Name: in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide
Uploaded: 2011-01-20T18:30:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

העבודה מומן על ידי NIDCD / NIH R01DC003915 אל LO Bakaletz.

1. כינונה biofilm חוץ גופית <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מושבות חיידקים (אשר כבר גדל על אגר המתאים לילה), הושעו בתקשורת ואת OD 490 הותאם 0.65 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המתלים חיידקים וכתוצאה מכך היה מדולל אז 01:06 (1 ההשעיה מ&quot;ל חיידקי + 5 מ&quot;ל מראש חימם בינוני) ו מודגרות ב 37 ° C עם 5% CO 2 למשך כ 3 שעות כדי להגיע יומן באמצע השלב. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדלל את יומן אמצע ההשעיה 1:2500 עם צמיחה מחומם מראש מדיה מקום 200 μL של דילול לבאר כל שקופית 8-היטב קאמרית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לדגור על 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר כ 16 שעות, בינוני לשאוב מהפינה של החדר כל ולהוסיף 200 μL טרי, מחומם מראש בינוני - לוותר לאורך הקיר של החדר כדי לא ליצור כוחות גזירה בתוך החדר אשר יכול לשבש את biofilm. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם דוגרים יותר מ 24 שעות, שנה בינונית כל 12 שעות או לפי הצורך כדי לשמור על יכולת הקיום חיידקי. </li></ol> 2. ויזואליזציה של biofilm <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב בינוני מתא אחד, כמתואר לעיל, ולשטוף biofilm תושב פעמיים בעדינות עם מלח סטרילית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 μL של (רכיב 3 μL + 3 B מרכיב μL לכל מ&quot;ל של תמיסת מלח) BacLight Live / Dead כתם זה היטב דגירה בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות. הגן על תרבות מן האור מנקודה זו ואילך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשאוב את הכתם ולשטוף פעמיים בעדינות עם תמיסת מלח סטרילית כמו קודם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוספת 200 μL של נייטרלי שנאגרו פורמלין זה היטב דגירה במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר כדי לתקן את הדגימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר מקבע כהלכה להיפטר בהתאם להנחיות מוסדיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שטפו פעמיים עם מי מלח ועושה את הנוזלים לשטוף המכילים פורמלין לעיל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את בארות פלסטיק משקופית, מוסיפים מלח מספיק זה גם כך שכאשר coverslip מושם על אטם, אין בועות אוויר נוכחים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Coverslip וסוגרים את הקצוות של coverslip עם הרכבה בינונית. לק ניתן להשתמש כדי לאטום את שקופיות שקופיות עם זאת לא יהיה כפי קבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אפשר איטום להתייבש במשך שעה בערך 1 לפני בחינת דרך מיקרוסקופ. </li></ol> 3. תוצאות <img src="/files/ftp_upload/2481/2481fig1.jpg" alt="איור 1" /> באיור 1. הנציג תמונות מרוכבים 3D של biofilm נוצר שקופית 8-היטב קאמרית. חיידקים תויגו עם כתם חיידקים חי / מת לחיות שבה לזרוח חיידקים ירוקים מת לזרוח אדום. (א) התמונה של Composite biofilm כל הארכיטקטורה נפרדות עם מגדלים ותעלות מים. (ב) biofilm זהה (A), ראיתי עכשיו ב חתך.

<ol>
	<li>Bakaletz, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms+in+otitis+media:+evidence+and+relevance.">Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance.</a> Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).</li><li>Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).</li></ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

הבנת המנגנון שבאמצעותו biofilms הטופס, כמו גם באפיון רכיבי המטריצה ​​שלהם, הוא תחום עניין רב. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לזהות חלבונים או מרכיבים אחרים שתורמים שלמות מבנית של biofilm, וכן לסייע בזיהוי יעד חלבונים אשר עשויים להשאיל את עצמם ביישום הטיפולי. פעמים הדגירה ו דילולים בפרוטוקול לעיל הוקמו ליצירת biofilm אופטימלי על ידי nontypeable Haemophilus influenzae (NTHI). עבודה חלק ראשוני עשוי להיות נחוץ כדי לייעל את הפעולות הבאות עבור מינים חיידקים אחרים (דילול ראשוני כלומר זמן הדגירה הדרושה להשגת שלב אמצע יומן צמיחה). דילול 1:2500 עבור זריעת הראשונית של התאים הוקמה על מנת להבטיח כי biofilm חזקים יפתחו בחדר שקופיות הנגרמת על ידי אורגניזם הזה ובתוך פעמים הדגירה כאמור, ללא biofilm overgrowing החדר ו / או מתיש מזינים זמין . לפיכך, דילול ראשוני או פעמים הדגירה ייתכן שיהיה צורך מותאם זן חיידקים אחרים.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Chocolate II agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>B21267X</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8-well chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-656-18</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BacLight Live/Dead bacterial viability kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9439023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BHI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>211059</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H5533</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-NAD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N7004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Permaslip mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9693613</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide

האופי הכרוני של מחלות רבות מיוחסת היווצרות של biofilms חיידקי אשר הסרבן כדי טיפול אנטיביוטי מסורתי. Biofilms הם הקהילה הקשורים חיידקים מצורף משטח ו עטוף מטריצה. תפקידה של המטריצה ​​תאיים הוא רב פנים, כולל הקלת רכישת מזין, מציעה הגנה משמעותית נגד לחצים סביבתיים (למשל, התגובות מארח החיסונית). במאמץ להשיג הבנה טובה יותר באשר לאופן החיידקים בתוך biofilm להגיב מדגיש הסביבה השתמשנו פרוטוקול שבו אנו לחזות biofilms חיידקים אשר נוצרו בשקופית 8-היטב קאמרית. Biofilms הוכתמו BacLight Live / Dead כתם ובדק באמצעות מיקרוסקופ confocal כדי לאפיין את גודל biofilm יחסית, ומבנה תחת תנאים משתנים הדגירה. Z-מחסנית תמונות נאספו באמצעות מיקרוסקופיה confocal ונותחו על ידי סטטמ&quot;מ. פרוטוקול זה יכול לשמש כדי לעזור להבהיר את מנגנון קינטיקה על ידי היוצרים biofilms, כמו גם לזהות את המרכיבים שחשובים מבנה biofilm ויציבות.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

מאמר זה מתאר את הליך הקמת ויזואליזציה של biofilm חיידקי גדל בתוך שקופית 8-גם תא

ב גיבוש biofilm חוץ גופית ב 8-Slide גם לשכת

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Biofilm microtiter תבשיל גיבוש Assay

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

כמותי<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay כדי למדוד הידבקות נויטרופילים לתאים מופעלים עיקריים אדם אנדותל כלי הדם בתנאים סטטיים

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

פלישת חיידקי enteric של תאי אפיתל במעי<em&gt; במבחנה</em&gt; באופן דרמטי משופר תוך שימוש במודל לשכת דיפוזיה אנכי

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

מדידת תפוקה גבוהה של שחרור DNA תאי והיווצרות NET כמוני נויטרופילים האנוש<em&gt; במבחנה</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

הקמת הגדרת תפוקה גבוהה להקרנה מולקולות קטנות לווסת ג-di-GMP איתות<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

שיטות ויטרו להשוואת יעד מחייב CDC אינדוקציה בין נוגדנים טיפוליים: יישומים ניתוח Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay מחייב Assay כי חוזה חדירה לסמים בשחפת נגעים

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

ויזואליזציה של ביופילמים ב קנדידה אלביקנס שימוש בהתקן Microfluidic אוטומטי

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

מלח מרה-induced ביופילמים בתוך המעית פתוגנים: טכניקות וכימות

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...