Name: lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons
Uploaded: 2011-09-15T13:00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons at JoVE.com

نشكر ساندرا Bargen حصول على الدعم الفني الممتاز. وأيد هذا العمل من قبل إدارة البحوث البروتين (PRD ، TP A1.2 (RC وTS) ، ومولعا RUB البحوث وRektoratsprogramme -- wissenschaftlicher Nachwuchs (AK) وتم الحصول على الاجسام المضادة و39.4D5 F55A10 من ورم هجين دراسات الإنمائية بنك (DSHB ، مدينة أيوا ، IA).

<ol>
	<li>Vallstedt, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+levels+of+repressor+activity+assign+redundant+and+specific+roles+to+Nkx6+genes+in+motor+neuron+and+interneuron+specification.">Different levels of repressor activity assign redundant and specific roles to Nkx6 genes in motor neuron and interneuron specification.</a> Neuron. 31, 743-755 (2001).</li><li>Tsuchida, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographic+organization+of+embryonic+motor+neurons+defined+by+expression+of+LIM+homeobox+genes.">Topographic organization of embryonic motor neurons defined by expression of LIM homeobox genes.</a> Cell. 79, 957-970 (1994).</li><li>Lin, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+related+motor+neuron+pool+and+muscle+sensory+afferent+subtypes+defined+by+coordinate+ETS+gene+expression.">Functionally related motor neuron pool and muscle sensory afferent subtypes defined by coordinate ETS gene expression.</a> Cell. 95, 393-407 (1998).</li><li>Wiese, S., Beck, M., Karch, C., Sendtner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signalling+mechanisms+for+survival+of+lesioned+motoneurons.">Signalling mechanisms for survival of lesioned motoneurons.</a> Acta Neurochir. , 21-35 (2004).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

ميزة هذه التقنية preplating lectin المستندة هو أنه أقل تكلفة من الإجراء NTR المستندة P75 بالغسل ، وlectin هي أكثر استقرارا من الأجسام المضادة. إثراء المدرجة في الشكل. (2) وتبويب. 1 يبين أن الإجراء يسمح لتنقية عدد مماثل من الخلايا وأن غالبية هذه الخلايا تعبر عن علامة العصبون الحركي جزيرة - 1 / 2. الخطوة الأكثر أهمية هو الإجراء لعزل النخاع الشوكي القطني. إزالة السحايا وDRGs في (الشكل 2) أمر ضروري لتنقية الإجراء التالي lectin المستندة preplating. إذا كان قد نجح هذا صحيح ، وتقريبا جميع خلايا تعبر عن NTR P75 (صورة لممثل انظر الشكل 3A). سبب الفرق بين التعبير عن جزيرة - 1 / 2 وP75 NTR هو على الارجح بسبب التعبير عن حركية مماثلة القطني تفاضليا المستويات العليا والدنيا للجزيرة 1 / 2 10. في حالة وجود مستويات منخفضة من جزيرة 1 - التعبير / 2 قد هربوا هذا اهتمامنا في تلطيخ immuncytochemical والفرز اللاحقة كما كنا صارمة فيما يتعلق الخلايا إيجابية في مقابل سلبية (Tab. 1). بالإضافة إلى ذلك ، ويبين الجدول 1 بوضوح أن الخلايا المعزولة الإجراء البقاء في حالة صحية جيدة ، وهناك عدد قليل فقط التريبان الأزرق الخلايا الإيجابية التي تشير إلى أن تلف الخلايا بشكل لا رجعة فيه. هذا الإجراء بديل يسمح أيضا عزل العصبونات الحركية من أجنة واحدة ، وبالتالي من الفضلات الوراثي مختلطة من الفئران الجنينية. في الختام ، هذا البديل إلى إجراء بالغسل مع الضد NTR P75 6 ومتشابهة إن لم تكن متطابقة من حيث القدرات النطاقات الممكنة التطبيق ويوفر طريقة فعالة ورخيصة بديلة لتنقية العصبونات الحركية الفأر الجنينية.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> بولي DL - الأورنيثين هيدروبروميد </td><td> سيغما </td><td> P8638 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin </td><td> Invitrogen </td><td> 23017-015 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> الزجاج coverslips </td><td> الحرارية </td><td></td><td> Ø 10 أو 14mm </td></tr><tr><td> Lectin </td><td> سيغما </td><td> L5142 </td><td></td></tr><tr><td> خلية ثقافة الطبق </td><td> نونك </td><td> 150350 </td><td> Nunclon دلتا سطح </td></tr><tr><td> حصان المصل </td><td> يناريس </td><td> SHD3250ZK </td><td> كل دفعة يجب أن يكون اختبار للثقافة MN </td></tr><tr><td> B27 الملحق </td><td> Gibco </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Gibco </td><td> 35050-038 </td><td></td></tr><tr><td> CNTF </td><td> سيغما </td><td> N0513 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> Applichem </td><td> A1391 </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco </td><td> 21103-041 </td><td></td></tr><tr><td> ملقط </td><td></td><td></td><td> الفولاذ المقاوم للصدأ ، وحجم 4 أو 5 </td></tr><tr><td> التربسين </td><td> ورثينجتون </td><td> LS003707 </td><td></td></tr><tr><td> التربسين - المانع </td><td> سيغما </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> المضادة للجزيرة - 1 </td><td> DSHB </td><td> 39.4D5 </td><td> خلية ثقافة طاف </td></tr><tr><td> مكافحة Nkx6.1 </td><td> DSHB </td><td> F55A10 </td><td> خلية ثقافة طاف </td></tr><tr><td> مكافحة P75 NTR </td><td> Abcam </td><td> Ab8874 </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول 3. الكواشف جدول محدد والمعدات.

lectin-based isolation and culture of mouse embryonic motoneurons

العصبونات الحركية في العمود الفقري نحو تطوير المراحل الجنينية المبكرة تالية للتفتل من خلال تطوير النظام العصبي ، وتنمو في وقت لاحق من التشعبات والمحاور. خلايا عصبية ظهارية من الأنبوب العصبية التي تعبر عن Nkx6.1 هي الخلايا السليفة فريدة للعصبونات حركية الشوكي 1. على الرغم من التحرك نحو حركية مماثلة تالية للتفتل موقفهم النهائي وتنظيم أنفسهم في أعمدة على طول المسالك 2،3 الشوكي. أكثر من 90 ٪ من كل هذه العصبونات الحركية متباينة ، ووضع تعبير عن عوامل النسخ جزيرة 1 / 2. انهم يعصب عضلات الاطراف وكذلك من الجسم والأجهزة الداخلية. من بين أمور أخرى ، أعرب العصبونات الحركية عادة مستقبلات عامل تقارب عالية للعصبية في الدماغ مشتقة (BDNF) وNeurotrophin 3 (NT - 3) ، والتروبوميوزين ذات الصلة كيناز باء وجيم (TrkB ، TrkC). انها لا تعبر عن كيناز التروبوميوزين المتصلة A 4 (TrkA). بجانب مستقبلات two تقارب عالية ، والعصبونات الحركية لا تعبر عن انخفاض مستقبلات neurotrophin تقارب NTR P75. يمكن ربط جميع NTR P75 neurotrophins مع تقارب مماثلة لكنها أقل لجميع neurotrophins من المستقبلات عالية تقارب وربط neurotrophins ناضجة. داخل النخاع الشوكي الجنينية ، وأعرب عن حصرا NTR P75 من العصبونات الحركية في العمود الفقري 5. وقد استخدمت هذه المعرفة لتطوير تقنيات العزل العصبون الحركي لتنقية الخلايا من الغالبية العظمى من الخلايا المحيطة 6. تحولت عزل العصبونات الحركية مع مساعدة من أضداد محددة (بالغسل) ضد من المجالات خارج الخلية P75 NTR إلى أن تكون وسيلة مكلفة وكمية الأجسام المضادة المستخدمة في تجربة واحدة هي عالية نظرا لحجم لوحة المستخدمة لبالغسل. وثمة بديل أكثر اقتصادا هو استخدام lectin. وقد تبين Lectin ربط خصيصا لP75 NTR فضلا 7. الأسلوب التالي يصف أسلوب بديل باستخدام القمح الجرثومية راصة لإجراء preplating بدلا من الأضداد NTR P75. وlectin هو بديل رخيص الثمن للغاية على الضد NTR P75 وتنقية الصفوف باستخدام lectin مماثلة لتلك التي في جسم NTR P75. يمكن عزل العصبونات الحركية من الحبل الشوكي الجنينية باستخدام هذا الأسلوب ، البقاء والنمو خارج neurites.

Watch this Scientific Journal Video about Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons at JoVE.com

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

ووصف طريقة بديلة لعزل العصبونات الحركية الفأر الجنينية من الحبل الشوكي. الأسلوب يأخذ في الاعتبار حقيقة أن lectin يمكن ربط العصب تقارب منخفضة p75NTR مستقبلات عوامل النمو. هذا preplating lectin المستندة يسمح تنقية مماثلة لتلك التي مع الأجسام المضادة المحددة ضد p75NTR.

Lectin القائم على عزل وثقافة حركية مماثلة الجنينية الماوس

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection والثقافة الأولية من الخلايا العصبية الجنينية الماوس الحصين والقشرية

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

العزلة والثقافة من خلايا الفئران العصبية الجنينية: بروتوكول سريعة

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

تشريح والثقافة، وتحليل<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأنسجة الجنينية الشبكية

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

العزلة والثقافة وطويل الأجل صيانة الابتدائية الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية من المخ الجنينية القوارض

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...