Name: isolation of drosophila melanogaster testes
Uploaded: 2011-05-13T13:00:00
Duration: 3 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Drosophila melanogaster Testes at JoVE.com

Författarna tackar Vasia Vagin för att introducera denna teknik i vårt laboratorium.

<ol><li> Gör ett bildspel glas mikroskop med en svart bakgrund: Klipp 20 # vitt papper i samma storlek som objektglas. Färg ena sidan av bilden-papper svart med en permanent spritpenna (t.ex. Sharpie). Tillsätt vitt lim (Elmer s) till den svarta sidan och hålla fast pappret på glaset. Bilden kan återanvändas. Använda ¾ &quot;etikett band (Fisherbrand), säkra objektglas, glas uppåt till CO 2 flyga pad att fixa det på plats. </li><li> Samla 0-3 dagar gammal hane flugor. </li><li> Förbered en hink med is, fosfatbuffrad saltlösning (PBS), dissekera nålar. </li><li> Bedöva 50-100 flyger med hjälp av en ström av CO 2 och överföra dem från flaska till flyga pad nära objektglas. </li><li> Pipettera ~ 50 l iskallt PBS i en nedgång i mitten av objektglas. </li><li> Försiktigt plocka upp en man flyga med dissekera nål-doppa dissekera nålen i PBS, lätt beröring den ventrala sida (dvs, nära vingar) av flyga med nål-placera den i droppe PBS. </li><li> Sätt en nål i mitten av flugan, mellan bröstkorgen och buken, trycka ner ordentligt. Placera den andra nålen mellan sjätte (A6) och sjunde (A7) buken segment (andra och tredje ränder från botten), dra buken bort från bröstkorgen. </li><li> Reta testiklarna från andra organ, särskilt tarmen. Särskilt i vitt mutanter, testiklar och tarm liknar. Viktiga skillnader är att alltid testiklarna kommit i par, varje testikel har ett spiralmönster och är mer vit i färgen än tarm. </li><li> Förvara testiklarna i iskallt PBS i en polypropylen mikrocentrifugrör. </li></ol> Representativa resultat: <img src="/files/ftp_upload/2641/2641fig1.jpg" alt="Figur 1" /> Figur 1. Dorsal syn på det manliga reproduktiva systemet, från flybase.org/reports/FBim0000074.html. Flybase attribution:... &quot;Efter Figur 38 A på sidan 508 från Miller (1950) A. Miller Den interna anatomi och histologi i imago av Drosophila melanogaster i M. Demerec, redaktör, Biology of Drosophila, kapitel 6, sidorna 420 - 534. Cold Spring Harbor Laboratory Press, faksimilutgåva, 1994. Copyright 1994 av Cold Spring Harbor Laboratory Press. Används med tillstånd från Cold Spring Harbor Laboratory (CSHL) Tryck på. Se <a href="http://www.cshlpress.com">http://www.cshlpress.com</a> . &quot;

<ol>
	<li>Singh, S. R., Hou, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistological+Techniques+for+Studying+the+Drosophila+Male+Germline+Stem+Cell.">Immunohistological Techniques for Studying the Drosophila Male Germline Stem Cell.</a> Methods Mol Biol. 450, 45-59 (2008).</li></ol>

Vi erbjuder ett protokoll för att isolera testiklarna från vuxna handjur Drosophila melanogaster. Eftersom tekniken kräver att samordna sina två händer, kommer skicklighet bara med praktik.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dissecting needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>S17346</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro Slides, Plain </td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>12-553</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microscope Light</td>
<td>Tool</td>
<td>Schott-Fostec</td>
<td>KO-1500</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CO2 pad</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Benchtop Flowbuddy Complete System</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>59-122WCU</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bubble Humidifier</td>
<td>Tool</td>
<td>Salter Labs</td>
<td>7100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ball filler needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Genesee Scientific</td>
<td>54-119</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>&frac34;&#x201D; Label Tape</td>
<td>Supply</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>15-901-5B</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

isolation of drosophila melanogaster testes

Testiklarna av Drosophila melanogaster ge en viktig modell för studiet av stamceller underhåll och differentiering, meios och soma-könsceller interaktioner. Testiklarna är oftast isolerade från vuxna män 0-3 dagar efter eclosion från PUPP-fallet. Testiklarna av vild-typ flugor kan lätt skiljas från andra vävnader, eftersom de är gula, men testiklarna vita muterade flugor, en gemensam genetisk bakgrund för laboratorieexperiment är liknande i både form och färg till den flyga tarmen. Utföra dissektion på ett glas objektglas med en svart bakgrund gör att identifiera testiklarna betydligt lättare. Testiklarna tas bort från flugorna med dissekera nålar. Jämfört med protokoll som använder pincett för testiklar dissektion, är vår metod mycket snabbare, vilket gör att en väl inövade individen att dissekera testiklarna 200 till 300 vildtyp flugor i timmen, vilket ger 400-600 testiklar. Testiklarna från vita flugor eller mutanter som minskar testiklarna storleken är svårare att dissekera och vanligtvis ger 200-400 testiklar per timme.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Drosophila melanogaster Testes at JoVE.com

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Drosophila melanogaster testiklar kan snabbt och effektivt isolerade från vuxna män använda dissekera nålar. Med övning kan man isolera sig lätt i en eller två dagar en mängd testiklar tillräcklig för analys av DNA eller RNA med hög kapacitet sekvensering eller mer traditionella molekylärbiologiska metoder eller protein för antikropps-eller enzym-baserade analyser.

Isolering av Drosophila melanogaster Testiklar

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissekering av Larvernas CNS i Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila Melanogaster

Högupplöst video Spårning av rörelseorgan hos vuxna Drosophila melanogaster

Flies provide an important model for studying complex behavior due to the plethora of genetic tools available to researchers in this field.  Studying ...

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations

Live avbildning av Drosophila melanogaster Embryonala Hemocyte Flyttningar

Many studies address cell migration using in vitro methods, whereas the physiologically relevant environment is that of the organism itself. Here we ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissekering av Oenocytes från Vuxen Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Mätning av livslängden i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologisk analys av Spermatogenesen: Live och fasta Beredningar av<em&gt; Drosophila</em&gt; Testiklar

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Through the Pupal Case of Drosophila melanogaster

Imaging Genom pupal Fall av<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The longstanding use of Drosophila as a model for cell and developmental biology has yielded an array of tools. Together, these techniques have enabled ...

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Dissektion och immunfärgning av imaginal skivor från<em&gt; Drosophila melanogaster</em

A significant portion of post-embryonic development in the fruit fly, Drosophila melanogaster, takes place within a set of sac-like structures called ...

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Enhanced Northern Blot Detection of Small RNA Species in Drosophila Melanogaster

Förbättrad Northern blot detektering av små RNA arter i<em&gt; Drosophila melanogaster</em

The last decades have witnessed the explosion of scientific interest around gene expression control mechanisms at the RNA level. This branch of molecular ...

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage

Underhåll av en<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Befolkning Cage

Large quantities of DNA, RNA, proteins and other cellular components are often required for biochemistry and molecular biology experiments. The short life ...