Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
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我々は科学的な議論、提案、およびコメントのローゼンブラットの研究室のメンバーに感謝。 GFPトランスジェニックゼブラフィッシュ：我々はまた、親切にCKを提供するをコードするプラスミドRFP - UtrCHとデビッドグルンワルドを提供メアリーハロランに感謝したいと思います。また、グレッチェン王とゼブラフィッシュの優れたメンテナンスとケアのためのユタ大学の集中化ゼブラフィッシュのリソースのスタッフのおかげ。この作品は、JRへOD002056 - 01 DP2 NIH - NIGMS NIHのディレクターの新イノベーター賞1でサポートされていました。 GTEは、NIH集学的がん研修プログラムグラント5T32 CA03247 - 8によってサポートされていました。

ゼブラフィッシュの開発の表皮の細胞の押出中にアクチンダイナミクスの可視化のための基本的なワークフロー開発ゼブラフィッシュの表皮は、2つの別個の層、表面層（または周皮）と基底膜2を連絡し、細胞の基底層で構成されています。外側の表面層の細胞がアポトーシスを起こすと押し出し3（図1）によって組織から排除されています。?...

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	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

ここで説明するプロトコルは、ライブ上皮組織で押し出しのプロセスを可視化する単純で簡単な方法を示しています。このタイプの実験は、私たちは以前に固定された組織の分析に感謝しないアクチンダイナミクスの微妙な違いを調べることができる、そしてそれゆえ、一般的な免疫方法を補完する。として我々は、より我々は炎症反応や損傷した細胞の蓄積につながると期待されるアポト?...

<table border="1"><tbody><tr><th>の名前</th><th>タイプ</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント</th></tr><tr><td> RNeasyミニキット</td><td>試薬</td><td>キアゲン</td><td> 74104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6キット</td><td>試薬</td><td>アンビオン</td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td>クロッシングタンク</td><td>ツール</td><td> Thoren水系</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピペットポンプ</td><td>ツール</td><td>ベルアートの製品</td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ¾パスツールピペット</td><td>ツール</td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロインジェクションモールド</td><td>ツール</td><td>適応科学ツール</td><td> I - 34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15mm培養プレート</td><td>ツール</td><td>フィッシャー</td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming /ブラウンマイクロピペットプラー</td><td>ツール</td><td>サター器械公司</td><td>モデルP97 </td><td></td></tr><tr><td>フィラメントとホウケイ酸ガラス管</td><td>ツール</td><td>サター器械公司</td><td> B1400 - 78から10 </td><td>外径1.0ミリメートル、ID 0.78ミリメートル、10cmの長さ</td></tr><tr><td>電極の保存瓶</td><td>ツール</td><td>世界の精密機器</td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> P0290 </td><td> DPBS中の0.5％ </td></tr><tr><td>圧力制御マイクロインジェクターとマニピュレーター</td><td>ツール</td><td>ハーバード装置</td><td> PLI - 100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm培養皿</td><td>ツール</td><td> Cellstar </td><td> 627から160 </td><td></td></tr><tr><td> G418（ゲネチシン） </td><td>試薬</td><td> GIBCO </td><td> 10131-035 </td><td> DHで50 mg / mLの2 0 </td></tr><tr><td>デュモン＃5鉗子</td><td>ツール</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11253〜20 </td><td></td></tr><tr><td> 12cmのピンホルダー</td><td>ツール</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26016〜12 </td><td></td></tr><tr><td>ピンを挿入</td><td>ツール</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26007から02および- 03 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5カバーガラスとガラスボトム培養皿</td><td>ツール</td><td>マテック</td><td> P35G - 1.5 - 10 - C </td><td></td></tr><tr><td>低融点アガロース</td><td>試薬</td><td>フィッシャー</td><td> BP1360 - 100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> - 5040 </td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>ライカ</td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>ニコン</td><td> SMZ645 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td>蛍光解剖顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td>スピニングディスク共焦点顕微鏡</td><td>顕微鏡</td><td>ニコン</td><td> EclipseのTiの</td><td> Yokagawa回転するディスクのヘッドを装備</td></tr><tr><td> CCDカメラ</td><td>カメラ</td><td>アンドール</td><td> DV - 885 - VP </td><td> 1002x1004x8ミクロンの正方形ピクセル</td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

上皮組織の恒常性維持は、バリア機能を中断することなく、損傷した細胞の継続的な除去が必要です。我々の研究は、死細胞がその終了に起因している可能性のある隙間を閉じながら上皮シートからそれをイジェクトするアクチンとミオシンの環を形成し、収縮する彼らのライブの隣人にシグナルを送ることを発見した、プロセスは、細胞の押し出し1と呼ばれる。ゼブラフィッシュの開発の光学的透明度は、上皮の生体内で押し出しを可視化するための優れたシステムを提供します。ここでは、幼虫のゼブラフィッシュの表皮で押し出しを誘発し、イメージする方法を説明します。押し出しを可視化するために、我々は、表皮の緑色蛍光タンパク質を発現する1細胞期トランスジェニックゼブラフィッシュの胚に、F -アクチンのために赤色蛍光タンパク質標識プローブを注入し、幼虫にG418を添加することによってアポトーシスを誘導する。私たちは、その後アポトーシス細胞の押し出しの過程でアクチンのダイナミクスと上皮細胞の挙動を観察するために回転するディスク共焦点顕微鏡でタイムラプスイメージングを使用してください。このアプローチは、私たちは生きて上皮に押出プロセスを調査することができますし、アポトーシス細胞を除去するために障害に起因する疾患状態を研究する手段を提供します。

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Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

死細胞は、バリア機能を中断することなく、隣接する細胞の協調した収縮によって上皮組織から押し出される。ゼブラフィッシュの開発の光学的透明度は、上皮の生体内で押し出しを可視化するための優れたシステムを提供します。ここでは、携帯電話の解像度で幼生ゼブラフィッシュの表皮で押し出しを誘発し、イメージする方法を説明します。

開発ゼブラフィッシュの表皮から細胞の押出のライブイメージング

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

ライブゼブラフィッシュの胚における二光子軸索切断とタイムラプス共焦点イメージング

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

共焦点顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚の脳のイメージングを生きる

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

アダルトゼブラフィッシュからの臓器の解剖

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

細胞運動やゼブラフィッシュ胚における個々の神経細胞と神経堤細胞のアクチン細胞骨格のライブイメージング

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

ライブゼブラフィッシュ胚における二光子ベースの光活性化

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

開発と大人の準備ショウジョウバエ</emライブイメージングのための>脳と網膜

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

アポトーシス細胞のクリアランスのイメージング中に生きる<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;胚

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

初期のオートファジーイベントの細胞イメージングライブOmegasomesを以降

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

モザイク大人のライブイメージングのためのトマト/ GFP-FLP / FRT方法<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;視細胞

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

ゼブラフィッシュ ランゲルハンス島における単一セルの解像度カルシウム イメージングを用いた β-細胞機能の解析

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...