Name: biophysical assays to probe the mechanical properties of the interphase cell nucleus: substrate strain application and microneedle manipulation
Uploaded: 2011-09-14T12:00:00
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이 작품은 건강 (R01 HL082792 및 R01 NS059348) 및 Brigham 및 여자의 병원 순환기 리더십 그룹 수상의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

1. 기판 변형 응용 프로그램 정규 핵 변형의 측정은 요리에 세포를 도금하고, (uniaxial 또는 biaxial) 스트레인 신청 과정과 전후의 세포의 이미지를 획득, 세포 배양 표면으로 투명, 탄성 실리콘 점막과 변형 요리의 준비를 포함합니다. 실리콘 막 요리와 세포 접착의 준비 <ol><li> 각 변형 요리 3 직경 맞춤 제작 밑이 플라스틱 접시로 구성되어 &quot;과 세포 배?...

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	<li>Friedl, P., Wolf, K., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+mechanics+during+cell+migration.">Nuclear mechanics during cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 23, 55-64 (2011).</li><li>Mejat, A., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LINC+complexes+in+health+and+disease.">LINC complexes in health and disease.</a> Nucleus. 1, 40-52 (2010).</li><li>Worman, H. J., Fong, L. G., Muchir, A., Young, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminopathies+and+the+long+strange+trip+from+basic+cell+biology+to+therapy.">Laminopathies and the long strange trip from basic cell biology to therapy.</a> J Clin Invest. 119, 1825-1836 (2009).</li><li>Caille, N., Tardy, Y., Meister, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+strain+field+in+endothelial+cells+subjected+to+uniaxial+deformation+of+their+substrate.">Assessment of strain field in endothelial cells subjected to uniaxial deformation of their substrate.</a> Ann Biomed Eng. 26, 409-416 (1998).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamins+A+and+C+but+not+lamin+B1+regulate+nuclear+mechanics.">Lamins A and C but not lamin B1 regulate nuclear mechanics.</a> J Biol Chem. 281, 25768-25780 (2006).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+nuclear+shape+and+impaired+mechanotransduction+in+emerin-deficient+cells.">Abnormal nuclear shape and impaired mechanotransduction in emerin-deficient cells.</a> J Cell Biol. 170, 781-791 (2005).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamin+A/C+deficiency+causes+defective+nuclear+mechanics+and+mechanotransduction.">Lamin A/C deficiency causes defective nuclear mechanics and mechanotransduction.</a> J Clin Invest. 113, 370-378 (2004).</li><li>Verstraeten, V. L., Ji, J. Y., Cummings, K. S., Lee, R. T., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+mechanosensitivity+and+nuclear+stiffness+in+Hutchinson-Gilford+progeria+cells:+effects+of+farnesyltransferase+inhibitors.">Increased mechanosensitivity and nuclear stiffness in Hutchinson-Gilford progeria cells: effects of farnesyltransferase inhibitors.</a> Aging Cell. 7, 383-393 (2008).</li><li>Brooks, S. V., Zerba, E., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+to+muscle+fibres+after+single+stretches+of+passive+and+maximally+stimulated+muscles+in+mice.">Injury to muscle fibres after single stretches of passive and maximally stimulated muscles in mice.</a> J Physiol. 488, 459-469 (1995).</li><li>Maniotis, A. J., Chen, C. S., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+mechanical+connections+between+integrins,+cytoskeletal+filaments,+and+nucleoplasm+that+stabilize+nuclear+structure.">Demonstration of mechanical connections between integrins, cytoskeletal filaments, and nucleoplasm that stabilize nuclear structure.</a> Proc Natl Acad Sci. 94, 849-854 (1997).</li></ol>

기판의 변형 분석 스트레인 응용 프로그램이 성공적으로 기계적 스트레스를 받게 세포에서 유도된 핵 deformations을 공부하고 핵 강성 특정 핵 봉투 단백질의 기여를 조사하기 위해 우리와 다른 그룹에 의해 사용되고 있습니다. 4-8이 기법의 장점은 뭔가가 프로브 기계적 특성을 자신의 정상 세포와 cytoskeletal 환경에서 그 핵 생활 기판 변형 응용 프로그램과 같은 계약 근?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Fibronectin </td><td> Millipore </td><td> FC010 </td></tr><tr><td> MitoTracker 레드 FM 그린 FM </td><td> Invitrogen </td><td> M22425 및 M - 7514 </td></tr><tr><td> Hoechst 33342 </td><td> Invitrogen </td><td> H3570 </td></tr><tr><td> 행크의 버퍼 소금 염분 </td><td> Invitrogen </td><td> 14,185 </td></tr><tr><td> 페놀 무료, DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 21,063 </td></tr><tr><td> 태아 소 혈청 </td><td> Aleken 체액 </td><td> FBSS500 </td></tr><tr><td> 페니실린 / 스트렙토 마이신 </td><td> 시그마 </td><td> P0781 - 100ML </td></tr><tr><td> 필라멘트와 Borosilicate 유리 </td><td> 셔터 악기 </td><td> BF100 - 78-10 </td></tr><tr><td> &quot;/ 광택 이외의 철근 실리콘 판금, 0.005를 광택 </td><td> 전문 제조 주식 회사 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco의 인산은 염분 버퍼 </td><td> Invitrogen </td><td> 14,200 </td></tr><tr><td> 35mm 유리 바닥 문화 요리 (FluoroDish) </td><td> 세계 정밀 계측기, INC </td><td> FD35 - 100 </td></tr><tr><td> Braycote 804 진공 그리스 </td><td> SPI 공급 </td><td> 05133A - AB </td></tr></tbody></table>

biophysical assays to probe the mechanical properties of the interphase cell nucleus: substrate strain application and microneedle manipulation

대부분의 진핵 세포에서 핵이 가장 큰 organelle이며, 일반적으로 주변 cytoskeleton보다 2-10 배 stiffer이며 따라서 핵의 물리적 특성은 생리와 병리 학적 조건에서 세포의 전반적인 biomechanical 행동에 크게 기여하고 있습니다. 예를 들어, neutrophils를 마이 그 레이션 및 암 세포를 침해에 핵 강성이 조직 내의 좁은 공간을 통해 넘쳐 흐름 또는 통과하는 동안 중요한 장애물을 일으킬 수 있습니다. 1 한편, 같은 근육과 같은 기계적으로 적극적인 조직에있는 세포의 핵은 충분한 구조적 지원을 필요로 반복적인 기계적 스트레스를 견딜 수. 중요한 것은, 핵은 단단히 휴대폰 아키텍처에 통합되어, 그것은 육체적으로 양극 세포, 신경근육학 분기점에서 시냅스 핵의 예를 들어 세포 운동과 핵의 위치를​​위한 중요한 요구 사항,있는 주변 cytoskeleton에 연결하거나, 마이 그 레이션 세포 2. 아니 놀랍게도, 그러한 핵 강성 및 nucleo - cytoskeletal 커플링을 결정하는 중요한 역할을 lamins 및 nesprins 같은 핵 봉투 단백질에 돌연변이가,를 포함하여 인간의 질병의 여러 결과에 최근 게재되었습니다 에머리 - Dreifuss 근육 영양 장애, 사지 - 거들 근육 영양 장애, 그리고 확장성 심근증 3. 다양한 핵 봉투 단백질과 특정 돌연변이의 효과의 biophysical 기능을 조사하기 위해, 우리는 하나의 살아있는 세포에있는 핵의 물리적 특성을 연구하는 실험 방법을 개발 글로벌 또는 지역화된 기계 섭동를 받게. 정확하게 적용 기판 변형 응용 프로그램에 대한 응답으로 유도 핵 deformations를 측정하면 핵의 deformability에 대한 중요한 정보를 산출하고 다른 돌연변이 또는 특정 핵 봉투 단백질에 대한 결함 세포 라인 사이의 양적 비교를하실 수 있습니다. microneedle로 현지화된 cytoskeletal 변형 응용 프로그램이 분석을 보완하는 데 사용되고 핵과 cytoskeleton 세포 사이의 강제 전송에 대한 추가 정보를 얻을 수 있습니다. 그대로 살아있는 세포의 핵 역학을 공부하는 것은 정상적인 세포 구조를 유지하고 고립 핵 작업시 발생할 수있는 잠재적인 유물을 방지합니다. 또한, 기판의 변형 응용 프로그램은 근육이나 다른 조직의 세포 (예를 들어, 혈관 평활근 세포는 혈관 변형에 노출)에 의해 경험 생리적 스트레스에 대한 좋은 모델을 제공합니다. 이러한 도구는 핵 역학 연구를 주로 개발되었습니다 동안 마지막으로, 그들은 또한 cytoskeletal 단백질과 mechanotransduction 신호의 기능을 조사하기 위해 적용할 수 있습니다.

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Biophysical Assays to Probe the Mechanical Properties of the Interphase Cell Nucleus: Substrate Strain Application and Microneedle Manipulation

우리는 글로벌 또는 지역화된 스트레인 응용 프로그램에 대한 응답으로 하나의 살아있는 자기편 세포에서 유도된 핵 및 cytoskeletal deformations을 측정하기 위해 두 개의 독립적인, 현미경 기반의 도구를 제시한다. 이러한 기술은 핵 강성 (즉, deformability)을 확인하고 핵과 cytoskeleton 세포 사이에 강제로 전송을 탐사하는 데 사용됩니다.

계면 세포 핵의 기계적 성질을 알아내기 위해 Biophysical Assays : 기판 스트레인 신청 및 Microneedle 조작

In most eukaryotic cells, the nucleus is the largest organelle and is typically 2 to 10 times stiffer than the surrounding cytoskeleton; consequently, the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mechanical Stimulation of Stem Cells Using Cyclic Uniaxial Strain

순환 Uniaxial 스트레인을 사용하여 줄기 세포의 기계적 자극

The role of mechanical forces in the development and maintenance of biological tissues is well documented, including several mechanically regulated ...

연구

생물학

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

의 정화 M. magneticum 스트레인 AMB - 1 Magnetosome 관련 단백질 MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

배아 줄기 세포 생활에서 염색질 단백질 역학을 측정하는 Assays (FRAP 및 플립)를 Photobleaching

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

약리 및 기능성 유전자 Assays은 Planarian의 재생을 조작하는<em자포니카> Dugesia</em

Free-living planarian flatworms have a long history of experimental usage owing to their remarkable regenerative abilities1. Small fragments excised from ...

Selective Capture of 5-hydroxymethylcytosine from Genomic DNA

게놈 DNA에서 도보로 5 hydroxymethylcytosine의 선택적 캡처

5-methylcytosine (5-mC) constitutes ~2-8% of the total cytosines in human genomic DNA and impacts a broad range of biological functions, including gene ...

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

세균 본부 기계의 슈퍼 해상도 이미징

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

의 적용<em&gt; 체외</emDPS 단백질의 스트레스 중재 속성을 시각화&gt; DNA 보호 분석

Oxidative stress is an unavoidable byproduct of  aerobic life.  Molecular oxygen is  essential for terrestrial metabolism, but it also takes part in many ...

The Cell-based L-Glutathione Protection Assays to Study Endocytosis and Recycling of Plasma Membrane Proteins

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

프로브 기반의 실시간 PCR은 마이크로 RNA의 정량 측정을위한 접근 방법

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses

마우스 렌즈의 압축 강성을 평가하는 유리 Coverslips는 순차적으로 응용 프로그램 : 스트레인과 형태 학적 분석

The eye lens is a transparent organ that refracts and focuses light to form a clear image on the retina. In humans, ciliary muscles contract to deform the ...