Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

نشكر أعضاء روزنبلات المختبر العلمي للمناقشات والاقتراحات والتعليقات. نود أيضا أن نشكر الذين قدموا ماري هالوران يرجى الترميز البلازميد RFP - UtrCH وجرونوالد ديفيد الذي قدم CK : GFP الزرد المعدلة وراثيا. أيضا بفضل جريتشين الملك وموظفي الموارد اسماك الزرد المركزية في جامعة ولاية يوتا لصيانة ممتازة ورعاية الزرد. وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة ، جائزة NIGMS NIH المدير الجديد المبتكر 1 DP2 OD002056 - 01 إلى JR. كان مدعوما من قبل GTE التدريب NIH السرطان المتعدد التخصصات 5T32 برنامج منح CA03247 - 8.

الأساسية لسير العمل في التصور من خلال حيوية أكتين النتوء خلية في البشرة من اسماك الزرد النامية وتتألف البشرة من الزرد النامية من طبقتين متميزة ، الطبقة السطحية (أو محيط بالأدمة) وطبقة من الخلايا القاعدية التي تتصل الغشاء القاعدي <...

<ol>
	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

بروتوكول الموصوفة هنا يوضح طريقة بسيطة ومباشرة لتصور عملية البثق في منديل الظهارية حية. هذا النوع من التجربة تسمح لنا دراسة ديناميات أكتين الدقيقة لا تقدر سابقا في تحليل الأنسجة الثابتة ، وبالتالي يكمل أساليب مناعي مشترك. يمكننا استخدام هذا البروتوكول في تركيبة مع ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم </th><th> نوع </th><th> شركة </th><th> رقم كتالوج </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> RNeasy ميني كيت </td><td> الكاشف </td><td> Qiagen </td><td> 74104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6 كيت </td><td> الكاشف </td><td> Ambion </td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td> عبور الدبابات </td><td> أداة </td><td> Thoren الأنظمة المائية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> والمضخة الماصة </td><td> أداة </td><td> منتجات بيل فنون </td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ¾ باستور الماصة </td><td> أداة </td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td> Microinjection مقلب </td><td> أداة </td><td> أدوات التكيف العلوم </td><td> I - 34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15mm الثقافة بلايت </td><td> أداة </td><td> الصياد </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / براون Micropipet بولير </td><td> أداة </td><td> سوتر آلات الشركة </td><td> نموذج P97 </td><td></td></tr><tr><td> زجاج البورسليكات الشعيرات الدموية مع الشعيرة </td><td> أداة </td><td> سوتر آلات الشركة </td><td> B1400 - 78-10 </td><td> OD 1.0mm ، ID 0.78mm ، وطول 10cm </td></tr><tr><td> جرة التخزين الكهربائي </td><td> أداة </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td> الفينول الأحمر </td><td> الكاشف </td><td> سيغما </td><td> P0290 </td><td> 0.5 ٪ في DPBS </td></tr><tr><td> الضغط والتحكم Microinjector Micromanipulator </td><td> أداة </td><td> جهاز هارفارد </td><td> PLI - 100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm الثقافة الطبق </td><td> أداة </td><td> Cellstar </td><td> 627-160 </td><td></td></tr><tr><td> G418 (Geneticin) </td><td> الكاشف </td><td> GIBCO </td><td> 10131-035 </td><td> 50 ملغ / مل في DH 2 0 </td></tr><tr><td> دومون # 5 الملقط </td><td> أداة </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 11253-20 </td><td></td></tr><tr><td> 12cm حامل الدبوس </td><td> أداة </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> إدراج دبابيس </td><td> أداة </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 26007-02 و- 03 </td><td></td></tr><tr><td> صحن زجاج الثقافة القاع مع 1.5 ساترة </td><td> أداة </td><td> ماتيك </td><td> P35G - 1.5 - 10 - C </td><td></td></tr><tr><td> انخفاض تذوب Agarose </td><td> الكاشف </td><td> الصياد </td><td> BP1360 - 100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> الكاشف </td><td> سيغما </td><td> A - 5040 </td><td></td></tr><tr><td> تشريح مجهر </td><td> مجهر </td><td> لايكا </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> تشريح مجهر </td><td> مجهر </td><td> نيكون </td><td> SMZ645 </td><tد&gt; </td></tr><tr><td> فلوري مجهر تشريح </td><td> مجهر </td><td> اوليمبوس </td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td> الغزل القرص مجهر متحد البؤر </td><td> مجهر </td><td> نيكون </td><td> كسوف تي </td><td> تجهيزه مع قرص Yokagawa رئيس الغزل </td></tr><tr><td> كاميرا CCD </td><td> كاميرا </td><td> Andor </td><td> DV - 885 - VP </td><td> 1002x1004x8 ميكرون مربع بكسل </td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

استتبابي صيانة الأنسجة الطلائية المستمر يتطلب إزالة الخلايا التالفة من دون تعطيل وظيفة الحاجز. ووصف عملية دراستنا وجدنا أن الخلايا الميتة إرسال إشارات إلى جيرانهم العيش في تشكيل وعقد حلقة من الأكتين والميوسين التي يقذف بها من ورقة الظهارية في حين إغلاق أي ثغرات يمكن أن تكون قد نتجت عن خروجها ، قذف الخلية 1. الوضوح البصري الزرد النامية يوفر نظاما ممتازا لتصور البثق في العيش ظهائر. نحن هنا وصف الأسلوب للحث على صورة وقذف في البشرة الزرد اليرقات. لتصور البثق ، ونحن حقن بروتين فلوري الأحمر المسبار المسمى لأكتين F - الأجنة في مرحلة واحدة خلايا معدلة وراثيا الزرد التعبير عن بروتين الفلورية الخضراء في البشرة ويحفز موت الخلايا المبرمج عن طريق إضافة إلى G418 اليرقات. ثم نستخدم الوقت الفاصل بين التصوير على القرص الغزل مبائر المجهر لمراقبة ديناميات أكتين والسلوكيات الخلايا الظهارية أثناء عملية قذف الخلية أفكارك. هذا الأسلوب يتيح لنا للتحقيق في عملية قذف في ظهائر العيش وسوف توفر وسيلة لدراسة الحالات المرضية الناجمة عن الفشل في القضاء على الخلايا أفكارك.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

خلايا الموت تنبثق من الأنسجة الطلائية التي تقلص متضافرة من الخلايا المجاورة دون تعطيل وظيفة الحاجز. الوضوح البصري الزرد النامية يوفر نظاما ممتازا لتصور البثق في العيش ظهائر. نحن هنا وصف أساليب للحث على صورة وقذف في البشرة الزرد اليرقات في القرار الخلوية.

يعيش التصوير من النتوء خلية من البشرة من اسماك الزرد النامية

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

ثنائي الفوتون axotomy والوقت الفاصل بين التصوير مبائر يعيش في الأجنة الزرد

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

يعيش تصوير الدماغ الجنينية اسماك الزرد بواسطة الميكروسكوب متحد البؤر

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

تشريح هيئات من اسماك الزرد الكبار

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

يعيش التصوير في القدرة على الحركة والهيكل الخلوي أكتين خلية من الخلايا العصبية الفردية والخلايا العصبية في الأجنة كريست اسماك الزرد

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

ثنائي الفوتون المستندة إلى تنشيط ضوئي في الأجنة الحية اسماك الزرد

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

إعداد وتطوير الكبار ذبابة الفاكهة الأمخاخ والشبكية للتصوير لايف

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

يعيش التصوير من تخليص الخلية أفكارك أثناء<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

يعيش التصوير خلية من الأحداث الالتهام الذاتي المبكر: Omegasomes وما بعدها

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

والطماطم / GFP-FLP / FRT الطريقة للتصوير لايف من الفسيفساء الكبار<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; خلايا مستقبلة للضوء

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

تحليل وظيفة خلايا بيتا باستخدام تصوير الكالسيوم القرار خلية واحدة في الجزيرات الزرد

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...