Name: teratoma generation in the testis capsule
Uploaded: 2011-11-07T13:00:00
Duration: 5 min 24 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Teratoma Generation in the Testis Capsule at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق منح CIRM # TR-1250، RT1-01108، و 00502 CL1.

ملاحظة: يجب الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية IACUC أو ما يعادلها. يجب تعقيم جميع المعدات الجراحية قبل الجراحة. يجب استخدام القفازات المعقمة، والستائر، والشاش. 1. قبل الجراحة إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الحصول على 6 أسابيع من العمر Musculus موريشيوس CbySmn.CB17-Prkdc SCID / J ذكور الفئران أو غيرها من سلالة المناعة من الماوس. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تعقيم جميع الأدوات الجراحية، والقفازات، والشاش. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل hPSCs ليتم حقنه مع accutase. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عد الخلايا والخلايا في resuspend 1000000 20-30 ميكروليتر في matrigel المخفف 1:1 في DMEM/F-12. حفاظ على الخلايا على الجليد حتى الانتهاء. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لاحظ أن في كثير من الأحيان يكون من المفيد القيام المدى من خلال التجربة حيث يتم حقن التريبان الأزرق. وهذا سوف يساعد على تحديد أي مشاكل محتملة قبل أن يتم إهدار أي الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في المربى اليابس، تخدير الماوس وفقا لإجراءات مقبولة في مؤسستك. في تجاربنا، استخدمنا anesthESIA آلة مع isoflurane. وضعت في البداية فئران في غرفة الاستقراء مع الأكسجين 1L/min و 3-4٪ isoflurane. تخدير مرة واحدة، استخدمت مخروط الأنف مع الأكسجين 1L/min وisoflurane 2-3٪. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حلق البطن مع لوس انجليس كليبرز، وتنظيف الجدار الأمامي للبطن الفأر، بدءا من وسط البطن، والعمل في اتجاه عقارب الساعة نحو الخارج. أول استخدام محلول البوفيدون اليودي ثم تغسل مع الايثانول 70٪. كرر 3 مرات، وتغيير مسحات في كل مرة. نقل الحيوان إلى وسادة التدفئة للحفاظ على الحيوانات دافئ داخل الأنسجة أو غطاء محرك السيارة تشريح. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جعل شق طولي 1 سم عن طريق الجلد والصفاق مع مقص جراحي معقم فقط تحت مستوى مفصل الورك. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في حين عقد الصفاق بالملقط، تصل بسرعة نحو الورك الأيمن مع آخر forcept معقمة وسحب الأنسجة الدهنية البيضاء جنبا إلى جنب مع الخصيتين المرفقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الخصيتين على شاش معقم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ملء السلين أو هاميلتون (1cc) حقنة وايعشر ليتم حقنه في hPSCs. لاحظ أن ذلك هو فكرة جيدة لتشمل خط السيطرة hPSC الذي تعرفه المحفزة مثل WA09 (المعروف أيضا باسم H9). بهذه الطريقة يكون لديك سيطرة الإيجابية التي يمكنك استخدامها لتحديد ما إذا كان الحقن أو الجراحة كانت معيبة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حقن ببطء hPSCs (20-30 ميكرولتر) في مركز الكبسولة الخصية بعيدا عن أي الأوعية الدموية الرئيسية، ووقف إذا الكبسولة الخصية يبدأ تضخم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الإبرة ببطء لتجنب ارتداد من الخلايا. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط، نقل الخصيتين والأنسجة الدهنية العودة إلى موقعها الأصلي في البطن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قرب الصفاق مع 2 أو 3 الغرز reabsorbable وإغلاق الجلد مع autoclips. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يجب أن تبقى الماوس دافئ حتى يتعافى، ونظرا شكلا من أشكال مسكن (انظر ما هو مقبول في المربى اليابس لديك) بعد خضوعه لجراحة مرتين في اليوم لمدة 1-2 أيام. لاحظ أن أيا من مخدر ولا مسكن لمع يتعارض مع نمو الورم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> رصد الحيوان ه لنمو الورم لمدة 6-12 أسابيع. نادرا جدا، والأورام يمكن أن تنمو إلى 5 ملم في حجم قبل 6 أسابيع بعد الحقن، وبالتالي فإنه من المهم لمراقبة الحيوانات. إذا حدث هذا، يجب أن يتم التخلص الحيوانات ومعالجة الأورام وتحليلها على النحو المعتاد. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ذات مرة كان الورم واضح ويصل 5mm تقريبا في الحجم، تخدير الماوس وتضحية وفقا لإجراءات قبول بروتوكول الحيوان. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة ورم وثيقة وفقا لذلك - صورة وقياس حجم ووزن. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع الورم الى قطع صغيرة واصلاحها في حل بارافورمالدهيد 4٪. وترسل في مخزن لامتصاص العرق 4٪ حتى العينات إلى الطبيب الشرعي لتلطيخ، باجتزاء والتحليل. </li></ol> 2. ممثل النتائج: عندما يتم ذلك بروتوكول كما هو موضح وخط خلية حقن غير المحفزة، وينبغي أن واضح، واضح بصريا، وتشكل ورم في غضون 12 أسبوعا على الأكثر. لخطوط hPSC راسخة مثل WA09، ونحن نرى عادةالأورام في غضون 6 أسابيع. لخطوط iPSC ليس من غير المألوف أن نرى الأورام داخل 8-10 أسابيع. من المهم جدا لحقن الفئران مع خط ما هو معروف أن تكون ذات قوة تناسلية متعددة، كعنصر تحكم إيجابية، من أجل أن تتأكد من أن تم تنفيذ هذا الإجراء بشكل صحيح. الأورام تبدو عادة غير متجانسة، ولها العديد من الخراجات المرفق (الشكل 1). وينبغي تحليل العينات ورم من قبل الطبيب الشرعي تبين أنسجة مختلفة من جميع الطبقات الجرثومية الثلاث (الشكل 2). <img alt="الشكل 1" src="/files/ftp_upload/3177/3177fig1.jpg" /> الشكل 1. نموذجي hPSC مسخي مستمد في كبسولة الخصية. بعد بروتوكول وصفها، تم حقن 1000000 WA09 الخلايا في الخصية كبسولة من الماوس المناعية للخطر. بعد ستة أسابيع لوحظ وجود ورم مسخي. أ) ورم مسخي انسحبت من الماوس. ب) عن قرب صورة للمسخي. لاحظ الهياكل عدم التجانس وكيس. <img alt="الشكل 2" srج = &quot;/ files/ftp_upload/3177/3177fig2.jpg&quot; /&gt; الشكل 2. هيماتوكسيلين والمقاطع يوزين الملون من مسخي إظهار الأنسجة من كل طبقة الجرثومية. بعد التثبيت، وكان مسخي مقطوع والملون مع هيماتوكسيلين ويوزين. وكشف تحليل من قبل الطبيب الشرعي وجود خلايا من كل الطبقات الجرثومية 3.

<ol>
	<li>Bradley, A., Evans, M., Kaufman, M. H., Robertson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+germ-line+chimaeras+from+embryo-derived+teratocarcinoma+cell+lines.">Formation of germ-line chimaeras from embryo-derived teratocarcinoma cell lines.</a> Nature. 309, 255-255 (1984).</li><li>Evans, M. J., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+in+culture+of+pluripotential+cells+from+mouse+embryos.">Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos.</a> Nature. 292, 154 (1981).</li><li>Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+a+pluripotent+cell+line+from+early+mouse+embryos+cultured+in+medium+conditioned+by+teratocarcinoma+stem+cells.">Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 78, 7634-7634 (1981).</li><li>Downing, G. J., Battey, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+assessment+of+the+first+20+years+of+research+using+mouse+embryonic+stem+cell+lines.">Technical assessment of the first 20 years of research using mouse embryonic stem cell lines.</a> Stem Cells. 22, 1168-1168 (2004).</li><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1145 (1998).</li><li>Reubinoff, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+from+human+blastocysts:+somatic+differentiation+in+vitro.">Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro.</a> Nat Biotechnol. 18, (2000).</li><li>Muller, F. J., Goldmann, J., Loser, P., Loring, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+call+to+standardize+teratoma+assays+used+to+define+human+pluripotent+cell+lines.">A call to standardize teratoma assays used to define human pluripotent cell lines.</a> Cell Stem Cell. 6, 412-412 (2010).</li><li>Brivanlou, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells.+Setting+standards+for+human+embryonic+stem+cells.">Stem cells. Setting standards for human embryonic stem cells.</a> Science. 300, 913-913 (2003).</li><li>Lensch, M. W., Schlaeger, T. M., Zon, L. I., Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratoma+formation+assays+with+human+embryonic+stem+cells:+a+rationale+for+one+type+of+human-animal+chimera.">Teratoma formation assays with human embryonic stem cells: a rationale for one type of human-animal chimera.</a> Cell Stem Cell. 1, 253-25 (2007).</li><li>Gertow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organized+development+from+human+embryonic+stem+cells+after+injection+into+immunodeficient+mice.">Organized development from human embryonic stem cells after injection into immunodeficient mice.</a> Stem. Cells. Dev. 13, 421-421 (2004).</li><li>Gertow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+teratomas+for+the+assessment+of+pluripotency.">Isolation of human embryonic stem cell-derived teratomas for the assessment of pluripotency.</a> Curr Protoc Stem Cell Biol. Chapter 1, Unit1B 4-Unit1B 4 (2007).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

الطريقة المعروضة هنا يوفر موثوق بها للغاية، وسيلة واضحة لتوليد teratomas من hPSCs في كبسولة الخصية. هناك العديد من البارامترات الحاسمة في هذه التقنية. على وجه الخصوص، من المهم أن حقن خطوط الخلايا hPSC أن من المعروف أن المحفزة كمجموعة تحكم. المعالم الهامة الأخرى تشمل والفاصل الزمني بين الحقن ومراقبة الورم. لخطوط الخلية مثل WA09، ينبغي مراعاة teratomas في 6-8 أسابيع. لخطوط iPSC جديد نجد أن كثيرا ما يطلب من 10 أسابيع. قلق آخر هو عدد الخلايا حقن. نحن حقن 1000000 الخلايا ولكن يمكن بسهولة الفحص يمكن القيام به مع عدد أقل من الخلايا. وبالإضافة إلى ذلك، وسيلة حقن المهم. نجد أن نحصل على أفضل النتائج عندما يتم حقن هذه الخلايا في خليط 01:01 من matrigel وDMEM/F-12، بدلا من برنامج تلفزيوني أو DMEM/F-12.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> Accutase </td><td> إينفيتروجن </td><td> A1110501 </td></tr><tr><td> DMEM/F-12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 113300-032 </td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 354277 </td></tr></tbody></table>

teratoma generation in the testis capsule

الخلايا الجذعية المحفزة (الأمنية) لديها ميزة فريدة من نوعها التي يمكن أن تفرق في الخلايا من جميع الطبقات الجرثومية الثلاث. هذا يجعل منها أداة قيمة محتملة لعلاج أمراض عديدة ومختلفة. مع ظهور الناجم عن الخلايا الجذعية المحفزة (iPSCs)، ومواصلة البحث مع الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) هناك حاجة للفحوصات التي يمكن أن تثبت أن خط الخلية بشكل خاص المحفزة. وكانت سلالة الجرثومية انتقال المعيار الذهبي ليدل على pluripotence من الخلايا الجذعية الجنينية (مسك) خطوط 1،2،3. باستخدام هذا الفحص، يمكن للباحثين تبين أن خط مسك يمكن ان يجعل جميع أنواع الخلايا في الجنين بما في ذلك الخلايا الجرثومية 4. مع الجيل من خطوط ESC الإنسان 5،6، وكان الفحص المناسبة لاثبات pluripotence من هذه الخلايا غير واضح منذ المجالس الاقتصادية والاجتماعية لا يمكن أن الإنسان لا يمكن اختبارها لانتقال سلالة الجرثومية. كبديل، ويستخدم حاليا لفحص مسخي للتدليل على pluripotency الإنسان من الخلايا الجذعية المحفزة (hPSCs) 7،8،9. رغم أن هذا الاختبار قد حان مؤخرا تحت التدقيق ويجري استكشاف التكنولوجيات الجديدة بنشاط، وفحص مسخي هو معيار الذهب الحالية 7. في هذا الاختبار، يتم حقن هذه الخلايا في مسألة الى فأر المناعية للخطر. إذا كانت الخلايا المحفزة، سوف مسخي وضع في نهاية المطاف، وأجزاء من الورم وسوف تظهر الأنسجة من جميع الطبقات الجرثومية 3 10. في مقايسة مسخي، يمكن حقنه hPSCs في مناطق مختلفة من الماوس. مواقع الحقن الأكثر شيوعا تشمل كبسولة الخصية، وكبسولة الكلى والكبد، أو في الساق إما تحت الجلد أو في العضل 11. نحن هنا وصفا لبروتوكول قوية لجيل من teratomas من hPSCs باستخدام كبسولة خصية كموقع لنمو الورم.

Watch this Scientific Journal Video about Teratoma Generation in the Testis Capsule at JoVE.com

Teratoma Generation in the Testis Capsule

الإنسان الخلايا الجذعية المحفزة (hPSCs) لديها القدرة على التعامل مع عدد لا يحصى من الأمراض المختلفة. فائدة هذه الخلايا تكمن في حقيقة أنها يمكن أن تفرق في أي نوع من الخلايا في الجسم. نحن هنا وصف فحص مسخي، والذي يستخدم للتدليل على pluripotence من hPSCs.

الجيل مسخي في كبسولة الخصية

Pluripotent stem cells (PSCs) have the unique characteristic that they can differentiate into cells from all three germ layers.  This makes them a ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Making Sense of Listening: The IMAP Test Battery

جعل الشعور الاستماع : البطارية اختبار IMAP

The ability to hear is only the first step towards making sense of the range of information contained in an auditory signal. Of equal importance are the ...

A Strategy to Identify de Novo Mutations in Common Disorders such as Autism and Schizophrenia

استراتيجية لتحديد الطفرات دي نوفو في الاضطرابات الشائعة مثل التوحد والفصام

There are several lines of evidence supporting the role of de novo mutations as a mechanism for common disorders, such as autism and schizophrenia. First, ...

Generation of Alginate Microspheres for Biomedical Applications

جيل من المجهرية الجيني للتطبيقات الطبية الحيوية

Alginate-based materials have received considerable attention for biomedical applications because of their hydrophilic nature, biocompatibility, and ...

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

الجوانب الفنية للناسور أبهري أجوفي ماوس

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

كبسولة الكلوي Xenografting وتحت الجلد بيليه الزرع لتقييم البروستات التسرطن وتضخم البروستاتا الحميد

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

Generation and 3-Dimensional Quantitation of Arterial Lesions in Mice Using Optical Projection Tomography

جيل والكميات 3-الأبعاد من الآفات الشرياني في الفئران عن طريق الإسقاط الضوئي المقطعي

The generation and analysis of vascular lesions in appropriate animal models is a cornerstone of research into cardiovascular disease, generating ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

جمع واستخراج الحمض النووي من اللعاب لتسلسل الجيل القادم

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

An In Vitro Dormancy Model of Estrogen-sensitive Breast Cancer in the Bone Marrow: A Tool for Molecular Mechanism Studies and Hypothesis Generation

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; الخمول نموذج من الاستروجين تراعي سرطان الثدي في نخاع العظام: أداة للدراسات الآلية الجزيئية والجيل الفرضية

The study of breast cancer dormancy in the bone marrow is an exceptionally difficult undertaking due to the complexity of the interactions of dormant ...

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

Rapid and Efficient Generation of Recombinant Human Pluripotent Stem Cells by Recombinase-mediated Cassette Exchange in the AAVS1 Locus

الجيل السريع والفعال للخلايا الجذعية متعددة القدرات المؤتلف الإنسان التي تتوسط Recombinase-تبادل كاسيت في<em&gt; AAVS1</em&gt; الحالة رقم

Even with the revolution of gene-targeting technologies led by CRISPR-Cas9, genetic modification of human pluripotent stem cells&#160;(hPSCs)&#160;is ...

Drug Repurposing Hypothesis Generation Using the "RE:fine Drugs" System

المخدرات تطويعها لأغراض أخرى فرضية الجيل باستخدام &quot;RE: المخدرات بخير&quot; النظام

The promise of drug repurposing is that existing drugs may be used for new disease indications in order to curb the high costs and time for approval. The ...