكون دائمة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> السماح للتسرب لتجف لمدة ساعة قبل ما يقرب من 1 إلى دراسة عبر المجهر. </li></ol> 3. النتائج <img src="/files/ftp_upload/2481/2481fig1.jpg" alt="الشكل 1" /> الشكل 1. الممثل 3D صور مركبة لتشكيل بيوفيلم في الشريحة 8 الغرفة جيدا. وصفت فيها البكتيريا مع البكتيريا لايف / الميت يعيش وصمة عار يتألق البكتيريا الخضراء والحمراء يتألق القتلى. (أ) صورة مركبة تظهر من بيوفيلم كامل بنية متميزة مع الأبراج وقنوات المياه. (ب) في نفس بيوفيلم (A) ، وينظر الآن في المقطع العرضي.

<ol>
	<li>Bakaletz, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms+in+otitis+media:+evidence+and+relevance.">Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance.</a> Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).</li><li>Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

فهم الآلية التي شكل الأغشية الحيوية ، فضلا عن المكونات التي تميز بها المصفوفة ، وهي منطقة شديدة الأهمية. ويمكن استخدام هذا البروتوكول للمساعدة في تحديد البروتينات أو المكونات الأخرى التي تساهم في السلامة الهيكلية للبيوفيلم ، فضلا عن المساعدة في تحديد واستهداف البروتينات التي قد تصلح لتطبيق العلاجية. وقد تم تأسيس حضانة مرات والتخفيفات في البروتوكول الموصوفة أعلاه المثلى لتشكيل بيوفيلم التي nontypeable المستدمية النزلية (NTHI). قد تكون هناك حاجة إلى بعض الأعمال التمهيدية لتحسين هذه الخطوات بالنسبة للأنواع البكتيريا الأخرى (أي تخفيف الأولي وفترة حضانة اللازمة لتحقيق منتصف سجل النمو التدريجي). وقد تم تأسيسها في تخفيف 1:2500 لبذر الأولي للدوائر لضمان أن بيوفيلم قوية من شأنها تطوير الشرائح في الغرفة التي يسببها حسب هذا الكائن وداخل الحضانة وذكرت مرات ، من دون بيوفيلم overgrowing غرفة و / أو استنفاد المواد المغذية المتوفرة . وبالتالي يجوز التخفيف الأولية والحضانة أو أوقات الحاجة الى تعديلها لأنواع البكتيريا الأخرى.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Chocolate II agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>B21267X</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8-well chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-656-18</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BacLight Live/Dead bacterial viability kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9439023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BHI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>211059</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H5533</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-NAD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N7004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Permaslip mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9693613</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide

ويعزى لطبيعة كثير من الأمراض المزمنة إلى تشكيل الأغشية الحيوية البكتيرية التي المعاند للعلاج بالمضادات الحيوية التقليدية. الأغشية الحيوية والمجتمع المرتبطة البكتيريا تعلق على السطح والمغطى في المصفوفة. دور المصفوفة خارج الخلية متعددة الأوجه ، بما في ذلك تسهيل الحصول على المواد الغذائية ، ويوفر حماية كبيرة ضد الضغوط البيئية (مثل المضيف الاستجابات المناعية). في محاولة لاكتساب فهم أفضل لكيفية البكتيريا داخل بيوفيلم الاستجابة للضغوط البيئية التي استخدمناها بروتوكولا حيث تصور لنا الأغشية الحيوية البكتيرية التي شكلت في الشريحة الغرفة 8 أيضا. تم صبغ والأغشية الحيوية مع BacLight لايف / الميت وصمة عار وفحصت باستخدام المجهر مبائر لتوصيف حجم بيوفيلم النسبية ، وهيكل تحت ظروف مختلفة الحضانة. جمعت Z - المكدس الصور عن طريق المجهر وتحليلها بواسطة مبائر COMSTAT. ويمكن استخدام هذا البروتوكول للمساعدة في توضيح آلية وحركية الذي شكل الأغشية الحيوية ، وكذلك تحديد المكونات التي تعتبر هامة لهيكل بيوفيلم والاستقرار.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

توضح هذه المقالة إجراءات لتشكيل والتصور لبيوفيلم البكتيريا نما داخل الشريحة الغرفة 8 جيد

تشكيل بيوفيلم في المختبر في غرفة الشرائح 8 جيد

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Microtiter تشكيل بيوفيلم الطبق الفحص

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

كمي<em&gt; في المختبر</em&gt; الفحص لقياس التصاق العدلات إلى تنشيط الخلايا البطانية الاوعية الدموية الدقيقة الإنسان الأساسية بموجب الشروط ثابت

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

الغزو الجرثومي المعوي الخلايا الظهارية المعوية<em&gt; في المختبر</em&gt; تتعزز بشكل كبير عن طريق دائرة إنتشار عمودي الموديل

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

عالية الإنتاجية قياس خارج الخلية DNA الإصدار والكمي NET تشكيل في العدلات الإنسان<em&gt; في المختبر</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

إنشاء إعداد إنتاجية عالية لفحص الجزيئات الصغيرة التي تعدل ج-دي-GMP في اشارة<em&gt; الزائفة الزنجارية</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

تصور آثار البلغم للتنمية بيوفيلم باستخدام نموذج غرف ساترة

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; كاسيم ملزمة الفحص الذي يتنبأ اختراق المخدرات في الآفات السل

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

التصور "تشكيل بيوفيلم" في المبيضات البيض باستخدام جهاز موائع جزيئية الآلي

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

تشكيل بيوفيلم التي يسببها الملح الصفراوية في مسببات الأمراض المعوية: تقنيات لتحديد وتقدير حجم

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...