Name: isolation of drosophila melanogaster testes
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00
Duration: 3 min 13 s
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Gli autori ringraziano Vasia VAGIN per l&#39;introduzione di questa tecnica nel nostro laboratorio.

<ol><li> Fare un vetrino da microscopio in vetro con uno sfondo nero: Tagliare carta da 20 # bianco delle stesse dimensioni del vetrino da microscopio. Colore un lato della slide-nero Taglia carta con un pennarello indelebile (ad esempio, Sharpie). Applicare la colla bianca (Elmer) per il lato nero e aderire la carta alla diapositiva. La presentazione può essere riutilizzato. Utilizzando ¾ &quot;tape label (Fisherbrand), fissare il vetrino da microscopio, vetro laterale alto, al pad CO 2 volare a fissarlo. </li><li> Raccogliere 0-3 vola maschio giorno. </li><li> Preparare un secchio di ghiaccio, PBS (PBS), aghi di dissezione. </li><li> Anestetizzare 50-100 vola utilizzando un flusso di CO 2 e trasferirli dalla bottiglia o flacone per il pad volare vicino al vetrino da microscopio. </li><li> Pipettare ~ 50 microlitri ghiaccio PBS freddo in una goccia nel mezzo del vetrino da microscopio. </li><li> Delicatamente prendere un moscerino maschio con la dissezione ago-dip l&#39;ago dissezione in PBS, tocco gentile lato ventrale (cioè, in prossimità delle ali) della mosca con l&#39;ago posto in una goccia di PBS. </li><li> Posto un ago al centro della mosca, tra il torace e l&#39;addome, spingendo con decisione. Posizionare l&#39;ago altro tra il sesto (A6) e settimo (A7) segmenti addominali (le strisce secondo e il terzo dal basso); tirare l&#39;addome di distanza dal torace. </li><li> Stuzzicare i testicoli a parte altri organi, in particolare dell&#39;intestino. Soprattutto in mutanti bianco, testicoli e intestino simile. Differenze principali sono che testicoli vengono sempre a coppie, ognuna testicolo è un percorso a spirale ed è più di colore bianco che nell&#39;intestino. </li><li> Conservare i testicoli nella gelida PBS in una provetta polipropilene. </li></ol> Rappresentante dei risultati: <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Vista dorsale del sistema riproduttivo maschile, da flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flybase attribuzione:... &quot;Dopo Figura 38 A a pagina 508 di Miller (1950) A. Miller, L&#39;anatomia interna e istologia della imago di Drosophila melanogaster In M. Demerec, editore, Biologia della Drosophila, capitolo 6, pagine 420 - 534. Cold Spring Harbor Laboratory Press, edizione facsimile, 1994. Copyright 1994 da Cold Spring Harbor Laboratory Press. Utilizzato per gentile concessione del Cold Spring Harbor Laboratory (CSHL) Premere. Vedere <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> &quot;.

<ol>
	<li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell.">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Forniamo un protocollo per isolare i testicoli di adulto maschio di Drosophila melanogaster. Perché la tecnica richiede coordinamento proprio due mani, l&#39;abilità viene solo con la pratica.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dissecting needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S17346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro Slides, Plain </td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-553</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Light</td>
<td>Tool</td>
<td>Schott-Fostec</td>
<td>KO-1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO2 pad</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Flowbuddy Complete System</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-122WCU</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bubble Humidifier</td>
<td>Tool</td>
<td>Salter Labs</td>
<td>7100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ball filler needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>54-119</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&frac34;&#x201D; Label Tape</td>
<td>Supply</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-901-5B</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of drosophila melanogaster testes

I testicoli di Drosophila melanogaster fornire un importante modello per lo studio della manutenzione e la differenziazione delle cellule staminali, la meiosi, e soma-germinale interazioni. I testicoli sono tipicamente isolate da maschi adulti 0-3 giorni dopo eclosion dal caso pupa. I testicoli di wild-type mosche sono facilmente distinguibili da altri tessuti perché sono gialle, ma i testicoli del bianco mosche mutanti, un background genetico comune per esperimenti di laboratorio sono simili in forma e colore per l&#39;intestino volare. Esecuzione di dissezione su un vetrino di vetro con uno sfondo nero rende l&#39;identificazione dei testicoli molto più semplice. Testicoli vengono rimossi dalle mosche utilizzando aghi dissezione. Rispetto ai protocolli che utilizzano pinze per la dissezione dei testicoli, il nostro metodo è molto più veloce, che consente una ben praticata individuale di sezionare testicoli 200-300 wild-type vola per ora, cedendo 400-600 testicoli. Testicoli dalle mosche bianche o da mutanti che riducono le dimensioni dei testicoli sono più difficili da analizzare e in genere resa testicoli 200-400 all&#39;ora.

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Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testicoli possono essere rapidamente ed efficacemente isolato da maschi adulti con aghi dissezione. Con la pratica, si può facilmente isolare in uno o due giorni una quantità di testicoli sufficiente per l&#39;analisi del DNA o RNA mediante sequenziamento throughput elevato o più tradizionali metodi di biologia molecolare o di proteine ​​per i test degli anticorpi-o a base di enzimi.

Isolamento di Drosophila melanogaster Testicoli

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