Name: visualization of mg53-mediated cell membrane repair using in vivo and in vitro systems
Uploaded: 2011-06-30T12:00:00
Duration: 10 min 19 s
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	<li>Armstrong, R. B., Ogilvie, R. W., Schwane, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eccentric+exercise-induced+injury+to+rat+skeletal+muscle.">Eccentric exercise-induced injury to rat skeletal muscle.</a> J Appl Physiol. 54, 80-93 (1983).</li><li>Hamer, P. W., McGeachie, J. M., Davies, M. J., Grounds, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evans+Blue+Dye+as+an+in+vivo+marker+of+myofibre+damage:+optimising+parameters+for+detecting+initial+myofibre+membrane+permeability.">Evans Blue Dye as an in vivo marker of myofibre damage: optimising parameters for detecting initial myofibre membrane permeability.</a> J Anat. 200, 69-79 (2002).</li><li>Cai, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MG53+nucleates+assembly+of+cell+membrane+repair+machinery.">MG53 nucleates assembly of cell membrane repair machinery.</a> Nat Cell Biol. 11, 56-64 (2009).</li><li>Cochilla, A. J., Angleson, J. K., Betz, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+secretory+membrane+with+FM1-43+fluorescence.">Monitoring secretory membrane with FM1-43 fluorescence.</a> Annu Rev Neurosci. 22, 1-10 (1999).</li><li>McNeil, P. L., Miyake, K., Vogel, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+endomembrane+requirement+for+cell+surface+repair.">The endomembrane requirement for cell surface repair.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 4592-4597 (2003).</li><li>Cai, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+repair+defects+in+muscular+dystrophy+are+linked+to+altered+interaction+between+MG53,+caveolin-3,+and+dysferlin.">Membrane repair defects in muscular dystrophy are linked to altered interaction between MG53, caveolin-3, and dysferlin.</a> J Biol Chem. 284, 15894-15902 (2009).</li><li>Wang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardioprotection+of+ischemia/reperfusion+injury+by+cholesterol-dependent+MG53-mediated+membrane+repair.">Cardioprotection of ischemia/reperfusion injury by cholesterol-dependent MG53-mediated membrane repair.</a> Circ Res. 107, 76-83 (2010).</li><li>Knab, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeatability+of+exercise+behaviors+in+mice.">Repeatability of exercise behaviors in mice.</a> Physiol Behav. 98, 433-440 (2009).</li><li>Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+resistance+to+fatigue+and+altered+calcium+handling+properties+of+sarcalumenin+knockout+mice.">Enhanced resistance to fatigue and altered calcium handling properties of sarcalumenin knockout mice.</a> Physiol Genomics. 23, 72-78 (2005).</li><li>Massett, M. P., Berk, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-dependent+differences+in+responses+to+exercise+training+in+inbred+and+hybrid+mice.">Strain-dependent differences in responses to exercise training in inbred and hybrid mice.</a> Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 288, 1006-1013 (2005).</li><li>Bansal, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+membrane+repair+in+dysferlin-deficient+muscular+dystrophy.">Defective membrane repair in dysferlin-deficient muscular dystrophy.</a> Nature. 423, 168-172 (2003).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

ट्रेडमिल चल रहे पशुओं का इलाज करने के लिए एक व्यायाम भार प्रदान करने में एक उपयोगी पद्धति है. मापने मांसपेशी समारोह या धीरज क्षमता के लिए एक पद्धति के रूप में यह एक कुख्यात शोर दृष्टिकोण है कि लगातार प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य 8 फैशन में निष्पादित करने के लिए मुश्किल है. सामान्य में, थकावट के समय के एक endpoint के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है उन जैसे कुछ पीटकर माउस लाइनों और जंगली प्रकार 9 चूहों के बीच प्रयोगात्मक समूहों के बीच प्रमुख मतभेद हल करने के लिए. प्रायोगिक जोड़तोड़ कि अधिक सूक्ष्म अंतर है, जैसे कुछ दवा परीक्षण का उत्पादन, इस तकनीक के साथ जुड़े शोर ऊपर मतभेद नहीं हल हो सकती है. आदेश में और इन तकनीकों के reproducibility संवेदनशीलता को अधिकतम करने के लिए यह महत्वपूर्ण है सत्र सत्र के लिए स्थिति बहुत बारीकी से बनाए रखने के. दिन के समय जानवरों का प्रयोग कर रहे हैं, के रूप में अच्छी तरह से गर्म अवधि शर्तों के रूप में इस्तेमाल किया, महत्वपूर्ण कारक हैं और परीक्षण से परीक्षण करने के लिए लगातार रहना चाहिए. तनाव प्रभाव ट्रेडमिल प्रोटोकॉल के डिजाइन पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है चूहों के कुछ उपभेदों के रूप में अन्य उपभेदों से ट्रेडमिल पर बहुत अधिक समय के लिए चलाने के लिए और धीरज 10 व्यायाम करने के लिए अलग प्रतिक्रिया कर सकते हैं कर सकते हैं. एक सामान्य दिशानिर्देश के रूप में, कई चूहों ट्रेडमिल की गति में लगातार वृद्धि (5 मी / मी 1 मी / मी शुरू होने के बाद प्रत्येक मिनट के लिए जोड़ी के साथ प्रारंभिक गति) के साथ एक थकावट अध्ययन में 200-300 मीटर की दूरी पर कुल चलाने के लिए सक्षम हो जाएगा. एक धीरज व्यायाम के लिए चूहों में 30 2 मिनट या 3 बार एक सप्ताह के लिए - 9 से 12 मीटर मी / के बीच चलाया जा सकता है है. हालांकि, व्यक्तिगत अध्ययन आमतौर पर व्यक्तिगत प्रयोगात्मक मैच की जरूरत के लिए प्रोटोकॉल के कुछ अनुकूलन की आवश्यकता होगी. नुकसान यूवी लेजर प्रक्रिया के कंकाल की मांसपेशी 3,6,11 फाइबर की झिल्ली की मरम्मत की क्षमता को मापने के लिए एक कारगर तरीका होना दिखाया गया है. इन प्रयोगों की सफलता के लिए एक महत्वपूर्ण घटक केवल मांसपेशी फाइबर है कि striations के एक नियमित पैटर्न और एक चिकनी sarcolemma है कि झुर्रियों वाली होती है प्रकट नहीं होता है के साथ एक सीधी, रॉड आकार उपस्थिति प्रदर्शन का उपयोग है. यदि अन्य मांसपेशी फाइबर का चयन कर रहे हैं झिल्ली क्षति पहले से ही इन प्रयोगों से परिणाम की इन तंतुओं और व्याख्या में मौजूद जटिल हो सकता है हो सकता है. यह भी महत्वपूर्ण है कि फाइबर और विकिरणित क्षेत्र की परिभाषा के उन्मुखीकरण के रूप में चित्र 1 में परिभाषित किया जा. यह प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य आकार के एक चोट प्रदान करता है, इस प्रकार फाइबर के बीच तुलना की अनुमति है. यदि चोट के परिभाषित क्षेत्र फाइबर के भीतर पूरी तरह झूठ है, एक आंतरिक चोट के बजाय sarcolemma में खलल न डालें बनाया जाएगा. इसके अतिरिक्त, ΔF / एफ 0 के लिए परिकलित मान बहुत मतलब प्रतिदीप्ति की माप के लिए चयनित हित के क्षेत्र के प्रति संवेदनशील है. 200μm लगभग 2, और चोट साइट सहित निकट के एक क्षेत्र उपयुक्त है. चोट के लिए परिभाषित क्षेत्र के विपरीत, इस क्षेत्र में पूरी तरह से फाइबर के भीतर झूठ चाहिए. यदि आप फाइबर के बाहर अंतरिक्ष शामिल हैं, जिसके परिणामस्वरूप रिक्त क्षेत्र थोड़ा डाई प्रवेश के साथ फाइबर में ΔF / 0 एफ वृद्धि जबकि एक और अधिक गंभीर phenotype के साथ फाइबर में ΔF / 0 एफ कम होगा. इस परख की संवेदनशीलता घट जाती है, इस तरह फाइबर के बीच तुलना और अधिक कठिन बना. Micropipette नुकसान परख के लिए, micropipette और गिलास नीचे पकवान के बीच लगभग 45 डिग्री के कोण के क्रम में करने के लिए प्रभावी ढंग से कोशिका झिल्ली को नुकसान चाहिए. कोशिकाओं micropipette क्षति के लिए चुने गए कसकर पकवान के नीचे करने के लिए संलग्न किया जाना चाहिए और गोल कोशिकाओं के रूप में सबसे अधिक संभावना से उपयोग नहीं किया जा micropipette poking के बाद वे अलग होना चाहिए. Saponin permeabilzation प्रयोगों कम तकनीकी रूप से मांग और अपेक्षाकृत जल्दी करने के लिए पैठ assays micropipette तुलना में प्रदर्शन कर रहे हैं. हालांकि, वहाँ सैपोनिन क्षति के लिए कई सीमाओं कि केवल एक ही कक्ष पकवान प्रति इस्तेमाल किया जा सकता है के बाद से फैलाना सैपोनिन और है कि डिश में क्षति अन्य कक्षों सहित, कर रहे हैं.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th></tr><tr><td> कृंतक ट्रेडमिल </td><td> कोलंबस इंस्ट्रूमेंट्स 3 / 6 या समकक्ष exer </td><td></td></tr><tr><td> 70% इथेनॉल </td><td> आईएससी Bioexpress </td><td></td></tr><tr><td> ठीक टिप संदंश, वसंत कैंची सहित विच्छेदन उपकरण </td><td> विश्व परिशुद्धता उपकरण </td><td></td></tr><tr><td> 2 collagenase मिलीग्राम / एमएल मैं प्रकार </td><td> सिग्मा </td><td></td></tr><tr><td> 0 2 Ca + Tyrode बफर (140 मिमी NaCl, 5 मिमी KCl, 10 मिमी HEPES, 2 मिमी 2 MgCl, 7.2 पीएच, 290 mosm) </td><td> सिग्मा </td><td></td></tr><tr><td> 2.5mm 2 Ca + Tyrode बफर (140 मिमी NaCl, 2.5 मिमी 2 CaCl, 5 मिमी KCl, 10 मिमी HEPES, 2 मिमी 2 MgCl, 7.2 पीएच, 290 mosm) </td><td> सिग्मा </td><td></td></tr><tr><td> तापमान नियंत्रणीय कक्षीय प्रकार के बरतन </td><td> नई ब्राउनश्विक या समकक्ष </td><td></td></tr><tr><td> डेल्टा टीपीजी डिश </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 1207133 </td></tr><tr><td> 510 LSM एक Enterprise 80 मेगावाट यूवी लेजर या समकक्ष confocal खुर्दबीन के साथ confocal खुर्दबीन </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> FM1-43 या FM4-64 रंजक </td><td> Invitrogen </td><td></td></tr><tr><td> Borosilicate capillaries आकार 0.8-1.0 एक्स 100 मिमी </td><td> Pyrex </td><td> भाग 9530-2 सं. </td></tr><tr><td> Micropipette डांड़ी </td><td> Sutter उपकरण </td><td> मॉडल पी - 97 </td></tr><tr><td> 3 अक्ष micromanipulator </td><td> Narishige </td><td> MHW - 3 </td></tr><tr><td> 2100 चमक लेजर स्कैनिंग confocal खुर्दबीन या समकक्ष खुर्दबीन </td><td> BioRad </td><td> MHW - 3 </td></tr><tr><td> Saponin </td><td> सिग्मा </td><td> 47036 </td></tr></tbody></table>

visualization of mg53-mediated cell membrane repair using in vivo and in vitro systems

कोशिका झिल्ली को गंभीर चोट की मरम्मत सामान्य सेलुलर शरीर क्रिया विज्ञान के एक मौलिक प्रक्रिया है, और दोषपूर्ण झिल्ली की मरम्मत कई अपक्षयी मानव रोगों से जोड़ा गया है. MG53 झिल्ली resealing मशीनरी के एक प्रमुख घटक के रूप में हाल ही में खोज ऊतकों की मरम्मत के बुनियादी जीव विज्ञान, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पुनर्योजी चिकित्सा में संभावित translational अनुप्रयोगों के लिए की एक बेहतर समझ आणविक के लिए अनुमति देता है. यहाँ हम मांसपेशी माउस मॉडल पर पृथक मांसपेशी फाइबर में डाई प्रविष्टि को मापने के द्वारा पूर्व vivo झिल्ली की मरम्मत की क्षमता का परीक्षण करने के लिए ट्रेडमिल व्यायाम प्रोटोकॉल, का उपयोग चोट की मरम्मत में MG53 के vivo समारोह में खोज, और गतिशील प्रक्रिया की निगरानी के लिए के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल विस्तार MG53 की मध्यस्थता पुटिका तस्करी और सुसंस्कृत रहते सेल confocal माइक्रोस्कोपी का उपयोग कोशिकाओं में कोशिका झिल्ली की मरम्मत की.

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Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using in vivo and in vitro Systems

यहाँ वर्णित हैं पूरे पशुओं में MG53 की मध्यस्थता सेल झिल्ली की मरम्मत और सेलुलर स्तर पर गतिशील प्रक्रिया कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल. इन विधियों के प्लाज्मा झिल्ली resealing और पुनर्योजी चिकित्सा की कोशिका जीव विज्ञान की जांच करने के लिए लागू किया जा सकता है.

MG53 मध्यस्थता सेल झिल्ली का प्रयोग मरम्मत के विज़ुअलाइज़ेशन Vivo में और इन विट्रो में सिस्टम

Repair of acute injury to the cell membrane is an elemental process of normal cellular physiology, and defective membrane repair has been linked to many ...

Research

JoVE Journal

Biology

Visualization of MG53-mediated Cell Membrane Repair Using in vivo and in vitro Systems

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

माइक्रो इलेक्ट्रो मैकेनिकल सिस्टम्स (MEMS) का उपयोग करने के लिए नैदानिक ​​उपकरण का विकास

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

वीडियो मानव भ्रूण स्टेम सेल कॉलोनी विकास के विश्लेषण बायोइनफॉरमैटिक्स

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Analysis of Schwann-astrocyte Interactions Using In Vitro Assays

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श्वान - astrocyte का उपयोग सहभागिता के विश्लेषण इन विट्रो में Assays

Schwann cells are one of the commonly used cells in repair strategies following spinal cord injuries. Schwann cells are capable of supporting axonal ...

Protein Membrane Overlay Assay: A Protocol to Test Interaction Between Soluble and Insoluble Proteins in vitro

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प्रोटीन झिल्ली उपरिशायी परख: एक घुलनशील और अघुलनशील प्रोटीन के बीच बातचीत टेस्ट प्रोटोकॉल इन विट्रो में</em

Validating interactions between different proteins is vital for investigation of their biological functions on the molecular level.  There are several ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

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प्रतिदीप्ति का प्रयोग mRNA अणुओं के दृश्य और विश्लेषण<em&gt; स्वस्थानी</emमें&gt; संकरण<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

Imaging Cell Membrane Injury and Subcellular Processes Involved in Repair

इमेजिंग सेल झिल्ली चोट और मरम्मत में शामिल Subcellular प्रक्रियाओं

The ability of injured cells to heal is a fundamental cellular process, but cellular and molecular mechanisms involved in healing injured cells are poorly ...

Analysis of RNA Processing Reactions Using Cell Free Systems: 3' End Cleavage of Pre-mRNA Substrates in vitro

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पूर्व mRNA Substrates के 3 &#39;अंत विखंडन: सेल फ्री सिस्टम का प्रयोग शाही सेना प्रसंस्करण प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण<em&gt; इन विट्रो</em

The 3&#8217; end of mammalian mRNAs is not formed by abrupt termination of transcription by RNA polymerase II (RNPII). Instead, RNPII synthesizes ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

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मापने की कठोरता<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; माउस Aortas परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

Pulling Membrane Nanotubes from Giant Unilamellar Vesicles

खींच झिल्ली नैनोट्यूब से विशाल Unilamellar बुलबुले

The reshaping of the cell membrane is an integral part of many cellular phenomena, such as endocytosis, trafficking, the formation of filopodia, etc. Many ...

In Vitro and In Vivo Approaches to Determine Intestinal Epithelial Cell Permeability

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इन विट्रो में और Vivo में आंतों उपकला कोशिका पारगम्यता का निर्धारण करने के लिए दृष्टिकोण

The intestinal barrier defends against pathogenic microorganism and microbial toxin. Its function is regulated by tight junction permeability and ...