Name: flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas
Uploaded: 2011-07-01T13:00:00
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PO1 HL55798（KLへ）とアメリカ心臓協会サイエンティスト開発グラント0525532U（例に）：この作品は、健康補助金の国立研究所によってサポートされていました。

1。マウス大動脈の分離手続きの制度的IACUCの委員会の承認は、マウスで動作するように要求される。 <ol><li> 50ミリリットルのPBSと混合するためにチューブを反転するヘパリンナトリウム1000単位を追加してheparinzed PBSを準備します。血液および収集する各大動脈のためにPBSを含むコレクションチューブのための空のコレクションチューブを準備します。氷の上にすべての...

<ol>
	<li>Lusis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-2341 (2000).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+inflammatory+mechanisms+of+atherosclerosis.">Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis.</a> Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).</li><li>Hansson, G. K., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+in+atherosclerosis:+a+double-edged+sword.">The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword.</a> Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+influx+in+atherosclerosis.">Leukocyte influx in atherosclerosis.</a> Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).</li><li>Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+of+atherosclerotic+plaque+cells+from+human+carotids:+a+validation+study.">Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study.</a> Cytometry. 39, 158-165 (2000).</li><li>Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+analysis+of+macrophage-derived+foam+cells+from+human+atherosclerotic+lesions+by+using+a+"mock"+FL3+channel+in+flow+cytometry.">Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a "mock" FL3 channel in flow cytometry.</a> Cytometry. 29, 155-164 (1997).</li><li>Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+recruitment+into+the+aortic+wall+before+and+during+development+of+atherosclerosis+is+partially+L-selectin+dependent.">Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent.</a> J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li><li>Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+interleukin-17A+results+in+reduced+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Circulation. 121, 1746-1755 (2010).</li><li>Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-17+and+interferon-gamma+are+produced+concomitantly+by+human+coronary+artery-infiltrating+T+cells+and+act+synergistically+on+vascular+smooth+muscle+cells.">Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells.</a> Circulation. 119, 1424-1432 (2009).</li></ol>

ここで、我々はマウス大動脈の免疫細胞組成の調査のためにフローサイトメトリーベースの手法を提案する。この方法の主な利点は、単一細胞レベルで大動脈免疫細胞を分析すると大動脈白血球の活性化状態を特徴づけるためにできることです。このメソッドは、マウス大動脈に限定し、我々 （未発表データ）と、他の10は、内胸動脈、大動脈弁、冠状動脈のような人間の標本を分?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 材料 </td><td> カタログ番号 </td><td> 会社 </td></tr><tr><td>コラゲナーゼXI </td><td> C7657 </td><td>シグマアルドリッチ</td></tr><tr><td>ヒアルロニダーゼ</td><td> H3506 </td><td>シグマアルドリッチ</td></tr><tr><td> DNアーゼI、タイプ2 </td><td> D4527 </td><td>シグマアルドリッチ</td></tr><tr><td>コラゲナーゼI </td><td> C0130 </td><td>シグマアルドリッチ</td></tr><tr><td>コラゲナーゼII </td><td> LS004174 </td><td>ワーシントン生化学株式会社</td></tr><tr><td>エラスターゼ</td><td> LS002292 </td><td>ワーシントン生化学株式会社</td></tr></tbody></table>

flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas

アテローム性動脈硬化症は、泡沫細胞、免疫細胞、血管内皮細胞と平滑筋細胞、血小板、細胞外マトリックス、および広範な壊死を伴う脂質の豊富なコアで構成されたプラークの形成を特徴とされる中規模および大規模血管の慢性炎症性プロセスのことです周囲組織の線維化1免疫応答の自然免疫と獲得武器がアテローム性動脈硬化の開始、開発と持続性に関与している。2、3、証拠の重要な体は樹状突起は、マクロファージなどの免疫細胞の異なるサブセットがあるリンクです。細胞、TおよびBリンパ球は、4健康とアテローム性動脈硬化症を起こしやすいマウスの大動脈内に存在する。さらに、免疫細胞がアテローム発生にこの組織の重要な役割を示唆している周囲の大動脈外膜に記載されています。2 当分の間、免疫細胞、それらの活性化状態、および大動脈壁内の細胞組成の異なる種類の定量的検出は、アテローム性動脈硬化症の研究のためにRT - PCRと免疫組織化学的方法によって限定されていました。いくつかの試みが、人間の大動脈を用いてフローサイトメトリーを実行するために作られた、そしてこのような高い自家蛍光などのさまざまな問題は、5,6を報告されている。人間のアテローム性動脈硬化プラークは、コラゲナーゼ1で消化した、と自由な細胞はCD14のために回収し、染色した+ / CD11cは+マクロファージ由来泡沫細胞を強調する。本研究では、&quot;モック&quot;チャネルは、偽陽性染色を避けるために使用された。消化の過程で蓄積する6壊死性物質は大動脈の試料で高い自家蛍光を発生する破片が大量に生じさせる。この問題を解決するには、陰性および陽性対照のパネルが提案されているが、唯一の二重染色は、これらのサンプルに適用することができます。我々は、免疫細胞組成を分析し、活性化、増殖、健康とアテローム性動脈硬化症を起こしやすい大動脈の免疫細胞の分化を特徴づけるために新たなフローサイトメトリーベースの方法7を開発した。このメソッドは、大動脈壁の免疫細胞組成の調査を可能にし、この病気の免疫的側面の調査のための免疫学的方法の広いスペクトルを使用する可能性を開きます。

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Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

本論文では、大動脈の免疫成分を調査するために、フローサイトメトリーベースの方法を提示。本稿では、また別々に周囲の外膜と血管壁を調べることができる追加のテクニックを示しています。このメソッドは、大動脈白血球の表現型解析を実行し、アテローム性動脈硬化症の研究のためにいくつかの免疫学的アッセイを適用する可能性を開きます。

マウス大動脈内の免疫細胞のフローサイトメトリー分析

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

フローサイトメトリーで固定し、生細胞におけるカルパイン活性の測定

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

ヒトのインビトロ</em免疫バランスの初期状態の認識のためのスクリーニングツールとして>抑制

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

機能と分子生物学的研究のためのプライマリマウスII型肺胞上皮細胞のフローサイトメトリ分離

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

細胞内染色およびフローサイトメトリーは、高血圧のモデルにおけるマウス大動脈、腎臓及びリンパ節内のリンパ球サブセットを識別するために、

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

フローサイトメトリーをイメージングを用いた人間システムの免疫シナプスの定性・定量分析

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

離とマウスとヒトの肺胞マクロファージの体外培養

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Discrimination of Seven Immune Cell Subsets by Two-fluorochrome Flow Cytometry

7 免疫細胞サブセット 2 螢光色素の差別フローサイトメトリー

Immune cell characterization heavily relies on multicolor flow cytometry to identify subpopulations based on differential expression of surface markers. ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

好中球系統細胞の質量細胞法解析に対する全骨髄の調製

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

フローサイトメトリー解析のためのマウス腎臓レジデントCD8+T 細胞の分離

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Analysis of SAMHD1 Restriction by Flow Cytometry in Human Myeloid U937 Cells

ヒト骨髄性U937細胞におけるフローサイトメトリーによるSAMHD1制限の解析

Sterile &#945;-motif/histidine-aspartate domain-containing protein 1 (SAMHD1) inhibits replication of HIV-1 in quiescent myeloid cells. U937 cells are ...