Name: isolation of drosophila melanogaster testes
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00
Duration: 3 min 13 s
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Os autores agradecem Vasia Vagin para introduzir esta técnica em nosso laboratório.

<ol><li> Faça uma lâmina de vidro com um fundo preto: Corte papel 20 # branco para o mesmo tamanho que a lâmina de microscópio. Lado uma cor do papel preto deslize tamanho usando um marcador permanente (por exemplo, a Sharpie). Aplicar cola branca (Elmer) para o lado negro e aderir o papel para o slide. O slide pode ser reutilizado. Usando ¾ &quot;tape label (Fisherbrand), assegurar a lâmina de microscópio, com o lado de vidro para cima, para o bloco de voar CO 2 para corrigi-lo no lugar. </li><li> Coletar 0-3 dias moscas macho velho. </li><li> Prepare um balde de gelo, tampão fosfato (PBS), agulhas de dissecção. </li><li> Anestesiar 5-10 voa usando um fluxo de CO 2 e transferi-los a partir da garrafa ou frasco para a plataforma de voar perto da lâmina de microscópio. </li><li> Pipetar 50 ul ~ gelada PBS em uma queda no meio da lâmina de microscópio. </li><li> Gentilmente pegar uma mosca do sexo masculino com a agulha de dissecação por imersão a agulha de dissecação em PBS, toque suave no lado ventral (isto é, perto das asas) da mosca-lo com a agulha no lugar gota de PBS. </li><li> Coloque uma agulha no meio da mosca, entre o tórax eo abdômen, empurrando para baixo com firmeza. Coloque a outra agulha entre a sexta (A6) e (A7), sétimo segmentos abdominais (as listras segundo e terceiro do fundo); puxe o abdômen de distância do tórax. </li><li> Tease os testículos para além de outros órgãos, especialmente o intestino. Especialmente em mutantes branco, testículos e intestino parecem semelhantes. Principais diferenças são que os testículos sempre vêm em pares, cada testículo tem um padrão de espiral e é mais do que na cor branca intestino. </li><li> Armazenar os testículos na gelada PBS em um tubo de microcentrífuga de polipropileno. </li></ol> Resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Vista dorsal do sistema reprodutor masculino, a partir de flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flubase atribuição:... &quot;Depois de A Figura 38 na página 508 de Miller (1950) A. Miller A anatomia interna e histologia da imago de Drosophila melanogaster Em M. Demerec, editor, Biologia da Drosophila, capítulo 6, páginas 420 - 534. Cold Spring Harbor Laboratory Press, edição fac-similar de 1994. Copyright 1994 por Cold Spring Harbor Laboratory Press. Usado com permissão tipo de Cold Spring Harbor Laboratory (CSHL) Press. Ver <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> &quot;.

<ol>
	<li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell.">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li></ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Nós fornecemos um protocolo para isolar os testículos de adultos do sexo masculino Drosophila melanogaster. Porque a técnica exige uma coordenação de duas mãos, a habilidade só vem com a prática.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dissecting needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S17346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro Slides, Plain </td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-553</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Light</td>
<td>Tool</td>
<td>Schott-Fostec</td>
<td>KO-1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO2 pad</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Flowbuddy Complete System</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-122WCU</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bubble Humidifier</td>
<td>Tool</td>
<td>Salter Labs</td>
<td>7100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ball filler needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>54-119</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&frac34;&#x201D; Label Tape</td>
<td>Supply</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-901-5B</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of drosophila melanogaster testes

Os testículos de Drosophila melanogaster fornecer um importante modelo para o estudo de manutenção de células-tronco e diferenciação, a meiose, e soma-germline interações. Testículos são normalmente isoladas de machos adultos 0-3 dias após a eclosão do caso pupal. Os testículos de tipo selvagem moscas são facilmente distinguidos de outros tecidos, porque eles são o amarelo, mas os testículos de branco moscas mutantes, um fundo genético comum para experiências de laboratório são similares em forma e cor para o intestino da mosca. Realizar a dissecção de uma lâmina de vidro com um fundo preto torna a identificação dos testículos consideravelmente mais fácil. Testículos são removidos da voa usando agulhas de dissecção. Comparação com protocolos que utilize uma pinça para dissecção dos testículos, o nosso método é muito mais rápido, permitindo que um indivíduo bem praticada para dissecar testículos 200-300 do tipo selvagem voa por hora, produzindo 400-600 testículos. Testículos de moscas brancas ou de mutantes que reduzir o tamanho dos testículos são mais difíceis de dissecar e normalmente produzem 200-400 testes por hora.

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Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Testículos Drosophila melanogaster pode ser rápida e eficiente isoladas dos machos adultos usando agulhas de dissecção. Com a prática, pode-se facilmente isolar em um ou dois dias uma quantidade de testes suficientes para a análise de DNA ou RNA por seqüenciamento de alto rendimento ou mais tradicionais métodos de biologia molecular ou de proteínas para ensaios de anticorpo ou enzima-based.

Isolamento de Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

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