Name: flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas
Uploaded: 2011-07-01T13:00:00
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PO1 HL55798 (KL)를 미국 심장 협회 과학 발전 부여 0525532U (예)을 :이 작품은 보건 부여의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

1. murine aortas의 분리 절차의 기관 IACUC위원회의 승인은 마우스 작동하도록해야합니다. <ol><li> 50 ML PBS와 혼합하는 반전 튜브에 헤파린 나트륨 1000 단위를 추가하여 heparinzed PBS를 준비합니다. 혈액 및 수거 각 대동맥에 대한 PBS를 포함하는 컬렉션 튜브 빈 컬렉션 튜브를 준비합니다. 얼음의 모든 튜브 보관하십시오. </li><li> 그리기 혈액 (1000 U / ML 헤파린 나트륨의 0.1ml)을 주사?...

<ol>
	<li>Lusis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-2341 (2000).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+inflammatory+mechanisms+of+atherosclerosis.">Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis.</a> Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).</li><li>Hansson, G. K., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+in+atherosclerosis:+a+double-edged+sword.">The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword.</a> Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+influx+in+atherosclerosis.">Leukocyte influx in atherosclerosis.</a> Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).</li><li>Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+of+atherosclerotic+plaque+cells+from+human+carotids:+a+validation+study.">Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study.</a> Cytometry. 39, 158-165 (2000).</li><li>Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+analysis+of+macrophage-derived+foam+cells+from+human+atherosclerotic+lesions+by+using+a+"mock"+FL3+channel+in+flow+cytometry.">Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a "mock" FL3 channel in flow cytometry.</a> Cytometry. 29, 155-164 (1997).</li><li>Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+recruitment+into+the+aortic+wall+before+and+during+development+of+atherosclerosis+is+partially+L-selectin+dependent.">Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent.</a> J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li><li>Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+interleukin-17A+results+in+reduced+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Circulation. 121, 1746-1755 (2010).</li><li>Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-17+and+interferon-gamma+are+produced+concomitantly+by+human+coronary+artery-infiltrating+T+cells+and+act+synergistically+on+vascular+smooth+muscle+cells.">Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells.</a> Circulation. 119, 1424-1432 (2009).</li></ol>

여기, 우리는 murine aortas의 면역 세포 조성의 조사를위한 흐름 cytometry 기반의 방법을 제시한다. 이 방법의 가장 큰 장점은 단일 세포 수준에서 대동맥 면역 세포를 분석하고 대동맥 leukocytes의 정품 인증 상태를 특징하는 능력입니다. 이 방법은 murine aortas로 제한하고 (발표되지 않은 데이터) 등 10 등 내유 동맥, 대동맥 밸브 및 관상 동맥과 같은 인간의 표본을 분석하기 위해이 접근법을 사?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 자료 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 회사 </td></tr><tr><td> Collagenase XI </td><td> C7657 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td></tr><tr><td> Hyaluronidase </td><td> H3506 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td></tr><tr><td> DNase I, 2를 입력합니다 </td><td> D4527 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td></tr><tr><td> Collagenase I </td><td> C0130 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td></tr><tr><td> Collagenase II </td><td> LS004174 </td><td> 워싱턴 생물 코퍼레이션 </td></tr><tr><td> 엘라스타제 </td><td> LS002292 </td><td> 워싱턴 생물 코퍼레이션 </td></tr></tbody></table>

flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas

죽상 경화증은 거품 세포, 면역 세포, 혈관 내피 및 평활근 세포, 혈소판, 세포외 기질, 그리고 광범위한 괴사와 지질이 풍부한 코어로 구성된 plaques의 형성에 의해 특징 있으며 중간 및 대형 선박의 만성 염증성 과정 주변 조직의 섬유증. 면역 반응 1 타고난과 적응 무기가 죽상 경화증의 개시, 개발 및 지속성에 참여합니다. 2, 3이 증거의 중요한 기관이다 같은 macrophages로 면역 세포의 서로 다른 하위 집합, 돌기 그 세포, T 및 B lymphocytes은 건강하고 죽상 경화증 발생하기 쉬운 생쥐 4 aortas 내에 존재한다. 또한 면역 세포는 atherogenesis이 조직의 중요한 역할을 제안 주변 대동맥 adventitia에서 찾을 수 있습니다. 2 얼마 동안, 면역 세포들이 활성화 상태 및 대동맥 벽 내의 세포 성분의 다른 유형의 양적 감지 죽상 경화증의 연구에 대한 RT - PCR과 immunohistochemical 방법으로 제한되었다. 몇 가지 시도는 인간의 aortas를 사용하여 유동세포계측법을 수행하기 위해 만들어진, 그리고 높은 autofluorescence 같은 문제의 숫자가 5,6를보고되었습니다. 인간 atherosclerotic plaques는 collagenase 1 소화했고, 무료로 세포는 CD14에 대한 수집 및 스테인드되었습니다 + / CD11c + 대식 세포 - 파생 거품 세포를 강조합니다. 본 연구에서는, &quot;모의&quot;채널은 거짓 - 긍정적인 얼룩을 방지하는 데 사용되었다. 소화 과정에서 축적 6 괴사성 물질 대동맥 표본에서 높은 autofluorescence를 생성 파편 많은 양의 상승을 제공합니다. 이 문제를 해결하려면, 부정과 긍정적인 컨트롤 패널이 제안되어 있으나, 이중 염색법는이 샘플에 적용 될 수 있습니다. 우리는 면역 세포 성분을 분석하고 활성화, 증식, 건강하고 죽상 경화증 발생하기 쉬운 대동맥에서 면역 세포의 분화를 특징하는 새로운 흐름 cytometry 기반의 방법 7을 개발했습니다. 이 방법은 대동맥 벽의 면역 세포 조성의 조사를 허용하고이 질병의 면역 측면의 조사에 대한 면역 방법의 광범위한 스펙트럼을 사용하는 가능성을 엽니다.

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Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

본 논문은 aortas의 면역 성분을 조사하기 위해 흐름 cytometry 기반 방법을 제공합니다. 신문은 또한 별도로 주변 adventitia 및 혈관 벽을 검사 수 있습니다 추​​가 기법을 보여줍니다. 이 방법은 대동맥 leukocytes의 phenotypical 분석을 수행하고 죽상 경화증 연구에 대한 몇 가지 면역 assays을 적용하는 가능성을 엽니다.

Murine Aortas 이내에 면역 세포의 흐름 Cytometry 분석

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

유동세포계측법로 고정하고 살아있는 세포에서 Calpain 활동을 측정

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

연구

면역학 및 감염병학

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

사람의 체외에서</em면역 불균형의 초기 국가의 인정을위한 심사 도구를> 억제

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

기능 및 분자 연구 기본 손쥐 유형 II 폐포 상피 세포의 흐름 Cytometric 절연

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

세포 내 염색 및 유동 세포 계측법은 고혈압의 모델에 쥐 대동맥, 신장 및 림프절에서 림프구 하위 집합을 식별하는

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

Cytometry 이미징 사용 하 여 인간의 시스템에 면역 시 냅 스의 질적 및 양적 분석

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

고립과 Murine 인간과 치경 대 식 세포의 생체 외에서 문화

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Discrimination of Seven Immune Cell Subsets by Two-fluorochrome Flow Cytometry

2 형광 색소에 의해 7 개의 면역 세포 하위 집합의 차별 Cytometry 흐름

Immune cell characterization heavily relies on multicolor flow cytometry to identify subpopulations based on differential expression of surface markers. ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

호중구 계보 세포의 질량 세포 분석 분석을위한 전체 골수의 준비

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

유동 세포 분석용 마우스 신장 거주자 CD8+ T 세포의 격리

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Analysis of SAMHD1 Restriction by Flow Cytometry in Human Myeloid U937 Cells

인간 골수성 U937 세포에서 유세포 분석에 의한 SAMHD1 제한 분석

Sterile &#945;-motif/histidine-aspartate domain-containing protein 1 (SAMHD1) inhibits replication of HIV-1 in quiescent myeloid cells. U937 cells are ...