Name: in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide
Uploaded: 2011-01-20T18:30:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

작품은 LO Bakaletz에 NIDCD / NIH에 의해 투자 R01DC003915했다.

1. 체외의 Biofilm 형성에 <ol><li> 세균성 식민지는 (야간 적절한 한천에서 성장했습니다)을, 미디어 중단되었으며 OD 490이 0.65으로 조정되었습니다 </li><li> 그 결과 세균 현탁액은 다음 1시 6분 (1 ML 세균 현탁액 + 5 ML 미리 예열 중간) 희석과 ° C가 약 3 시간 동안 5 % CO 2 중반 로그 단계에 도달하기 위해 37 incubated했다. </li><li> 8 잘 챔버 슬라이드의 각 우물에 미리 예열 미디어 및 장소 희석 200 μL와 중반 로그 성장 서스펜션 1:2500을 희석. </li><li> 37 ° C 5 % CO 2를 품어. </li><li> 후 약 16시간, 기음 각 챔버 코너에서 중간 200 μL 신선한 사전 예열 중간 추가 -만큼 biofilm을 방해 할 수있는 챔버 내에서 전단 세력을 만들 수 없습니다 챔버 벽을 따라 분배합니다. </li><li> 이상 24 시간 이상의 잠복기 경우, 중간 매 12 시간을 변경하거나 같은 박테리아 생존을 유지하는 데 필요한. </li></ol> 2. Biofilm의 시각화 <ol><li> 위에서 설명한 바와 같이, 각각의 챔버에서 매체를 대기음하고, 무균 식염수에 두 번 가볍게 주민 biofilm을 씻으십시오. </li><li> 각 잘하는 BacLight 데드 / 라이브 얼룩 (3 μL 구성 요소 호수의 ML 당 + 3 μL 부품 B) 200 μL를 추가하고 15 분 동안 상온에서 알을 품다. 이 시점 이후부터의 빛으로부터 문화를 보호할 수 있습니다. </li><li> 얼룩을 대기음하고 이전과 멸균 식염수에 가볍게 두 번 씻는다. </li><li> 각 잘하기 위해 포르말린 버퍼 중립 200 μL를 추가하고 시료를 해결하기 위해 상온에서 30 분 알을 품다. </li><li> 정착액 제거하고 제대로 제도적 지침에 따라 폐기. </li><li> 식염수에 두 번 씻고 위와 같이 포르말린이 들어있는 세척​​ 유체 처리. </li><li> coverslip이 근육에 배치되었을 때, 기포가 존재하지 않습니다 잘 있도록 슬라이드에서 플라스틱 우물을 제거 각각 살린만큼 추가할 수 있습니다. </li><li> 설치 매체로 coverslip의 Coverslip 날인은 가장자리. 매니큐어는 그러나 슬라이드가 영구적으로하지 않습니다 슬라이드를 봉인하는 데 사용할 수 있습니다. </li><li> 밀봉이 현미경을 통해 검사하기 전에 약 1 시간 동안 건조하실 수 있습니다. </li></ol> 3. 검색 결과 <img src="/files/ftp_upload/2481/2481fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 8 잘 챔버 슬라이드에 형성된 biofilm의 대표 3D 합성 이미지. 박테리아가 라이브 / 데드 얼룩이 궁극적으로 사는 박테리아와 라벨이 붙지만는 녹색과 죽은 박테리아가 적색 형광 형광. 타워 물을 채널과 독특한 건축 양식을 보여주는 전체 biofilm의 (A) 복합 이미지. (B) 같은 biofilm은 같이 (A), 지금 단면에서 본.

<ol>
	<li>Bakaletz, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms+in+otitis+media:+evidence+and+relevance.">Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance.</a> Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).</li><li>Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

biofilms이 양식을하는 메커니즘뿐만 아니라 자신의 매트릭스 구성 요소를 특성화로, 이해하는 것은 강렬한 관심의 영역입니다. 이 프로토콜은 단백질이나 구조 biofilm의 무결성뿐만 아니라 식별 및 치료 응용 프로그램에 자신을 빌려 있습니다 단백질을 타겟으로 도움에 기여하는 다른 성분을 식별하는 데 도움이 될 수 있습니다. 위에서 설명한 프로토콜에서 배양 시간 및 dilutions은 nontypeable 헤모필러스 인플루엔자 (NTHI)에 의해 최적의 biofilm 형성을 위해 설립되었습니다. 일부 예비 작업 (예 : 초기 희석 중반 로그 위상 성장을 달성하기 위해 필요한 배양 시간) 다른 세균 종에 대해 이러한 단계를 최적화해야 할 수도 있습니다. 챔버의 초기 시딩에 대한 1:2500 희석이 가능한 영양소를 챔버 overgrowing 및 / 또는 소진 biofilm없이 강력한 biofilm과 같이이 유기체에 의해 유도된 챔버 슬라이드와 배양 시간이 명시된 이내에 개발한다고 보장하기 위해 설립되었습니다 . 따라서, 초기 희석 및 또는 부화 시간은 다른 세균 종에 따라 조정해야 할 수 있습니다.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Chocolate II agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>B21267X</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8-well chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-656-18</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BacLight Live/Dead bacterial viability kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9439023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BHI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>211059</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H5533</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-NAD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N7004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Permaslip mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9693613</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide

많은 질병의 만성적인 자연 전통적인 항생제 치료에 완강히 저항하는 세균성 biofilms 아르의 형성에 기인합니다. Biofilms는 표면에 붙어 매트릭스으로 쌌다는 지역 사회 관련 세균입니다. 세포외 기질의 역할은 영양소 획득을 촉진 포함하여 다각이며, 환경 스트레스 (예 : 호스트 면역 응답)에 대해 상당한 보호를 제공합니다. biofilm 내에 박테리아가 우리가 8 자 챔버 슬라이드에 형성 박테리아 biofilms을 시각화 궁극적 우리가 프로토콜을 사용한 환경 스트레스에 대응하는 방법으로 이해를 얻기위한 노력의 일환으로. biofilms는 얼룩 데드 / 라이브 BacLight 물들일 및 배양 조건을 변화에 따라 상대 biofilm의 크기 및 구조를 특징으로 공촛점 현미경을 사용하여 조사했다. Z - 스택 이미지 공촛점 현미경을 통해 수집 COMSTAT에 의해 분석되었다. 이 프로토콜은 메커니즘과 반응 속도론 biofilms 양식에서뿐만 아니라, biofilm 구조와 안정성에 중요한 구성 요소를 식별하는 데 도움을 명료하게하다하는 데 사용할 수 있습니다.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

이 문서는 8 자 챔버 슬라이드 내에서 성장 세균 biofilm의 형성과 시각화를위한 절차를 설명

8 잘 회의소 슬라이드에서 체외의 Biofilm 형성에

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Microtiter 디시 Biofilm 형성 분석

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

연구

면역학 및 감염병학

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

정량<em&gt; 체외</em정적 조건에서 활성화 된 기본 인간의 미세 혈관 내피 세포에 호중구 부착을 측정하는&gt; 분석

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

장 상피 세포의 장내 세균의 침입<em&gt; 체외</em&gt; 크게 수직 확산 챔버 모델을 사용하여 향상

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

세포 외 DNA 릴리스의 높은 처리량 측정 및 인간 호중구의 양적 NET 형성<em&gt; 체외</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

변조 C 디 GMP가에서 시그널링 그건 작은 분자를 스크리닝하기위한 높은 처리량 설정 구축<em&gt; 녹농균</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

챔버의 coverglass 모델을 사용하여 바이오 필름 개발에 객담의 효과를 시각화

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

체외 방법에서 대상 바인딩 및 치료 항체 사이 CDC 유도 비교 : 응용 프로그램 생물학적 동등성 분석에

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

안<em&gt; 체외에서</em&gt; 결핵 병변에서 약물 침투를 예측하는 Caseum Binding Assay

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Candida albicans 자동 미세 장치를 사용 하 여에서 Biofilm 형성의 시각화

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

담 즙 소금 유도 Biofilm 형성 장 병원 체에서: 식별 및 정량화 기술

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...