Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

Мы благодарим членов лаборатории Розенблатт для научных дискуссий, предложения и замечания. Мы также хотели бы поблагодарить Марию Халлоран который любезно предоставил плазмиды, кодирующей RFP-UtrCH и Дэвид Грюнвальд, которые предоставили CK: GFP трансгенных данио. Спасибо также Гретхен Король и сотрудниками централизованных ресурсов данио рерио в Университете штата Юта, за отличное обслуживание и уход за рыбок данио. Работа выполнена при поддержке нью-Новатор NIH-NIGMS NIH директора премии 1 DP2 OD002056-01 для JR. ГТД была поддержана NIH многопрофильная рака Программа обучения Грант 5T32 CA03247-8.

Основные Workflow для визуализации актиновых динамика в процессе клеточного Экструзия в Эпидермис развивающихся данио рерио Эпидермис развивающихся данио состоит из двух отдельных слоев, поверхностный слой (или перидермы) и базального слоя клеток, что контакт базальной ме...

<ol>
	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

Протокол, описанный здесь, демонстрирует простой и прямой способ для визуализации процесса экструзии в живых эпителиальной ткани. Такого рода эксперимент позволяет нам изучить тонкости актина динамики не ранее оценил в основной анализ ткани, и, следовательно, дополняет общую иммуноф?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Имя </th><th> Тип </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> Реагент </td><td> Qiagen </td><td> 74104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6 Kit </td><td> Реагент </td><td> Амбион </td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td> Пересечение Цистерны </td><td> Инструмент </td><td> Thoren водных систем </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Внесите насоса </td><td> Инструмент </td><td> Продукты Бел искусства </td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ¾ Пастера Пипетируйте </td><td> Инструмент </td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td> Микроинъекция Mold </td><td> Инструмент </td><td> Адаптивная науки Инструменты </td><td> Я-34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15 мм пластины культуры </td><td> Инструмент </td><td> Рыболов </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / коричневый микропипеткой Puller </td><td> Инструмент </td><td> Саттер Instrument Company </td><td> Модель P97 </td><td></td></tr><tr><td> Боросиликатное стеклянных капилляров с накаливания </td><td> Инструмент </td><td> Саттер Instrument Company </td><td> B1400-78-10 </td><td> OD 1.0mm, 0.78mm ID, 10 см длиной </td></tr><tr><td> Jar электрода хранения </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты Всемирного Precision </td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td> Фенол красный </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> P0290 </td><td> 0,5% в DPBS </td></tr><tr><td> С контролируемым давлением Microinjector и микроманипулятора </td><td> Инструмент </td><td> Гарвардский аппарата </td><td> PLI-100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm Блюдо культуры </td><td> Инструмент </td><td> Cellstar </td><td> 627-160 </td><td></td></tr><tr><td> G418 (Генетицин) </td><td> Реагент </td><td> GIBCO </td><td> 10131-035 </td><td> 50 мг / мл в дН 2 0 </td></tr><tr><td> Дюмон # 5 Пинцет </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11253-20 </td><td></td></tr><tr><td> 12см Pin держатель </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Вставьте Pins </td><td> Инструмент </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 26007-02 и-03 </td><td></td></tr><tr><td> Со стеклянным дном культуры Блюдо с 1,5 покровного стекла </td><td> Инструмент </td><td> Маттек </td><td> P35G-1.5-10-C </td><td></td></tr><tr><td> Низкий Растопить агарозном </td><td> Реагент </td><td> Рыболов </td><td> BP1360-100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> -5040 </td><td></td></tr><tr><td> Препаровальная лупа </td><td> Микроскоп </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> Препаровальная лупа </td><td> Микроскоп </td><td> Nikon </td><td> SMZ645 </td><tг&gt; </td></tr><tr><td> Флуоресцентный микроскоп Анатомический </td><td> Микроскоп </td><td> Олимп </td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td> Вращающегося диска конфокальной микроскопии </td><td> Микроскоп </td><td> Nikon </td><td> Затмение Ti </td><td> Оборудованный диск голову Yokagawa спиннинг </td></tr><tr><td> CCD камера </td><td> Камера </td><td> Андор </td><td> DV-885-ВП </td><td> 1002x1004x8 микрон квадратных пикселей </td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

Гомеостатические поддержания эпителиальных тканей требует постоянного удаления поврежденных клеток, не нарушая барьерную функцию. Наши исследования показали, что умирающие клетки посылают сигналы в их живых соседей, чтобы форма и контракт кольцо актина и миозина, что выбрасывает его из эпителиальных листа при закрытии каких-либо пробелов, которые могут быть результатом его выход, и этот процесс называется ячейка экструзии 1. Оптической прозрачности развития данио обеспечивает отличная система для визуализации экструзии в живых эпителия. Здесь мы опишем метод, чтобы побудить и изображения экструзии в личиночной эпидермиса рыбок данио. Для визуализации экструзии, мы вводим красный флуоресцентный белок меченного зонда для F-актина в одно-клеточной стадии трансгенных эмбрионов данио выражения зеленого флуоресцентного белка в эпидермис и вызывать апоптоз путем добавления G418 для личинок. Затем с помощью покадровой изображения на вращающийся диск конфокальной микроскопии для наблюдения динамики актина и эпителиальных поведения клетка в процессе апоптоза клетка экструзии. Такой подход позволяет исследовать процесс экструзии в живых эпителия и будет предоставлять проспект изучать болезненных состояний, вызванных неустранения апоптоза клеток.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

Умирающие клетки выдавливается из эпителиальной ткани согласованные сокращения соседние клетки, не нарушая барьерную функцию. Оптической прозрачности развития данио обеспечивает отличная система для визуализации экструзии в живых эпителия. Здесь мы опишем методы, чтобы вызвать и изображения экструзии в личиночной эпидермиса данио на клеточном разрешения.

Живая изображения клеточных Экструзия из эпидермиса развивающихся данио рерио

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

Двухфотонное axotomy и покадровой конфокальной микроскопии в живых эмбрионов данио рерио

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Живая съемка данио рерио Эмбриональные мозга с помощью конфокальной микроскопии

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Препарирование органов у взрослых данио рерио

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Живая съемка подвижность клеток и актинового цитоскелета отдельных нейронов и нервных клеток Крест в данио рерио Эмбрионы

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Два-Фотон основе Фотоактивация в Живом данио рерио Эмбрионы

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Подготовка Разработка и взрослых Drosophila Мозги и сетчатки для живых изображений

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Живая съемка апоптоза клеток во время акции<em&gt; Drosophila</em&gt; Эмбриогенеза

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Живых изображений сотовый событий раннего этапа Аутофагия: Omegasomes и на последующий период

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Томатный / GFP-ФЛП / FRT Метод живых изображений мозаики взрослых<em&gt; Дрозофилы</em&gt; клетки фоторецепторов

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Анализ функции бета клеток с использованием одной ячейки резолюции кальция визуализации в Zebrafish островков

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...