Name: biophysical assays to probe the mechanical properties of the interphase cell nucleus: substrate strain application and microneedle manipulation
Uploaded: 2011-09-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Biophysical Assays to Probe the Mechanical Properties of the Interphase Cell Nucleus: Substrate Strain Application and Microneedle Manipulation at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Sağlık (R01 HL082792 ve R01 NS059348) ve Brigham ve Kadın Hastanesi Kalp ve Damar Liderlik Grubu Ödülü Enstitüleri tarafından da desteklenmiştir.

1. Yüzey gerilme uygulama Normalize nükleer gerginlik ölçümü yemekleri üzerine hücreler, kaplama, ve (veya iki eksenli tek eksenli) suşu uygulama öncesinde, sırasında ve sonrasında görüntüleri alan hücrelerin, hücre kültürü yüzey olarak şeffaf, elastik silikon membran ile gerginlik yemeklerin hazırlanması içerir. Silikon membran yemekleri ve hücrelerin bağlılık hazırlanması <ol><li> Her suş çanak çapı 3 ısmarlama dipsiz plastik...

<ol>
	<li>Friedl, P., Wolf, K., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+mechanics+during+cell+migration.">Nuclear mechanics during cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 23, 55-64 (2011).</li><li>Mejat, A., Misteli, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LINC+complexes+in+health+and+disease.">LINC complexes in health and disease.</a> Nucleus. 1, 40-52 (2010).</li><li>Worman, H. J., Fong, L. G., Muchir, A., Young, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminopathies+and+the+long+strange+trip+from+basic+cell+biology+to+therapy.">Laminopathies and the long strange trip from basic cell biology to therapy.</a> J Clin Invest. 119, 1825-1836 (2009).</li><li>Caille, N., Tardy, Y., Meister, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+strain+field+in+endothelial+cells+subjected+to+uniaxial+deformation+of+their+substrate.">Assessment of strain field in endothelial cells subjected to uniaxial deformation of their substrate.</a> Ann Biomed Eng. 26, 409-416 (1998).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamins+A+and+C+but+not+lamin+B1+regulate+nuclear+mechanics.">Lamins A and C but not lamin B1 regulate nuclear mechanics.</a> J Biol Chem. 281, 25768-25780 (2006).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+nuclear+shape+and+impaired+mechanotransduction+in+emerin-deficient+cells.">Abnormal nuclear shape and impaired mechanotransduction in emerin-deficient cells.</a> J Cell Biol. 170, 781-791 (2005).</li><li>Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lamin+A/C+deficiency+causes+defective+nuclear+mechanics+and+mechanotransduction.">Lamin A/C deficiency causes defective nuclear mechanics and mechanotransduction.</a> J Clin Invest. 113, 370-378 (2004).</li><li>Verstraeten, V. L., Ji, J. Y., Cummings, K. S., Lee, R. T., Lammerding, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+mechanosensitivity+and+nuclear+stiffness+in+Hutchinson-Gilford+progeria+cells:+effects+of+farnesyltransferase+inhibitors.">Increased mechanosensitivity and nuclear stiffness in Hutchinson-Gilford progeria cells: effects of farnesyltransferase inhibitors.</a> Aging Cell. 7, 383-393 (2008).</li><li>Brooks, S. V., Zerba, E., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury+to+muscle+fibres+after+single+stretches+of+passive+and+maximally+stimulated+muscles+in+mice.">Injury to muscle fibres after single stretches of passive and maximally stimulated muscles in mice.</a> J Physiol. 488, 459-469 (1995).</li><li>Maniotis, A. J., Chen, C. S., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+mechanical+connections+between+integrins,+cytoskeletal+filaments,+and+nucleoplasm+that+stabilize+nuclear+structure.">Demonstration of mechanical connections between integrins, cytoskeletal filaments, and nucleoplasm that stabilize nuclear structure.</a> Proc Natl Acad Sci. 94, 849-854 (1997).</li></ol>

Yüzey gerilme tahlil Gerilme uygulamanın başarıyla mekanik strese maruz hücre kaynaklı nükleer deformasyonlar ve çalışma nükleer sertliği belirli bir çekirdek zarı proteinleri katkısını araştırmak için bize ve diğer gruplar tarafından kullanılmıştır. 4-8 Bu tekniğin avantajı, mekanik özellikleri probları çekirdekleri, normal hücresel ve hücre iskeleti çevre ve yaşam yüzey gerilme uygulama gibi, kas ve kan damarı duvarlarının müteahhitlik gibi b...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Fibronektin </td><td> Millipore </td><td> FC010 </td></tr><tr><td> MitoTracker Kırmızı FM ve Yeşil FM </td><td> Invitrogen </td><td> M22425 ve M-7514 </td></tr><tr><td> Hoechst 33.342 </td><td> Invitrogen </td><td> H3570 </td></tr><tr><td> Hank Tamponlu Tuz Tuzlu </td><td> Invitrogen </td><td> 14185 </td></tr><tr><td> Fenol ücretsiz, DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 21063 </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> Aleken Biyolojik </td><td> FBSS500 </td></tr><tr><td> Penisilin / Streptomisin </td><td> Sigma </td><td> P0781-100ML </td></tr><tr><td> Borosilikat Cam ile filament </td><td> Sutter Enstrüman </td><td> BF100-78-10 </td></tr><tr><td> &quot;/ Parlak takviyeli olmayan silikon kaplama, 0.005 Parlak </td><td> Özel İmalat A.Ş. </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;nun Fosfat Tamponlu Salin </td><td> Invitrogen </td><td> 14200 </td></tr><tr><td> 35 mm cam alt kültür yemekleri (FluoroDish) </td><td> Dünya Hassas Aletler A.Ş. </td><td> FD35-100 </td></tr><tr><td> Braycote 804 Vakum Gres </td><td> SPI kaynakları </td><td> 05133A-AB </td></tr></tbody></table>

biophysical assays to probe the mechanical properties of the interphase cell nucleus: substrate strain application and microneedle manipulation

Çoğu ökaryotik hücre çekirdeği büyük organel ve genellikle çevresindeki hücre iskeletinin daha 2 ila 10 kat daha sert, dolayısıyla çekirdeğin fiziksel özelliklerini, fizyolojik ve patolojik koşullar altında hücre genel biyomekanik davranış önemli ölçüde katkıda bulunur. Örneğin, nötrofil göç ve kanser hücreleri istila, nükleer sertlik dokuların içindeki dar alanlarda yoluyla ekstravazasyonu veya geçiş sırasında büyük bir engel teşkil edebilir. 1 Öte yandan, böyle bir kas gibi mekanik olarak aktif bir doku hücrelerinin çekirdeği için yeterli yapısal destek gerektirir tekrarlayan mekanik stres dayanacak. Önemlisi, çekirdeğinde sıkı bir şekilde hücresel mimarisine entegre; fiziksel polarize hücreler, nöromüsküler kavşaklarda sinaptik çekirdekleri örneğin çekirdeğin hücre içi hareket ve konumlandırma için kritik bir gereklilik, çevredeki hücre iskeletinin, bağlı, ya da göç hücrelerinde 2 şaşırtıcı değil, nükleer sertliği ve Nucleo iskelet kaplin belirlenmesinde kritik bir rol oynayan lamins ve nesprins gibi çekirdek zarı proteinleri mutasyonlar, bir numara da dahil olmak üzere insan hastalıkları, neden son zamanlarda gösterilen edilmiştir Emery- Dreifuss müsküler distrofi, kol, bacak-girdle musküler distrofi ve dilate kardiyomiyopati 3 biyofiziksel fonksiyonu çeşitli çekirdek zarı proteinleri ve belirli mutasyonların etkisini araştırmak için, tek, canlı hücrelerin çekirdeğinde fiziksel özelliklerini incelemek için deneysel yöntemler geliştirdik küresel veya lokalize mekanik pertürbasyon tabi. Tam olarak uygulandığında yüzey gerilme uygulama yanıt indüklenen nükleer deformasyonlar Ölçüm çekirdeğin deformabilitesi hakkında önemli bilgiler verir ve farklı mutasyon veya özel nükleer zarf proteinlerin eksik hücre hatları arasında kantitatif karşılaştırılmasına olanak sağlar. Bir microneedle lokalize sitoskeletal gerginlik uygulaması bu testte tamamlamak için kullanılır ve çekirdek ve hücre iskeletinin arasındaki hücre içi kuvvet aktarımı hakkında ek bilgi verim alınabilir. Bozulmamış canlı hücreler nükleer mekaniğinin incelenmesi, normal hücre içi mimariyi korur ve izole çekirdekleri ile çalışırken ortaya çıkabilecek potansiyel eserler önler. Ayrıca, yüzey gerilme uygulama, fizyolojik stres, kas hücreleri ve diğer dokulara (örneğin, damar düz kas hücrelerinin damar zorlamalara maruz) tarafından deneyimli iyi bir model sunar. Son olarak, bu araçların, öncelikle nükleer mekaniği çalışma geliştirilmiştir ise aynı zamanda iskelet proteinleri ve mechanotransduction sinyal fonksiyonu araştırmak için uygulanan olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Biophysical Assays to Probe the Mechanical Properties of the Interphase Cell Nucleus: Substrate Strain Application and Microneedle Manipulation at JoVE.com

Biophysical Assays to Probe the Mechanical Properties of the Interphase Cell Nucleus: Substrate Strain Application and Microneedle Manipulation

Biz, küresel ya da lokalize gerginlik uygulama yanıt tek, yaşayan yapışık hücrelere kaynaklı nükleer ve iskelet deformasyonları ölçmek için, iki bağımsız, mikroskop tabanlı araçlar sunuyoruz. Bu teknikler, nükleer sertliği belirlemek için (yani, deformabilitesi) ve, çekirdek ve hücre iskeletinin arasındaki hücre içi kuvvet iletim prob kullanılır.

Fazlararası Hücre Çekirdek Mekanik Özellikleri Probe Biyofiziksel Tahliller: Yüzey Gerilme Uygulama ve Microneedle Manipülasyon

In most eukaryotic cells, the nucleus is the largest organelle and is typically 2 to 10 times stiffer than the surrounding cytoskeleton; consequently, the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Mechanical Stimulation of Stem Cells Using Cyclic Uniaxial Strain

Devirli Tek Eksenli Gerilme kullanarak Kök Hücre Mekanik Uyarım

The role of mechanical forces in the development and maintenance of biological tissues is well documented, including several mechanically regulated ...

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamAÃƒÅ½Ã¢â‚¬Â41

Saflaştırılması M. magneticum Deformasyon AMB-1 Magnetosome İlişkili Protein MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Photobleaching Assays (FRAP &amp; FLIP) to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Photobleaching Assays FRAP & FLIP to Measure Chromatin Protein Dynamics in Living Embryonic Stem Cells

Embriyonik Kök Hücreler Yaşayan Kromatin Protein Dynamics Tedbir Tahliller (sıkı bağlamak ve FLIP) Photobleaching

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) and Fluorescence Loss In Photobleaching (FLIP) enable the study of protein dynamics in living cells with ...

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

Farmakolojik ve Fonksiyonel Genetik Tahliller Planarian Rejenerasyon işleyin<emJaponica> Dugesia</em

Free-living planarian flatworms have a long history of experimental usage owing to their remarkable regenerative abilities1. Small fragments excised from ...

Selective Capture of 5-hydroxymethylcytosine from Genomic DNA

Genomik DNA 5-hydroxymethylcytosine seçici Yakalama

5-methylcytosine (5-mC) constitutes ~2-8% of the total cytosines in human genomic DNA and impacts a broad range of biological functions, including gene ...

Super-resolution Imaging of the Bacterial Division Machinery

Bakteriyel Bölümü Makine Super çözünürlüklü Görüntüleme

Bacterial cell division requires the coordinated  assembly of more than ten essential proteins at midcell1,2. Central  to this process is the formation of ...

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

Application of an In vitro DNA Protection Assay to Visualize Stress Mediation Properties of the Dps Protein

Bir uygulama<em&gt; In vitro</emDPS Protein Stres Arabuluculuk Özellikleri gözünüzde canlandırın için&gt; DNA Koruma Testi

Oxidative stress is an unavoidable byproduct of  aerobic life.  Molecular oxygen is  essential for terrestrial metabolism, but it also takes part in many ...

The Cell-based L-Glutathione Protection Assays to Study Endocytosis and Recycling of Plasma Membrane Proteins

Membrane trafficking involves transport of proteins from the plasma membrane to the cell interior (i.e. endocytosis) followed by trafficking to lysosomes ...

Probe-based Real-time PCR Approaches for Quantitative Measurement of microRNAs

Probe-tabanlı Real-time PCR microRNA Kantitatif Ölçüm Yaklaşımları

Probe-based quantitative PCR (qPCR) is a favoured method for measuring transcript abundance, since it is one of the most sensitive detection methods that ...

Sequential Application of Glass Coverslips to Assess the Compressive Stiffness of the Mouse Lens: Strain and Morphometric Analyses

Fare Lens Basınç Sertliği değerlendirin Cam lameller Sıralı Uygulama: Gerilme ve Morfometrik Analizleri

The eye lens is a transparent organ that refracts and focuses light to form a clear image on the retina. In humans, ciliary muscles contract to deform the ...