Name: isolation of drosophila melanogaster testes
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Drosophila melanogaster Testes at JoVE.com

De auteurs danken Vasia Vagin voor de invoering van deze techniek in ons laboratorium.

<ol><li> Maak een glazen microscoopglaasje met een zwarte achtergrond: Cut 20 # wit papier van hetzelfde formaat als de microscoop dia. Kleur de ene kant van de slide-formaat papier zwart met behulp van een permanent marker (bijv. Sharpie). Van toepassing zijn witte lijm (Elmer&#39;s) naar de zwarte kant en houden het papier aan de dia. De glijbaan kan worden hergebruikt. Met behulp van ¾ &quot;label tape (Fisherbrand), tot het veilig microscoopglaasje, glas kant, om de CO 2 vliegen pad om het te bevestigen op zijn plaats. </li><li> Verzamel 0-3 dagen oud mannetje vliegt. </li><li> Maak een emmer met ijs, fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS), ontleden naalden. </li><li> Verdoof 50-100 vliegt met behulp van een stroom van CO 2 en overbrengen van de fles of flacon om de vliegen pad in de buurt van het objectglaasje. </li><li> Pipetteer ~ 50 ul ijskoud PBS in een daling in het midden van de microscoop dia. </li><li> Voorzichtig pick-up een mannelijke vliegen met de ontleden naald-dip het ontleden naald in PBS, zachte aanraking van de ventrale zijde (dat wil zeggen, in de buurt van de vleugels) van het vliegen met de naald-plaats deze in de val van PBS. </li><li> Plaats een naald op het midden van de vlieg, tussen de borstkas en de buik, naar beneden te duwen stevig. Plaats de andere naald tussen de zesde (A6) en zevende (A7) buik segmenten (de tweede en derde strepen van onderen), trek de buik weg van de thorax. </li><li> Plagen van de testes, afgezien van andere organen, in het bijzonder de darm. Vooral in witte mutanten, testes en darmen lijken. De belangrijkste verschillen zijn dat testikels altijd in paren, elk testis heeft een spiraal patroon en is meer wit van kleur dan de darm. </li><li> Bewaar de testes in ijskoud PBS in een polypropyleen microcentrifugebuis. </li></ol> Representatieve resultaten: <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. Dorsaal zicht van het mannelijke voortplantingssysteem, uit flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flybase attributie:... &#39;Na figuur 38 A op pagina 508 van Miller (1950) A. Miller De interne anatomie en histologie van het imago van Drosophila melanogaster In M. Demerec, redacteur, Biologie van Drosophila, hoofdstuk 6, pagina&#39;s 420 - 534. Cold Spring Harbor Laboratory Press, facsimile-uitgave, 1994. Copyright 1994 door Cold Spring Harbor Laboratory Press. Gebruikt met vriendelijke toestemming van Cold Spring Harbor Laboratory (CSHL) Druk op. Zie <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> . &quot;

<ol>
	<li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell.">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li></ol>

Wij bieden een protocol om teelballen te isoleren van volwassen mannelijke Drosophila melanogaster. Omdat de techniek vereist een coördinerende de twee handen, vaardigheid komt alleen met de praktijk.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dissecting needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S17346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro Slides, Plain </td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-553</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Light</td>
<td>Tool</td>
<td>Schott-Fostec</td>
<td>KO-1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO2 pad</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Flowbuddy Complete System</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-122WCU</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bubble Humidifier</td>
<td>Tool</td>
<td>Salter Labs</td>
<td>7100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ball filler needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>54-119</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&frac34;&#x201D; Label Tape</td>
<td>Supply</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-901-5B</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of drosophila melanogaster testes

De testes van Drosophila melanogaster bieden een belangrijk model voor de studie van stamcellen onderhoud en differentiatie, meiose, en soma-kiembaan interacties. Testes zijn meestal geïsoleerd uit volwassen mannetjes 0-3 dagen na Eclosion uit de popstadium geval. De testes van wild-type vliegen zijn gemakkelijk te onderscheiden van andere weefsels, omdat ze zijn geel, maar de testes van de witte mutant vliegen, een gemeenschappelijke genetische achtergrond voor laboratoriumexperimenten zijn vergelijkbaar in beide vorm en kleur aan het vliegen darm. Het uitvoeren van dissectie op een glazen microscoopglaasje met een zwarte achtergrond maakt het identificeren van de testes een stuk eenvoudiger. Testes worden verwijderd uit de vliegen met behulp van ontleden naalden. Vergeleken met de protocollen die forceps gebruiken voor testes dissectie, onze methode is veel sneller, waardoor een goed geoefend individu om testes ontleden 200-300 wild-type vliegt per uur, waardoor 400-600 testes. Testes van witte vlieg of mutanten die testes te verkleinen zijn moeilijker te ontleden en levert doorgaans 200-400 testes per uur.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Drosophila melanogaster Testes at JoVE.com

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testes kunnen snel en efficiënt geïsoleerd van volwassen mannen met behulp van het ontleden van naalden. Met de praktijk, kan men gemakkelijk isoleren in een of twee dagen een bedrag van testes voldoende is voor de analyse van DNA of RNA door hoge throughput sequencing of meer traditionele methoden of moleculaire biologie van eiwitten voor antilichaam-of enzym-gebaseerde testen.

Isolatie van Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissectie van larvale CNS in Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Hoge-resolutie video-Tracking van Locomotion in Adult Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live-beeldvorming van Drosophila melanogaster Embryonale Hemocyte Migraties

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissectie van Oenocytes tegen Adult Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Meting van de levensduur in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologische analyse van Spermatogenese: Live and Vaste Bereidingen van<em&gt; Drosophila</em&gt; Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Door de Pupal zaak van<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A significant portion of post-embryonic development in the fruit fly, Drosophila melanogaster, takes place within a set of sac-like structures called ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Verbeterde Northern Blot detectie van kleine RNA Species in<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Handhaving van<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Bevolking Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...