Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
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हम वैज्ञानिक चर्चा, सुझाव, और टिप्पणियों के लिए Rosenblatt प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद. GFP ट्रांसजेनिक zebrafish हम भी मेरी Halloran जो कृपया प्लाज्मिड एन्कोडिंग आरएफपी UtrCH और डेविड Grunwald जो सी.के. प्रदान प्रदान धन्यवाद देना चाहूंगा. धन्यवाद भी ग्रेचेन राजा और यूटा विश्वविद्यालय में केन्द्रीकृत Zebrafish संसाधन के उत्कृष्ट और zebrafish के रखरखाव और देखभाल के लिए कर्मचारियों को. यह काम NIH-NIGMS NIH निदेशक नई अन्वेषक जे आर के लिए एक पुरस्कार OD002056-01 DP2 द्वारा समर्थित किया गया था. GTE NIH इन दोनों क्षेत्रों कैंसर प्रशिक्षण कार्यक्रम अनुदान CA03247 8-5T32 द्वारा समर्थित किया गया था.

विकास Zebrafish के epidermis में सेल एक्सट्रूज़न के दौरान actin गतिशीलता के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए मूल वर्कफ़्लो विकासशील zebrafish के दो अलग परतों, सतह परत और (या periderm) कोशिकाओं है कि तहखाने 2 झिल्ली संपर्क की ए?...

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	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

यहाँ वर्णित एक सरल और सीधा एक जीवित उपकला ऊतक में बाहर निकालना की प्रक्रिया कल्पना विधि प्रोटोकॉल को दर्शाता है. प्रयोग के इस प्रकार हमें actin गतिशीलता निर्धारित ऊतक विश्लेषण में पहले नहीं की सराहना की ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> नाम </th><th> टाइप </th><th> कंपनी </th><th> सूचि संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> RNeasy मिनी किट </td><td> अभिकर्मक </td><td> Qiagen </td><td> 74104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6 किट </td><td> अभिकर्मक </td><td> Ambion </td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td> पार टैंक </td><td> टूल </td><td> Thoren एक्वाटिक सिस्टम </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pipet पम्प </td><td> टूल </td><td> बेल कला उत्पाद </td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ¾ पाश्चर Pipet </td><td> टूल </td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td> Microinjection मोल्ड </td><td> टूल </td><td> अनुकूली विज्ञान उपकरण </td><td> मैं-34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15mm संस्कृति प्लेट </td><td> टूल </td><td> मछुआ </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / ब्राउन Micropipet डांड़ी </td><td> टूल </td><td> Sutter साधन कंपनी </td><td> P97 मॉडल </td><td></td></tr><tr><td> Borosilicate ग्लास capillaries फिलामेंट के साथ </td><td> टूल </td><td> Sutter साधन कंपनी </td><td> B1400 78-10 </td><td> आयुध डिपो 1.0mm, आईडी 0.78mm, 10cm लंबाई </td></tr><tr><td> इलेक्ट्रोड संग्रहण जार </td><td> टूल </td><td> विश्व परिशुद्धता उपकरण </td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td> Phenol लाल </td><td> अभिकर्मक </td><td> सिग्मा </td><td> P0290 </td><td> DPBS में 0.5% </td></tr><tr><td> दबाव नियंत्रित Microinjector और micromanipulator </td><td> टूल </td><td> हार्वर्ड उपकरण </td><td> पीएलआई - 100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm संस्कृति डिश </td><td> टूल </td><td> Cellstar </td><td> 627-160 </td><td></td></tr><tr><td> G418 (Geneticin) </td><td> अभिकर्मक </td><td> GIBCO </td><td> 10131-035 </td><td> 50 मिलीग्राम / एमएल DH में 2 0 </td></tr><tr><td> # 5 संदंश Dumont </td><td> टूल </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 11253-20 </td><td></td></tr><tr><td> 12cm पिन धारक </td><td> टूल </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> पिंस सम्मिलित करें </td><td> टूल </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 26007-02 और 03- </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 coverglass के साथ ग्लास नीचे संस्कृति डिश </td><td> टूल </td><td> MatTek </td><td> P35G 1.5 10 - सी </td><td></td></tr><tr><td> कम पिगलो agarose </td><td> अभिकर्मक </td><td> मछुआ </td><td> BP1360-100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> अभिकर्मक </td><td> सिग्मा </td><td> A-5040 </td><td></td></tr><tr><td> विदारक माइक्रोस्कोप </td><td> खुर्दबीन </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> विदारक माइक्रोस्कोप </td><td> खुर्दबीन </td><td> Nikon </td><td> SMZ645 </td><tघ&gt; </td></tr><tr><td> प्रतिदीप्त विदारक माइक्रोस्कोप </td><td> खुर्दबीन </td><td> ओलिंप </td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td> स्पिनिंग डिस्क Confocal माइक्रोस्कोप </td><td> खुर्दबीन </td><td> Nikon </td><td> ग्रहण तिवारी </td><td> एक Yokagawa कताई डिस्क सिर के साथ outfitted </td></tr><tr><td> सीसीडी कैमरा </td><td> कैमरा </td><td> Andor </td><td> DV-885 - वीपी </td><td> 1002x1004x8 माइक्रोन वर्ग पिक्सल </td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

उपकला ऊतकों की homeostatic रखरखाव क्षतिग्रस्त कोशिकाओं की बाधा समारोह में खलल न डालें बिना नित्य हटाने की आवश्यकता है. हमारे अध्ययन ने पाया है कि उनके रहने पड़ोसियों के लिए मर कोशिकाओं संकेतों को भेजने के लिए फार्म और actin और मायोसिन की एक अंगूठी है कि यह ejects उपकला पत्रक से बाहर करते हुए किसी भी अंतर है कि इसके बाहर से परिणाम हो सकता है है बंद अनुबंध, एक प्रक्रिया कोशिका 1 बाहर निकालना करार दिया. zebrafish के विकास के ऑप्टिकल स्पष्टता के लिए एक उत्कृष्ट epithelia में रहने वाले बाहर निकालना कल्पना प्रणाली प्रदान करता है. यहाँ हम एक विधि का वर्णन करने के लिए प्रेरित और लार्वा zebrafish epidermis में छवि बाहर निकालना. बाहर निकालना कल्पना करने के लिए, हम एफ actin के लिए एक सेल चरण ट्रांसजेनिक zebrafish epidermis में हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त भ्रूण में एक लाल फ्लोरोसेंट प्रोटीन लेबल जांच और इंजेक्षन G418 के लार्वा के अलावा द्वारा apoptosis प्रेरित. हम तो एक कताई डिस्क confocal खुर्दबीन पर समय चूक इमेजिंग उपयोग apoptotic सेल बाहर निकालना की प्रक्रिया के दौरान actin गतिशीलता और उपकला कोशिका व्यवहार का निरीक्षण करने के लिए. यह दृष्टिकोण हमें जीना epithelia में बाहर निकालना प्रक्रिया की जांच करने के लिए अनुमति देता है और रोग apoptotic कोशिकाओं को खत्म करने की विफलता की वजह से राज्यों को अध्ययन के लिए एक अवसर प्रदान करेगा.

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Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

मर कोशिकाओं उपकला ऊतकों से पड़ोसी की कोशिकाओं के ठोस संकुचन द्वारा बाधा समारोह में खलल न डालें बिना extruded कर रहे हैं. zebrafish के विकास के ऑप्टिकल स्पष्टता के लिए एक उत्कृष्ट epithelia में रहने वाले बाहर निकालना कल्पना प्रणाली प्रदान करता है. यहाँ हम विधियों का वर्णन करने के लिए प्रेरित और सेलुलर संकल्प पर लार्वा zebrafish epidermis में छवि बाहर निकालना.

विकास Zebrafish के epidermis से सेल एक्सट्रूज़न लाइव इमेजिंग

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

दो photon axotomy और लाइव zebrafish भ्रूण में समय चूक confocal इमेजिंग

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा Zebrafish भ्रूण मस्तिष्क की इमेजिंग लाइव

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

प्रौढ़ Zebrafish से अंग के विच्छेदन

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

व्यक्तिगत Zebrafish भ्रूण में न्यूरॉन्स और तंत्रिका शिखा कोशिकाओं के सेल गतिशीलता और actin cytoskeleton के लाइव इमेजिंग

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

दो फोटॉन आधारित लाइव Zebrafish भ्रूण में photoactivation

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

विकास और वयस्क की तैयारी ड्रोसोफिला दिमाग और लाइव इमेजिंग के लिए Retinae

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotic सेल क्लीयरेंस की इमेजिंग के दौरान जीते<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; Embryogenesis

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

प्रारंभिक भोजी घटनाक्रम की सेल इमेजिंग लाइव: Omegasomes और परे

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

मोजाइक सेक्स का लाइव इमेजिंग के लिए टमाटर / GFP-FLP / FRT विधि<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Zebrafish टाप में एकल-कक्ष रिज़ॉल्यूशन कैल्शियम इमेजिंग का उपयोग करके बीटा-कक्ष फ़ंक्शन का विश्लेषण

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...