Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
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우리는 과학적인 토론, 제안 및 의견에 대한 Rosenblatt 연구소의 회원 감사합니다. GFP 유전자 변형 zebrafish : 우리는 또한 친절 CK를 제공하는 플라스미드 인코딩 RFP - UtrCH와 데이비드 그런왈드를 제공 메리 할로란 감사하고 싶습니다. 감사합니다 또한 그레첸 왕의 zebrafish 우수 유지 보수 및 관리를위한 유타 대학에서 중앙 Zebrafish 자원의 직원. 이 작품은 JR을 OD002056 - 01 DP2 NIH - NIGMS NIH 원장의 새로운 이노 상 1 지원했다. GTE는 NIH 종합 암 교육 프로그램 그랜트 5T32 CA03247 - 8에 의해 지원되었다.

개발 Zebrafish의 표피에서 셀 압출 동안 굴지 역학 시각화의 기본 워크플로우 개발 zebrafish의 표피는 별개의 두 레이어, 표면 레이어 (또는 periderm)과 지하 막 2 연락 세포의 기저 계층으로 구성되어 있습니다. 외부 표면 층의 세포가 apoptosis를 받아야하고 압출 3 (그림 1)에 의해 조직에서 제거됩니다. 실시간으로이 과정을 시각화하기 위해, 우리는 녹?...

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	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

여기에서 설명한 프로토콜은 실제 상피 조직에서 압출하는 과정을 시각화하는 간단하고 직접적인 방법을 보여줍니다. 이런 유형의 실험은 우리가 이전에 고정 조직 분석에서 평가하지 굴지 역학 미묘을 확인하실 수 있습니다, 따라서, 일반적인 immunofluorescent 방법을 보완합니다. 로 우리는 더 염증 반응이나 손상된 세포의 축적으로 이어질 것입니다 우리가 기대 apoptotic 세포를 제거하고 취소하고...

<table border="1"><tbody><tr><th> 이름 </th><th> 유형 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> RNeasy 미니 키트 </td><td> 시약 </td><td> Qiagen </td><td> 74,104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6 키트 </td><td> 시약 </td><td> 앰비온 </td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td> 크로싱 탱크 </td><td> 도구 </td><td> Thoren 아쿼틱 시스템 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pipet 펌프 </td><td> 도구 </td><td> 벨 아트 제품 </td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 어 파스퇴르 Pipet </td><td> 도구 </td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td> Microinjection 몰드 </td><td> 도구 </td><td> 적응형 과학 도구 </td><td> I - 34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15mm 문화 플레이트 </td><td> 도구 </td><td> 어부 </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / 브라운 Micropipet 풀러 </td><td> 도구 </td><td> 서터 악기 회사 </td><td> 모델 P97 </td><td></td></tr><tr><td> 필라멘트와 Borosilicate 유리 모세 혈관 </td><td> 도구 </td><td> 서터 악기 회사 </td><td> B1400 - 78-10 </td><td> OD 1.0mm, 0.78mm ID, 10cm 길이 </td></tr><tr><td> 전극 보관 용기 </td><td> 도구 </td><td> 세계 정밀 계측기 </td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td> 페놀 레드 </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> P0290 </td><td> DPBS으로 0.5 % </td></tr><tr><td> 압력 제어 Microinjector 및 Micromanipulator </td><td> 도구 </td><td> 하버드 장치 </td><td> PLI - 100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm 문화 요리 </td><td> 도구 </td><td> Cellstar </td><td> 627-160 </td><td></td></tr><tr><td> G418 (Geneticin) </td><td> 시약 </td><td> GIBCO </td><td> 10131-035 </td><td> DH 50 MG / ML 2 0 </td></tr><tr><td> 더몬트 # 5 포셉 </td><td> 도구 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11253-20 </td><td></td></tr><tr><td> 12cm 핀 홀더 </td><td> 도구 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> 핀을 삽입 </td><td> 도구 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 26007-02 및 - 03 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 coverglass와 유리 바닥 문화 요리 </td><td> 도구 </td><td> MatTek </td><td> P35G - 1.5-10 - C </td><td></td></tr><tr><td> 낮은 용융 아가로 오스 </td><td> 시약 </td><td> 어부 </td><td> BP1360 - 100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> 시약 </td><td> 시그마 </td><td> A - 5040 </td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> 현미경 </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> 해부 현미경 </td><td> 현미경 </td><td> 니콘 </td><td> SMZ645 </td><tD&gt; </td></tr><tr><td> 형광 현미경 분석 해 봅시다 </td><td> 현미경 </td><td> 올림푸스 </td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td> 디스크 공촛점 현미경 스피닝 </td><td> 현미경 </td><td> 니콘 </td><td> 에클 립스 티 </td><td> Yokagawa 회전 디스크 헤드와 함께 복 </td></tr><tr><td> CCD 카메라 </td><td> 카메라 </td><td> Andor </td><td> DV - 885 - VP </td><td> 1002x1004x8 마이크론 스퀘어 픽셀 </td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

상피 조직의 생체 항상성 유지 보수 장벽 기능을 중단하지 않고 손상된 세포의 지속적인 제거가 필요합니다. 우리의 연구는 죽는 세포는 출구에서 결과있을 수있는 격차를 닫는 동안 상피 시트에서 밖으로 배출 굴지과 마이 오신의 고리를 형성하고 계약에 그들의 사는 이웃에게 신호를 보내는 것을 발견, 과정은 세포 압출 1 칭했다. 개발 zebrafish의 광학 선명도는 상피 조직을 생활에 압출을 시각화하는 뛰어난 시스템을 제공합니다. 여기서 우리는 애벌레 zebrafish의 표피의 유도 및 이미지 압출하는 방법을 설명합니다. 압출을 시각화하기 위해, 우리는 표피의 녹색 형광 단백질을 표현 한 세포 단계의 배아 유전자 변형 zebrafish에 F - 굴지의 적색 형광 단백질로 분류 프로브를 삽입하고 애벌레로 G418를 추가하여 apoptosis를 유도. 우리는 다음 apoptotic 세포 압출의 과정에서 굴지의 역학과 상피 세포의 행동을 관찰하기 위해 회전하는 디스크 공촛점 현미경에서 시간 저속 이미지를 사용합니다. 이러한 접근 방식은 우리가 살고 상피 조직에서 압출 프로세스를 조사 수 있으며 apoptotic 세포를 제거하기 위해 실패로 인한 질병 상태를 연구하는 수단을 제공합니다.

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Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

죽어가는 세포는 장벽의 기능을 중단하지 않고 인접 세포의 수축에 의해 공동 상피 조직에서 압출하고 있습니다. 개발 zebrafish의 광학 선명도는 상피 조직을 생활에 압출을 시각화하는 뛰어난 시스템을 제공합니다. 여기 우리는 세포 해상도에서 애벌레 zebrafish의 표피의 유도 및 이미지 압출하는 방법을 설명합니다.

개발 Zebrafish의 표피에서 세포 압출의 라이브 영상

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

라이브 zebrafish의 배아에서 두 광자의 axotomy하고 시간이 경과 공촛점 영상

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

연구

생물학

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

공촛점 현미경으로 Zebrafish 배아 뇌 영상 라이브

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

성인 Zebrafish에서 기관의 해부

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

세포 운동성 및 Zebrafish 태아의 개별 뉴런과 신경 크레스트 세포의 굴지의 Cytoskeleton의 라이브 영상

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

라이브 Zebrafish 태아에서 두 광자 기반 Photoactivati​​on

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

개발 및 성인의 준비 Drosophila 두뇌와 라이브 영상을위한 Retinae

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

초기 자식 작용 이벤트의 셀 이미징 라이브 : Omegasomes을 넘어

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

모자이크 성인의 라이브 이미징 토마토 / GFP-FLP / FRT 방법<em&gt; 초파리</em&gt; 광 수용체 (photoreceptor)

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Zebrafish 독도에서 단일 셀 해상도 칼슘 이미징 사용 하 여 베타 세포 기능 분석

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...