Name: in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide
Uploaded: 2011-01-20T18:30:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

Работа финансировалась NIDCD / NIH R01DC003915 к LO Bakaletz.

1. В формировании биопленки Vitro <ol><li> Бактериальные колонии (которые были выращены на соответствующие агар на ночь), были приостановлены в средствах массовой информации и OD 490 доводили до 0,65 </li><li> В результате бактериальной суспензии разбавляют 1:6 (1 мл бактериальной суспензии + 5 мл подогретого среды) и инкубировали при 37 ° C с 5% CO 2 примерно на 3 часа, чтобы достичь середины логарифмической фазы. </li><li> Развести середине журнала роста подвески 1:2500 с подогретого СМИ и месте 200 мкл в каждую лунку 8-а камера слайд. </li><li> Инкубировать при 37 ° C с 5% CO 2. </li><li> Примерно через 16 часов, аспирация среды от углу каждой камеры и добавить 200 мкл свежей, подогретого средне - обойтись вдоль стены камеры, чтобы не создавать силы сдвига в камеру, которая может нарушить биопленки. </li><li> Если инкубацию более 24 часов, изменение среды каждые 12 часов или по мере необходимости для поддержания жизнеспособности бактериальных. </li></ol> 2. Визуализация биопленки <ol><li> Аспирируйте среды от каждой камеры, как описано выше, и мыть резидент биопленки дважды мягко стерильным физиологическим раствором. </li><li> Добавить 200 мкл BacLight Live / Мертвое пятно (3 мкл компонент + 3 мкл B компонент на мл физиологического раствора) в каждую лунку и инкубировать при комнатной температуре в течение 15 минут. Защитить культуру от света от этого момента. </li><li> Аспирируйте пятна и мыть дважды мягко стерильным физиологическим раствором, как раньше. </li><li> Добавить 200 мкл нейтральных буферный формалин в каждую лунку и инкубировать 30 минут при комнатной температуре, чтобы исправить образца. </li><li> Удалить фиксатор и правильно распоряжаться в соответствии с ведомственным руководящим принципам. </li><li> Промыть два раза физиологическим раствором и распоряжаться мыть жидкостями, содержащими формалин, что и выше. </li><li> Удалите пластиковую скважин слайдов, добавить достаточно соленый в каждую лунку так, что когда покровное делается на прокладку, без воздушных пузырьков присутствуют. </li><li> Покровное и печатью края покровного стекла с монтажной средой. Лак для ногтей может быть использована для уплотнения слайды однако слайды не будут постоянными. </li><li> Разрешить герметик высохнуть в течение примерно 1 час до рассмотрения по микроскопии. </li></ol> 3. Результаты <img src="/files/ftp_upload/2481/2481fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> Рисунок 1. Представителю 3D композитные изображения биопленки образуются в 8-и камер слайда. Бактерии были помечены Live / Мертвое пятно которой живые бактерии светиться зеленым и мертвые бактерии светиться красным цветом. () Композитный образы всего биопленки показывающие различные архитектуры с башнями и водных каналов. (Б) То же, биопленки, как в (А), в настоящее время рассматривается в поперечном сечении.

<ol>
	<li>Bakaletz, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+biofilms+in+otitis+media:+evidence+and+relevance.">Bacterial biofilms in otitis media: evidence and relevance.</a> Pediatr Infect Dis J. 26, S17-S19 (2007).</li><li>Heydorn, A., Nielsen, A. T., Hentzer, M., Sternberg, C., Givskov, M., Ersboll, B. K., Molin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+biofilm+structures+by+the+novel+computer+program+COMSTAT.">Quantification of biofilm structures by the novel computer program COMSTAT.</a> Microbiology. 146, 2395-2407 (2000).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Понимание механизма, посредством которого биопленки форме, а также характеризующие их компонентов матрицы, в районе интенсивных интерес. Этот протокол может быть использован для выявления белков или других компонентов, которые способствуют структурной целостности биопленки, а также помогает выявлять и целевых белков, которые могут поддаются терапевтического применения. Времени инкубации и разведения в описанных выше протоколов были созданы для оптимального образование биопленки на nontypeable гемофильной инфекции (NTHI). Некоторые предварительные работы могут быть необходимы для оптимизации эти действия для других видов бактерий (то есть начального разбавления и времени инкубации, необходимых для достижения середины логарифмической фазы роста). 1:2500 разбавления для первоначального посева камеры была создана с целью обеспечить надежную биопленки будет развиваться в камере слайдов, индуцированные этим организмом и в течение инкубационного раз заявлял, без биопленки зарастания камеры и / или истощения доступных питательных веществ . Соответственно, начального разбавления и времени инкубации или, возможно, должны быть скорректированы для других видов бактерий.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Chocolate II agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>B21267X</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>8-well chamber slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-656-18</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BacLight Live/Dead bacterial viability kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9439023</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BHI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>211059</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>H5533</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&beta;-NAD</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>N7004</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Permaslip mounting media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>NC9693613</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vitro biofilm formation in an 8-well chamber slide

Хронический характер многих заболеваний связано с образованием бактериальной биопленки, которые непокорных к традиционной антибактериальной терапии. Биопленки общин связанных с ними бактерий прилагается к поверхности и помещены в матрицу. Роль внеклеточного матрикса многогранен, включая содействие питательных приобретения, а также предлагает существенную защиту от стрессов окружающей среды (например, иммунной реакции). В стремлении приобрести лучшее понимание того, как бактерии в биопленки реагировать на экологические стрессы мы использовали протокол котором мы представляем бактериальных биопленок, которые формируются в 8-и камер слайда. Биопленки окрашивали BacLight Live / Мертвое пятно и изучены с помощью конфокальной микроскопии для характеристики относительного размера биопленки и структуры при различных условиях инкубации. Z-Stack изображения были собраны с помощью конфокальной микроскопии и проанализированы КОМСТАТ. Этот протокол может быть использован для выяснения механизма и кинетики которым биопленки форме, а также определить компоненты, которые являются важными для структуры биопленки и стабильности.

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide at JoVE.com

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

В этой статье описывается порядок формирования и визуализации бактериальной биопленки выросли в 8-и камера слайд

В пробирке образование биопленки в 8-и палаты слайдов

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

Microtiter Dish Biofilm Formation Assay

Микротитровальные Блюдо образование биопленки Пробирной

Biofilms are communities of microbes attached to surfaces, which can be found in medical, industrial and natural settings.  In fact, life in a biofilm ...

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Quantitative In vitro Assay to Measure Neutrophil Adhesion to Activated Primary Human Microvascular Endothelial Cells under Static Conditions

Количественный<em&gt; В пробирке</em&gt; Анализе на определение адгезию нейтрофилов к активированным Первичные человеческие эндотелиальные клетки микрососудов в статических условиях

The vascular  endothelium plays an integral part in the inflammatory response. During the  acute phase of inflammation, endothelial cells (ECs) are ...

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Enteric Bacterial Invasion Of Intestinal Epithelial Cells In Vitro Is Dramatically Enhanced Using a Vertical Diffusion Chamber Model

Кишечные бактериальной инвазии эпителиальных клеток кишечника<em&gt; In Vitro</em&gt; Резко усиливается с помощью вертикальной модели диффузионной камере

The interactions of bacterial pathogens with host cells have been investigated extensively using in vitro cell culture methods. However as such cell ...

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

High Throughput Measurement of Extracellular DNA Release and Quantitative NET Formation in Human Neutrophils In Vitro

Высокая пропускная способность измерения внеклеточной ДНК-релиз и количественный NET Формирование в нейтрофилах человека<em&gt; In Vitro</em

Neutrophil granulocytes are the most abundant leukocytes in the human blood. Neutrophils are the first to arrive at the site of infection. Neutrophils ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Создание установки с высокой пропускной способностью для скрининга малых молекул, которые модулируют с-ди-GMP Передача сигналов в<em&gt; Синегнойной</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Визуализация Эффекты мокроте на биопленки развития с использованием модели Chambered покровного стекла

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

В методах Vitro для сравнения цели связывания и CDC Индукционные Между терапевтических антител применения в анализе Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

<em&gt; In Vitro</em&gt; Анализ связи с казумом, который прогнозирует проникновение наркотиков в очаги туберкулеза

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Visualization of Biofilm Formation in Candida albicans Using an Automated Microfluidic Device

Визуализация биопленки в Candida albicans с помощью автоматизированных Microfluidic устройства

Candida albicans is the most common fungal pathogen of humans, causing about 15% of hospital-acquired sepsis cases. A major virulence attribute of C. ...

Bile Salt-induced Biofilm Formation in Enteric Pathogens: Techniques for Identification and Quantification

Желчь соли индуцированной биопленки в кишечных патогенов: методы для идентификации и количественной оценки

Biofilm formation is a dynamic, multistage process that occurs in bacteria under harsh environmental conditions or times of stress. For enteric pathogens, ...