Name: cell-based calcium assay for medium to high throughput screening of trp channel functions using flexstation 3
Uploaded: 2011-08-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell-based Calcium Assay for Medium to High Throughput Screening of TRP Channel Functions using FlexStation 3 at JoVE.com

हम डीआरएस धन्यवाद. जॉन Hancock, रे ग्रिल, एंड्रयू मॉरिस और उनके समर्थन के लिए ओल्गा Chumakova. FlexStation 3 प्रणाली UTHSC Cytodynamic इमेजिंग सुविधा का हिस्सा है. हम भी डीआरएस धन्यवाद. Ardem Patapoutian और स्क्रिप्स रिसर्च इंस्टीट्यूट और HEK293 - hTRPA1 स्थिर सेल लाइन उपलब्ध कराने के लिए नोवार्टिस रिसर्च फाउंडेशन (GNF) के जीनोमिक्स संस्थान से माइकल Bandell. अनुसंधान में भाग (GM081658 MXZ) NIH और टेक्सास मेडिकल सेंटर पाचन रोग केंद्र (HH के लिए) और मिशन कनेक्ट / TIRR फाउंडेशन (HH के लिए) से अनुदान द्वारा समर्थित है.

1. 96 अच्छी तरह प्लेटों में सेल की तैयारी HEK293 transiently मानव सीडीएनए TRPA1 साथ trasfected कोशिकाओं के लिए <ol><li> HEK293 कोशिकाओं Dulbecco मिनिमल आवश्यक मध्यम में एक से दो दिन (DMEM) 4.5 ग्लूकोज मिलीग्राम / एमएल (थर्मो वैज्ञानि...

<ol>
	<li>Hu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+TRPA1+channels+by+fenamate+nonsteroidal+anti-inflammatory+drugs.">Activation of TRPA1 channels by fenamate nonsteroidal anti-inflammatory drugs.</a> Pflugers Arch. 459, 579-592 (2010).</li><li>Hu, H., Bandell, M., Petrus, M. J., Zhu, M. X., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zinc+activates+damage-sensing+TRPA1+ion+channels.">Zinc activates damage-sensing TRPA1 ion channels.</a> Nat Chem Biol. 5, 183-190 (2009).</li><li>Perney, T. M., Hirning, L. D., Leeman, S. E., Miller, R. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TRPM7+regulates+cell+adhesion+by+controlling+the+calcium-dependent+protease+calpain.">TRPM7 regulates cell adhesion by controlling the calcium-dependent protease calpain.</a> J Biol Chem. 281, 11260-11270 (2006).</li><li>Dubinsky, J. M., Rothman, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+concentrations+during+"chemical+hypoxia"+and+excitotoxic+neuronal+injury.">Intracellular calcium concentrations during "chemical hypoxia" and excitotoxic neuronal injury.</a> J Neurosci. 11, 2545-2551 (1991).</li><li>George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium+channel+activation+augments+NMDA+receptor+function+and+promotes+neurite+outgrowth+in+immature+cerebrocortical+neurons.">Sodium channel activation augments NMDA receptor function and promotes neurite outgrowth in immature cerebrocortical neurons.</a> J Neurosci. 29, 3288-3301 (2009).</li><li>Price, K. L., Lummis, S. 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Assay Drug Dev Technol.</a> 5, 191-203 (2007).</li><li>Christensen, B. N., Kochukov, M., McNearney, T. A., Taglialatela, G., Westlund, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proton-sensing+G+protein-coupled+receptor+mobilizes+calcium+in+human+synovial+cells.">Proton-sensing G protein-coupled receptor mobilizes calcium in human synovial cells.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 289, C601-C608 (2005).</li><li>Boulay, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+expression+of+a+novel+mammalian+homolog+of+Drosophila+transient+receptor+potential+(Trp)+involved+in+calcium+entry+secondary+to+activation+of+receptors+coupled+by+the+Gq+class+of+G+protein.">Cloning and expression of a novel mammalian homolog of Drosophila transient receptor potential (Trp) involved in calcium entry secondary to activation of receptors coupled by the Gq class of G protein.</a> J Biol Chem. 272, 29672-29680 (1997).</li><li>Nanda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+screening+of+adrenergic+receptors+by+measuring+intracellular+calcium+using+the+FlexStation+scanning+fluorimeter.">Functional screening of adrenergic receptors by measuring intracellular calcium using the FlexStation scanning fluorimeter.</a> Biotechnol J. 4, 417-422 (2009).</li></ol>

Intracellular Ca 2 + neurotransmitter रिहाई (3), हृदय की संभावित कार्रवाई (4), मांसपेशी कोशिका संकुचन (5), सेल संकेत transduction (6-7), और excitotoxic सेल (मृत्यु के रूप में कई शारीरिक और रोग की स्थिति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है 8). Intracellular Ca 2 +...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </th></tr><tr><td> 3 FlexStation </td><td> आण्विक डिवाइसेज </td><td> FLEX3 </td><td></td></tr><tr><td> 96 खैर, FlexStation Pipet युक्तियाँ </td><td> आण्विक डिवाइसेज </td><td> 9000-0912 </td><td></td></tr><tr><td> 96 - खैर प्लेट्स </td><td> Greiner जैव - एक </td><td> 655090 </td><td></td></tr><tr><td> 96 वैसे साफ फ्लैट नीचे प्लेटों </td><td> Costar </td><td> 3595 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 12430-104 </td><td></td></tr><tr><td> Opti-सदस्य </td><td> Invitrogen </td><td> 31985-070 </td><td></td></tr><tr><td> 2000 Lipofectamine </td><td> Invitrogen </td><td> 11668-019 </td><td></td></tr><tr><td> AM Fluo-4 </td><td> Invitrogen </td><td> F14202 </td><td></td></tr><tr><td> PluronicF - 127 </td><td> Invitrogen </td><td> P3000MP </td><td></td></tr><tr><td> पाली - एल - ओर्निथिन </td><td> सिग्मा </td><td> P36551 </td><td></td></tr><tr><td> प्रोबेनेसिड </td><td> सिग्मा </td><td> P8761 </td><td></td></tr><tr><td> गोजातीय सीरम albumin </td><td> सिग्मा </td><td> A9418 </td><td></td></tr></tbody></table>

cell-based calcium assay for medium to high throughput screening of trp channel functions using flexstation 3

आण्विक &#39;औज़ार 3 FlexStation एक benchtop बहु मोड microplate बहु अच्छी तरह प्लेटें में स्वचालित प्रतिदीप्ति माप के सक्षम पाठक है. यह शैक्षिक सेटिंग्स में मध्यम से उच्च throughput स्क्रीन के लिए आदर्श है. यह एक एकीकृत तरल हस्तांतरण के साथ एक मल्टी चैनल pipetter और मशीन फ्लोरोसेंट अभिकर्मकों की एक किस्म के प्रतिदीप्ति परिवर्तन की निगरानी के लिए एक समय में एक स्तंभ पढ़ता सुसज्जित मॉड्यूल है. उदाहरण के लिए, 3 FlexStation intracellular मुक्त Ca + 2 स्तर के परिवर्तन को मापने के द्वारा + पारगम्य आयन चैनलों और जी प्रोटीन रिसेप्टर्स मिलकर समारोह के 2 Ca अध्ययन किया गया है. क्षणिक रिसेप्टर संभावित चैनल (टीआरपी) nonselective कटियन चैनलों कि कई शारीरिक और pathophysiological कार्यों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाने के एक बड़े परिवार कर रहे हैं. टीआरपी चैनलों के अधिकांश कैल्शियम पारगम्य हैं और सक्रियण पर कैल्शियम बाढ़ प्रेरित. इस वीडियो में, हम 3 FlexStation TRPA1 चैनल, कई हानिकारक उत्तेजनाओं के लिए एक आणविक संवेदक के औषधीय प्रोफ़ाइल का अध्ययन करने के आवेदन को प्रदर्शित करता है. HEK293 transiently या stably मानव TRPA1 चैनल, 96 अच्छी तरह प्लेटों में हो, व्यक्त कोशिकाओं + संवेदनशील फ्लोरोसेंट रंजक 2 ca, Fluo-4, और इन कोशिकाओं में वास्तविक समय प्रतिदीप्ति परिवर्तन के साथ लोड कर रहे हैं पहले और के आवेदन के दौरान मापा जाता है एक TRPA1 agonist 3 FlexStation के फ्लेक्स मोड का उपयोग कर. एक ख्यात TRPA1 प्रतिपक्षी के प्रभाव भी जांच की गई थी. डेटा SoftMax प्रो सॉफ्टवेयर से स्थानांतरित कर रहे हैं TRPA1 activators और inhibitors के एकाग्रता प्रतिक्रिया रिश्तों का निर्माण.

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Cell-based Calcium Assay for Medium to High Throughput Screening of TRP Channel Functions using FlexStation 3

यह वीडियो मानव TRPA1 FlexStation का उपयोग 3 चैनलों के औषधीय प्रोफ़ाइल का अध्ययन करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है. प्रोटोकॉल सेल तैयारी, डाई लोड हो रहा है और microplate रीडर, 3 FlexStation के आपरेशन के विवरण शामिल हैं.

मध्यम के लिए सेल आधारित कैल्शियम टीआरपी चैनल कार्य की उच्च Throughput स्क्रीनिंग 3 FlexStation का उपयोग करने के लिए परख

The Molecular Devices' FlexStation 3 is a benchtop multi-mode microplate reader capable of automated fluorescence measurement in multi-well plates.  It is ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Polymer Microarrays for High Throughput Discovery of Biomaterials

बायोमैटिरियल्स उच्च Throughput डिस्कवरी के लिए पॉलिमर माइक्रोएरे

The discovery of novel biomaterials that are optimized for a specific biological application is readily achieved using polymer microarrays, which allows a ...

Candida albicans Biofilm Chip (CaBChip) for High-throughput Antifungal Drug Screening

Candida albicans Biofilm Chip CaBChip for High-throughput Antifungal Drug Screening

उच्च throughput रोधी दवा स्क्रीनिंग के लिए candida albicans के Biofilm चिप (सीए BChip,)

Candida  albicans remains the main etiological agent of candidiasis, which  currently represents the fourth most common nosocomial bloodstream infection ...

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

उच्च throughput प्रोटीन अभिव्यक्ति मंच microfluidic नहीं एक जनरेटर का उपयोग

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Generation of Scalable, Metallic High-Aspect Ratio Nanocomposites in a Biological Liquid Medium

एक जैविक तरल माध्यम में स्केलेबल, धातु उच्च पहलू अनुपात nanocomposites का सृजन

The goal of this protocol is to describe the synthesis of two novel biocomposites with high-aspect ratio structures. The biocomposites consist of copper ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

Tomoauto का प्रयोग: एक प्रोटोकॉल उच्च throughput स्वचालित क्रायो इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी के लिए

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

High-throughput Identification of Bacteria Repellent Polymers for Medical Devices

बैक्टीरिया के उच्च throughput पहचान चिकित्सा उपकरणों के लिए पॉलिमर से बचाने वाली क्रीम

Medical devices are often associated with hospital-acquired infections, which place enormous strain on patients and the healthcare system as well as ...

3D Microtissues for Injectable Regenerative Therapy and High-throughput Drug Screening

3 डी Microtissues इंजेक्शन अपक्षयी थेरेपी और उच्च प्रवाह दवा स्क्रीनिंग के लिए

To upgrade traditional 2D cell culture to 3D cell culture, we have integrated microfabrication with cryogelation technology to produce macroporous ...

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

चीनी हम्सटर अंडाशय सेल खेती में उच्च थ्रूपुट स्वचालित माइक्रो-बायोरिएक्टरों का उपयोग करके अनुकूलन प्रक्रिया

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

High-Throughput Identification of Resistance to Pseudomonas syringae pv. Tomato in Tomato using Seedling Flood Assay

स्यूडोमोनास सिरिंग पीवी के प्रतिरोध की उच्च-थ्रूपुट पहचान। टमाटर में टमाटर अंकुर बाढ़ परख का उपयोग

Tomato is an agronomically important crop that can be infected by Pseudomonas syringae, a Gram-negative bacterium, resulting in bacterial speck disease. ...

Generation of Dynamical Environmental Conditions using a High-Throughput Microfluidic Device

एक उच्च थ्रूपुट माइक्रोफ्लुइडिक डिवाइस का उपयोग करके गतिशील पर्यावरणीय स्थितियों का उत्पादन

Mimicking in vivo environmental conditions is crucial for in vitro studies on complex life machinery. However, current techniques targeting live cells and ...