Name: live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish
Uploaded: 2011-06-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

Biz bilimsel tartışma, öneri ve görüşleriniz için Rosenblatt laboratuvar üyeleri teşekkür ederim. GFP transgenik zebrafish: Biz de nazik CK plazmid kodlama RFP-UtrCH ve David Grunwald veren Mary Halloran teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, Gretchen Kral ve Zebra balığı mükemmel bir bakım ve özen Utah Üniversitesi&#39;nde Merkezi Zebra balığı Kaynak personeli. Bu çalışma, JR için OD002056-01 DP2 NIH-NIGMS NIH Direktörü Yeni Yenilikçisi Ödülü 1 tarafından desteklenmiştir. GTE NIH Multidisipliner Kanser Eğitim Programı Hibe 5T32 CA03247-8 tarafından desteklenmiştir.

Gelişmekte olan Zebra balığı Epidermis Hücre Ekstrüzyon sırasında Aktin Dinamiği Görselleştirme için temel iş akışı Gelişmekte olan zebrafish epidermisin iki farklı katmanları, yüzey tabakası (veya periderm) ve bazal membran 2 kontak hücrelerinin bazal tabaka oluşur. Dış yüzey tabakasının hücrelerde apoptozis geçmesi ve ekstrüzyon 3 (Şekil 1) doku ortadan kalkar. Bu sürecin gerçek zamanlı olarak görselleştirmek için, ...

<ol>
	<li>Rosenblatt, J., Raff, M. C., Cramer, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+epithelial+cell+destined+for+apoptosis+signals+its+neighbors+to+extrude+it+by+an+actin-+and+myosin-dependent+mechanism.">An epithelial cell destined for apoptosis signals its neighbors to extrude it by an actin- and myosin-dependent mechanism.</a> Curr Biol. 11, 1847-1857 (2001).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> Int J Dev Biol. 48, 217-231 (2004).</li><li>Slattum, G., McGee, K. M., Rosenblatt, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P115+RhoGEF+and+microtubules+decide+the+direction+apoptotic+cells+extrude+from+an+epithelium.">P115 RhoGEF and microtubules decide the direction apoptotic cells extrude from an epithelium.</a> J Cell Biol. 186, 693-702 (2009).</li><li>Burkel, B. M., Dassow, G. v. o. n., Bement, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+fluorescent+probes+for+actin+filaments+based+on+the+actin-binding+domain+of+utrophin.">Versatile fluorescent probes for actin filaments based on the actin-binding domain of utrophin.</a> Cell Motil Cytoskeleton. 64, 822-832 (2007).</li><li>Berndt, J. D., Clay, M. R., Langenberg, T., Halloran, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rho-kinase+and+myosin+II+affect+dynamic+neural+crest+cell+behaviors+during+epithelial+to+mesenchymal+transition+in+vivo.">Rho-kinase and myosin II affect dynamic neural crest cell behaviors during epithelial to mesenchymal transition in vivo.</a> Dev Biol. 324, 236-244 (2008).</li><li>Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=fluorescent+protein+expression+in+germ-line+transmitted+transgenic+zebrafish+under+a+stratified+epithelial+promoter+from+keratin8.">fluorescent protein expression in germ-line transmitted transgenic zebrafish under a stratified epithelial promoter from keratin8.</a> Dev Dyn. 223, 204-215 (2002).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book, A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+morpholino+antisense+oligonucleotides+in+zebrafish+embryos.">Microinjection of mRNA and morpholino antisense oligonucleotides in zebrafish embryos.</a> J Vis Exp. , (2009).</li><li>Curado, S., Stainier, D. Y., Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitroreductase-mediated+cell/tissue+ablation+in+zebrafish:+a+spatially+and+temporally+controlled+ablation+method+with+applications+in+developmental+and+regeneration+studies.">Nitroreductase-mediated cell/tissue ablation in zebrafish: a spatially and temporally controlled ablation method with applications in developmental and regeneration studies.</a> Nat Protoc. 3, 948-954 (2008).</li></ol>

Burada açıklanan protokol canlı bir epitel doku ekstrüzyon işlemini görselleştirmek için basit ve kolay bir yöntem gösteriyor. Bu tür deney bize sabit doku analizleri önceden takdir aktin dinamiklerinin inceliklerini incelemek için izin verir ve bu nedenle, ortak immunofluorescent yöntemleri tamamlar. Biz, inflamatuar yanıtlar ya da hasar gören hücrelerin birikimine yol açacaktır beklediğimiz apoptotik hücreleri, uzaklaştırmak ve temizlemek için yetmezliği ile ilişkili ekstrüzyon süreci ve ç...

<table border="1"><tbody><tr><th> Isim </th><th> Tip </th><th> Şirket </th><th> Katalog Numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> RNeasy Mini Kit </td><td> Reaktif </td><td> Qiagen </td><td> 74104 </td><td></td></tr><tr><td> mMessage mMachine SP6 Kiti </td><td> Reaktif </td><td> Ambion </td><td> AM1340 </td><td></td></tr><tr><td> Geçiş Tankları </td><td> Araç </td><td> Thoren Sucul Sistemleri </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pipetleyin Pompa </td><td> Araç </td><td> Bel Sanat Ürünleri </td><td> F3789 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ¾ Pasteur pipetleyin </td><td> Araç </td><td> VWR </td><td> 14672-608 </td><td></td></tr><tr><td> Mikroenjeksiyon Kalıp </td><td> Araç </td><td> Adaptif Bilim Araçları </td><td> I-34 </td><td></td></tr><tr><td> 100x15mm Kültür Plakası </td><td> Araç </td><td> Balıkçı </td><td> 08-757-12 </td><td></td></tr><tr><td> Flamming / Kahverengi mikropipet Çektirme </td><td> Araç </td><td> Sutter Enstrüman Şirketi </td><td> Model P97 </td><td></td></tr><tr><td> Filament ile Borosilikat Cam kılcal </td><td> Araç </td><td> Sutter Enstrüman Şirketi </td><td> B1400-78-10 </td><td> OD 1.0mm ID 0.78mm, 10cm uzunluğunda </td></tr><tr><td> Elektrot kavanozda </td><td> Araç </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> E210 </td><td></td></tr><tr><td> Fenol Kırmızı </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> P0290 </td><td> DPBS yılında% 0.5 </td></tr><tr><td> Basınç Kontrollü mikroenjektör ve Mikromanipülatör </td><td> Araç </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PLI-100 </td><td></td></tr><tr><td> 35x10mm Kültür Bulaşık </td><td> Araç </td><td> Cellstar </td><td> 627-160 </td><td></td></tr><tr><td> G418 (Geneticin) </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 10131-035 </td><td> DH 50 mg / ml 2 0 </td></tr><tr><td> Dumont # 5 Forseps </td><td> Araç </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11253-20 </td><td></td></tr><tr><td> 12cm Pin sahibi </td><td> Araç </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26016-12 </td><td></td></tr><tr><td> Pins Ekle </td><td> Araç </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 26.007-02-03 </td><td></td></tr><tr><td> Glass Bottom Kültür Bulaşık 1.5 coverglass </td><td> Araç </td><td> Mattek </td><td> P35G-1.5-10-C </td><td></td></tr><tr><td> Düşük eritin Agaroz </td><td> Reaktif </td><td> Balıkçı </td><td> BP1360-100 </td><td></td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> A-5040 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon Mikroskop </td><td> Mikroskop </td><td> Leica </td><td> MZ6 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon Mikroskop </td><td> Mikroskop </td><td> Nikon </td><td> SMZ645 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Floresan Diseksiyon Mikroskop </td><td> Mikroskop </td><td> Olympus </td><td> S2X12 </td><td></td></tr><tr><td> İplik Disk Konfokal Mikroskop </td><td> Mikroskop </td><td> Nikon </td><td> Eclipse Ti </td><td> Bir Yokagawa iplik disk kafası ile donatılmış </td></tr><tr><td> CCD Kamera </td><td> Kamera </td><td> Andor </td><td> DV-885-VP </td><td> 1002x1004x8 mikron kare piksel </td></tr></tbody></table>

live imaging of cell extrusion from the epidermis of developing zebrafish

Epitel dokuların Homeostatik bakım bariyer fonksiyonunu bozmadan hasarlı hücreleri sürekli çıkarılmasını gerektirir. Çalışmalarımız, ölmekte olan hücrelerin kendi çıkışına neden olabilir herhangi bir boşluk kapanış ise epitel yaprak dışarı çıkar, aktin ve miyozin bir halka oluşturacak ve sözleşme canlı komşuları sinyalleri göndermek bulduk, bir süreç olarak adlandırılan hücre ekstrüzyon 1. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada larva zebrafish epidermiste neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemi açıklanmaktadır. Ekstrüzyon görselleştirmek için, epidermisin yeşil floresan protein tek hücreli aşamasında ifade transgenik zebrafish embriyolar F-aktin kırmızı floresan proteini etiketli prob enjekte ve larvaları için G418 ek apopitoz indükleyen. Daha sonra apoptotik hücre ekstrüzyon sürecinde aktin dinamikleri ve epitelyal hücre davranışlarını gözlemlemek için dönen bir disk konfokal mikroskop zaman atlamalı görüntüleme kullanın. Bu yaklaşım bize canlı epitel ekstrüzyon işleminin araştırmak için izin verir ve apoptotik hücreleri ortadan kaldırmak için başarısızlık neden olduğu hastalık durumlarını incelemek için bir yol sağlayacak.

Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish at JoVE.com

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

Dying hücreler komşu hücrelerle birlikte daralma bariyer fonksiyonunu bozmadan epitel dokuların ekstrüde. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada hücresel çözünürlükte larva zebrafish epidermisin neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemleri açıklanmaktadır.

Gelişmekte olan Zebra balığı Epidermis Hücre Ekstrüzyon Canlı Görüntüleme

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

İki foton axotomy ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme canlı zebrafish embriyolar

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Live Imaging of the Zebrafish Embryonic Brain by Confocal Microscopy

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

In this video, we demonstrate the method our lab has developed to analyze the cell shape changes and rearrangements required to bend and fold the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Yetişkin Zebra balığı Organları diseksiyonu

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Live Imaging of Cell Motility and Actin Cytoskeleton of Individual Neurons and Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

Zebra balığı Embriyolar Bireysel Nöronlar ve Sinir Crest Hücreler Aktin Sitoiskelet Hücre Motilite ve Canlı Görüntüleme

The zebrafish is an ideal model for imaging cell behaviors during development in vivo. Zebrafish embryos are externally fertilized and thus easily ...

Two-Photon-Based Photoactivation in Live Zebrafish Embryos

Canlı Zebra balığı Embriyolar iki-Foton-Tabanlı fotoaktivasyon

Photoactivation of target compounds in a living organism has proven a valuable approach to investigate various biological processes such as embryonic ...

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Preparation of Developing and Adult Drosophila Brains and Retinae for Live Imaging

Geliştirilmesi ve Yetişkin hazırlanması Drosophila Brain ve Canlı Görüntüleme için Retinae

The Drosophila brain and visual system are widely utilized model systems to study neuronal development, function and degeneration. Here we show three ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Live Cell Imaging of Early Autophagy Events: Omegasomes and Beyond

Erken Otofaji Etkinlikler Hücre Görüntüleme Canlı: Omegasomes ve Ötesi

Autophagy is a  cellular response triggered by the lack of nutrients, especially the absence of  amino acids. Autophagy is defined by the formation of ...

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

The Tomato/GFP-FLP/FRT Method for Live Imaging of Mosaic Adult Drosophila Photoreceptor Cells

Mozaik Yetişkin Canlı Görüntüleme Domates / GFP-FLP / FRT Yöntemi<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotoreseptör Hücreler

The Drosophila eye is widely used as a model  for studies of development and neuronal degeneration. With the powerful mitotic  recombination technique, ...

Analysis of Beta-cell Function Using Single-cell Resolution Calcium Imaging in Zebrafish Islets

Zebra balığı adacıkları tek hücreli çözünürlük kalsiyum Imaging'i kullanma Beta hücre fonksiyonu Analizi

Pancreatic beta-cells respond to increasing blood glucose concentrations by secreting the hormone insulin. The dysfunction of beta-cells leads to ...