Name: a simple chelex protocol for dna extraction from anopheles spp.
Uploaded: 2013-01-09T12:00:00
Duration: 7 min 16 s
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Die Autoren danken den Chefs, Häuptlinge und Gemeinden Macha für ihre unwaveing ​​Zusammenarbeit während mosquito Feldprobe Sammlungen. Dr. Doug Norris und Rebekka Kent angeboten unschätzbares Fachwissen auf dem Aussalzen Protokoll. Diese Arbeit wurde von der Johns Hopkins Malaria Research Institute Pilot-Grant-System finanziert. Mosquito und Parasiten DNA-Labor Standards wurden freundlicherweise von MR4, American Type Culture Collection &amp; gespendet.

Ein. Vorbereitende Präparation Mosquito Proben <ol><li> Ort Mücke auf einem kleinen Schneiden von Parafilm und Halterung am Binokular. </li><li> Cover in Tropfen entionisiertes Wasser, um Gewebe zu erweichen. </li><li> Einzuschneiden die Mücke Karkasse genau an der Verbindungsstelle zwischen dem Thorax und Abdomen, damit Nicking den Kopf und Thorax von der abdominalen Abschnitt. </li><li> Übertragen Sie jede seziert mosquito Abschnitt in einem sauberen autoklaviert 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen mit Moskito-ID-Nummer Details und entsprechend gekennzeichnet, um Körper Abschnitt (zB &quot;m&quot; für Mitte-gut Abschnitt; &quot;ht&quot; für Kopf und Thorax-Bereich) bezeichnen prelabeled. </li><li> Entsorgen Parafilm und wischen Mikroskoptisch mit 70% Alkohol angefeuchtet Kimwipe vor der Verarbeitung der nächsten Mücke. </li></ol> 2. DNA Extraktion aus Mosquito Proben <ol><li> Je 20 ul entionisiertem Wasser in Probenröhrchen und Pipettenspitze, die untergetaucht mosquito Abschnitt in eine un schleifeniform Suspension. </li><li> Fügen Sie 100 ul autoklaviertem 1X PBS / 1% Saponin Lösung Probenhomogenat und durch vorsichtiges momentanen Vortexen. </li><li> Inkubieren bei Raumtemperatur für 20 min. </li><li> Zentrifuge bei 20.000 xg für 2 min und Überstand verwerfen. </li><li> Pellet in 100 ul 1X PBS. </li><li> Zentrifugieren bei 20.000 xg für 2 min und Überstand verwerfen. </li><li> Durch leichtes Vortexen (5 sec), Pellet in 75 ul sterilem entionisiertem Wasser und 25 ul 20% w / v Chelex-100 Harzsuspension in deionisiertem Wasser. </li><li> Pierce Loch im Deckel der Probenröhrchen mit sterilen 23G Injektionsnadel in Bunsenbrenner geflammt. </li><li> Boil Probensuspension im Wasserbad auf schwimmenden Zahnstange (oder im Heizblock) für 10 min. </li><li> Zentrifugieren bei 20.000 × g für 1 Min. und Übertragung anschließenden DNA-Lösung in prelabeled Lagervials zur Verwendung als Matrize in PCR-Anwendungen. </li></ol> 3. Plasmodium falciparum Genotypisierung und Anophelesspp. Molecular Identification <ol><li> Fügen Sie 2,5 ul des Chelex DNA-Extrakt in 25 ul PCR Reaktionen auf DNA-Qualität 11 kontrollieren, zu identifizieren Anopheles Arten 10 und dem Genotyp P. falciparum 12 Mitte Darm und Speicheldrüsen Infektionen. </li><li> Um Amplikon Ertrag, vor allem für P. zu maximieren falciparum Detektion umfassen 1.5X Rinderserumalbumin (BSA) in dem PCR-Assay. Die folgende Reaktion Zusammensetzung wird empfohlen: (2,5 ul Vorlage, 0,25 pM Primer, 1,5 uM Magnesiumchlorid, 200 uM dNTPs, 1X PCR-Puffer, 1,5 X BSA und 1.0U Taq DNA-Polymerase, in 25 ul Volumen). </li><li> Um DNA-Qualität im Extrakt zu überprüfen, zu verstärken Region der Arthropoden mitochondrialen Nicotinamidadenindinucleotid Dehydrogenase (NADH)-Untereinheit 4 (ND4) Gen (Primer ND4FW [5&#39;-GTD YAT TTA TGA TTR CCT ​​AA-3 &#39;] und ND4RV [5&#39; -CTT CGD CTT CCW ADW CGT TC-3 &#39;]; erwarten Produkt 400bp) 11,13. </li><li> Um Anopheles gambia differenzierene sl. Geschwisterart (An. gambiae ss und An. arabiensis only), verstärken flankierenden SNPs in der intergenen Spacer (IGS) Region (Primer UN [5&#39;-GTGTGCCCCTTCCTCGATGT-3 &#39;], GA [5&#39;-CTGGTTTGGTCGGCACGTTT- 3 &#39;], AR [5&#39;-AAGTGTCCTTCTCCATCCTA-3&#39;]; erwarten Produkt 390bp Ein gambiae ss, 315bp Ein arabiensis) 10,11. </li><li> Für die Typisierung P. falciparum Antifolat Arzneimittelresistenz Polymorphismen, führen verschachtelten PCR zur ​​Region flankieren Aminosäurecodons 108, 51, 59, 16 und 164 in der Parasit Dihydrofolatreduktase (DHFR)-Gen amplifizieren: Primäre Runde Primer: M1 [5&#39;-TTTATGATGGAACAAGTCTGC-3 &#39;] und M5 [5&#39;-AGTATATACATCGCTAACAGA-3&#39;] Sekundäre Runde Primer: M3 [5&#39;-TTTATGATGGAACAAGTCTGCGACGTT-3 &#39;] mit F / [5&#39;-AAATTCTTGATAAACAACGGAAACCTTTTA-3&#39;] Oder F [5&#39;-GAAATGTAATTCCCTAGATATGGAATATT-3] mit M4 [5&#39;-TTAATTTCCCAAGTAAAACTATTAGAGCTTC-3 &#39;]). Auch verstärken enthaltenden Bereich Aminosäurecodons 436, 437, 540, 581 And 613 in der P. falciparum Dihydropteroat Synthetase (DHPS)-Gen: Primäre Runde Primer R2 [5&#39;-AACCTAAACGTGCTGTTCAA-3 &#39;] mit R / [5&#39;-AATTGTGTGATTTGTCCACAA3&#39;]; Sekundäre Runde Primer J: [5&#39;-&#39;TGCTAGTGTTATAGATATAGGTGGAGAAAGC-3&#39;] mit K / [5&#39;-CTATAACGAGGTATTGCATTTATTGCAAGAA-3 &#39;] Oder K: [5&#39;-TGCTAGTGTTATAGATATAGGATGAGCATC-3 &#39;] mit K /, Oder L [5&#39;-ATAGGATACTATTTGATATTGATATTGGACCAGGATTCG-3 &#39;] mit L / [5&#39;-5TATTACAACATTTTGATCATTCGCGCAACCGG-3&#39;] 12. </li><li> Gegenstand 4 ul Amplikon zu allelspezifischen Restriktionsenzym Aufschlüsse in 30 ul Reaktionen nach den Anweisungen des Herstellers zum Aufspüren Antifolat Medikamentenresistenz-assoziierten Polymorphismen 12. </li><li> Betreff 5 ul PCR Amplikon (oder 15 ul Restriktionsverdau) pro Spur von Ethidiumbromid-gefärbten 2% Agarosegel-Elektrophorese (100 - 120V) und visualisieren Banden unter UV Durchleuchtung. </li></ol>

<ol>
	<li>Bonnet, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+antimalarial+treatment+in+Guinea:+in+vivo+study+of+two+artemisinin+combination+therapies+in+Dabola+and+molecular+markers+of+resistance+to+sulphadoxine-pyrimethamine+in+N'Zerekore.">Efficacy of antimalarial treatment in Guinea: in vivo study of two artemisinin combination therapies in Dabola and molecular markers of resistance to sulphadoxine-pyrimethamine in N'Zerekore.</a> Malar. 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Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die vereinfachte Chelex hier vorgestellte Methode ermöglicht die Extraktion der Qualität Anopheles spp und P. falciparum DNA aus Moskito-Proben zugänglich diverse PCR-Anwendungen. Diese Technik kann für die molekulare Identifizierung von Malariavektorkontrollschulung Mücken und Überwachung der Arzneimittel-resistente P. eingesetzt werden falciparum Allele in Mücken National Malaria Control Programs. Die Vorteile des vereinfachten Chelex Technik gehören Einfachheit, weniger Reagenzien und damit Kosten, Sicherheit und kürzere Bearbeitungszeiten (37 min) als Standard-Protokolle wie das Aussalzen Verfahren 10 (2 hr 47 min und einer Nacht Schritt, Tabelle 1). Die oben genannten Vorteile und minimale Reagenz Anforderungen (3 Reagenzien) auf den aktuellen Standard-Protokoll (10 Reagenzien, Tabelle 1) 11,15 gegenüber, machen die vereinfachte Chelex Protokoll besonders freundlich zu endemischen Land Laboratorien, in denen eine konstante ReagenzSupply Chain ist es oft schwierig zu pflegen. Eine Beschränkung des Verfahrens ist, dass wie die Standard-Protokoll, auch war Gegenstand PCR-Inhibitoren bekannt, in der Mücke Integument 16 auftreten. Jedoch ist dies ohne weiteres durch Einschluß von BSA in den Assays erleichtert. BSA wurde auch erfolgreich als Verstärkung Enhancer gegen Inhibitoren in anderen PCR-Anwendungen 17,18 beschäftigt.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> Chelex-100, 50-100 trockenen mesh </td><td> BioRad </td><td> # 143-2832 </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> SIGMA </td><td> 142-7425 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> New England Biolabs </td><td> B9001S </td><td></td></tr></tbody></table>

a simple chelex protocol for dna extraction from anopheles spp.

Endemischen Ländern übernehmen zunehmend molekulare Werkzeuge für die effiziente Typisierung, Identifizierung und Überwachung gegen Malariaparasiten und Vektor Mücken, als integralen Bestandteil ihrer Bekämpfungsprogramme 1,2,3,4,5. Für eine nachhaltige Etablierung dieser genauen Ansätze in Operations Research zur Malaria-Kontrolle und Beseitigung Bemühungen, einfache und kostengünstige Methoden, mit sparsamen Reagenz und Anforderungen an die Ausrüstung zu stärken sind wesentliche 6,7,8. Hier präsentieren wir Ihnen eine einfache Chelex-basierte Technik zur Gewinnung von Malaria-Parasiten und Vektor-DNA aus dem Feld gesammelt mosquito Proben. Wir morphologisch identifizierten 72 Anopheles gambiae sl. Von 156 Moskitos durch Pyrethrum Spray fängt in den Schlafräumen der Haushalte innerhalb eines 2.000 km 2 Nähe des Malaria Institut Macha erfasst. Nach Dissektion, die Kopf und Thorax aus dem Bauch zu trennen für alle 72 Anopheles gambiae sl. Mücken, wurden die beiden Abschnitte einzeln in 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen platziert und untergetaucht in 20 ul entionisiertem Wasser. Verwendung einer sterilen Pipettenspitze wurde jeder Abschnitt separat Mücken zu einer gleichmäßigen Suspension in entionisiertem Wasser homogenisiert. Der anschließenden Homogenat aus jeder Mücke Abschnitt wurde 10 ul beibehalten, während die anderen 10 ul einer separaten autoklavierten 1,5 ml Röhrchen überführt wurde. Die separaten Aliquots wurden DNA-Extraktion entweder durch die vereinfachte Chelex oder die Standard Aussalzen Extraktionsprotokoll 9,10 unterzogen. Das Protokoll ist Aussalzen sogenannte und weit verbreitet, weil sie hohe Salzkonzentrationen verwendet anstelle von gefährlichen organischen Lösungsmitteln (wie Phenol und Chloroform) für das Protein Fällungsschritt während der DNA-Extraktion 9. Extrakte wurden als Matrizen für die PCR-Amplifikation unter Verwendung von Primern verwendet Targeting Arthropoden mitochondrialen Nicotinamidadenindinucleotid Dehydrogenasenase (NADH) Untereinheit 4-Gen (ND4) an DNA-Qualität 11, eine PCR zur ​​Identifizierung von Anopheles gambiae Geschwisterart 10 und eine verschachtelte PCR zur ​​Typisierung von Plasmodium falciparum-Infektion 12 zu überprüfen. Vergleich mit DNA-Qualität (ND4) PCR zeigten 93% Sensitivität und 82% Spezifität für die Chelex Ansatz gegenüber der etablierten Aussalzen Protokoll. Entsprechende Werte von Sensitivität und Spezifität waren 100% bzw. 78%, jeweils unter Verwendung Geschwisterart Identifizierung PCR und 92% und 80%, jeweils für P. falciparum Nachweis PCR. Es gab keine signifikanten Unterschiede in der Anteil an Proben, bei Amplikon Signals mit der oder den regulären Chelex Aussalzen Protokoll über alle drei PCR-Anwendungen. Die Chelex Ansatz erforderlich drei einfachen Reagenzien und 37 min in Anspruch, während das Aussalzen Protokoll brachte 10 verschiedene Reagenzien und 2 h und 47 min &#39;Bearbeitungszeit, einschließlich einer Übernachtung Schritt. Unsere Ergebnisse zeigen, tham Chelex Verfahren ist vergleichbar mit der vorhandenen Aussalzen Extraktion und kann als eine einfache und nachhaltige Ansatz mit beschränkten Ressourcen wo eine konstante Reagenz Lieferkette ist oft schwierig zu warten substituiert sein.

Beispiele für Ergebnisse von PCR-Assays für Moskito DNA-Extrakt Qualität (Abbildung 1), Anopheles arabiensis molekulare Identifizierung (Abbildung 2) und P. falciparum-Erkennung (Abbildung 3) zeigen, dass die vereinfachte Chelex Verfahren zu ähnlichen Ergebnissen liefert der Standard Aussalzen Protokoll 10, obwohl viel weniger Schritte (Tabelle 1). Bei vergleichbaren DNA-Qualität in den jeweiligen Extrakten ist es nicht verwunderlich, dass die Probe Positivität Preise in Bezug auf An. gambiae Geschwister Arten sowie Parasiten Infektionsraten waren statistisch nicht unterschiedlich basierend auf McNemar-Chi-Quadrat-Test (Abbildung 3). Sensitivität (%) wurde berechnet als TP / (TP + FN) * 100, wo TP bezeichnet wahren Positiven und FN bezeichnet falsche Negative. Spezifität (%) wurde als TN / bestimmt (TN + FP) * 100, wo TN bezeichnet wahre Negative und FP bezeichnet Fehlalarme. Die DNA-Qualität (ND4) PCR zeigten 93% Sensitivität und 82% Spezifität für die Chelex Ansatz im Vergleich zu den etablierten Aussalzen Protokoll als Goldstandard. Entsprechende Werte von Sensitivität und Spezifität waren 100% bzw. 78%, jeweils unter Verwendung Geschwisterart Identifizierung PCR und 92% und 80%, jeweils für P. falciparum Nachweis PCR. Der Zusatz von BSA an Reaktionsgemische ergab eine allgemeine Erhöhung der PCR Positives (3) infolge Entlastung der PCR-Inhibitoren 14, sowohl für die vereinfachte Chelex und regelmäßige Aussalzen Protokoll. Allerdings war dieser Anstieg statistisch nicht signifikant mit Ausnahme von DNA-Qualität (ND4 PCR) auf Chelex Extrakte (p = 0,039). Allel-spezifische Restriktionsenzymverdau auf P. falciparum DHFR (oder andere Target-Gen) Amplikon ermöglicht die Genotypisierung von Mitte Darm und Speicheldrüse Malariainfektionen für Arzneimittelresistenz Allele (Fig. 4; Speicheldrüse Daten nicht gezeigt). <table border = &quot;1&quot;&gt; <tbody><tr><td colspan="2"> Einfache Chelex Procedure </td><td colspan="2"> Standard Aussalzen Procedure </td></tr><tr><td> Treppe </td><td> Reagenzien </td><td> Treppe </td><td> Reagenzien </td></tr><tr><td><ol><li> Fügen Probe 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen und homogenisieren in 100 ul 1X PBS / 1% Saponin-Lösung (2 min). </li><li> Hinterlegen bei Raumtemperatur für 20 min. </li><li> Spin bei 20.000 xg für 2 min und Überstand verwerfen. </li><li> Fügen Sie 100 ul 1X PBS und vorsichtig mischen durch kurzes Vortexen (3 sec). </li><li> Spin bei 20.000 xg für 2 min und Überstand verwerfen. </li><li> Fügen Sie 25 ul 20% w / v Chelex in entionisiertem Wasser und 75 ul sterilem entionisiertem Wasser. </li><li> Pierce Loch im Deckel des Probenröhrchens mit heißer, steriler 23G Injektionsnadel und Tubeninhalt Sieden für 10 min. </li><li> Spin Mikrozentrifugenröhrchen bei 20000 × g für 1 min. </li><li> Überstand in sterile prelabeled Fläschchen und store DNA-Lösung bei -20 ° C bis zur Verwendung (2,5 ul in 25 ul PCR-Reaktion). </li></ol></td><td> PBS Saponin Chelex-100 Perlen </td><td><ol><li> Hinzufügen Probe zu 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen geben und homogenisieren in 100 ul Puffer Bender * mit 1% DEPC (2 min). </li><li> Inkubieren bei 65 ° C für 1 Stunde. </li><li> Fügen Sie 15 ul kalten 8 M Kaliumacetat. Vorsichtig mischen und auf Eis inkubieren für 45 min. </li><li> Spin Probe in Mikrozentrifugenröhrchen bei 20.000 xg für 10 min und Transfer Überstand in ein neues 1,5 ml-Tube. </li><li> Fügen Sie 250 ul 100% Ethanol und gut mischen durch Invertieren des Röhrchens. </li><li> Inkubieren Probe bei RT 5 min. </li><li> Spin Proben bei 20.000 × g für 15 min. </li><li> Ansaugen und Überstand verwerfen, so dass das Pellet vollständig trocknen im Rohr (30 min). </li><li> Pellet in 20 ul 0,1 X SSC + RNAse (10 ug / ml) über Nacht bei 4 ° C. </li><li> Fügen Sie 80 ul DEPC Wasser und bei -20 ° C bis zur Verwendung. </li></ol></td><td> Diethylpyrocarbonat (DEPC) * Bender Buffer: 0,1 M NaCl 0,2 M Sucrose 0,1 M Tris-HCL 0,05 M EDTA, pH 9,1 0,5% SDS in DEPC Wasser 8 M Kaliumacetat Ethanol 0,1 X Saline Natriumcitrat (SSC)-Puffer RNAse (10 ug / ml) </td></tr><tr><td colspan="2"> TOTAL TIME: 37 min </td><td colspan="2"> TOTAL TIME: 2 Std. 47 min, plus Nacht </td></tr></tbody></table> Tabelle 1. Schritt Vergleich der Reagenzien und Zeitbedarf für einfache Chelex Protokoll Schritt und stehenard Aussalzen Methode zur DNA-Extraktion aus Moskito-Proben. <img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/3281/3281fig1.jpg" /> Abbildung 1. ND4 mitochondrialen PCR Vergleich der DNA-Qualität von vereinfachten Chelex &quot;C&quot; und Standard Aussalzen &quot;M&quot;-Extrakten auf Anopheles arabiensis Feldproben. NC, Negativkontrolle; M1 und C1, M2 und C2, C3 und M3 und M4 und C4 sind gepaart Aussalzen und Chelex Extrakte von gleichen An. arabiensis mosquito Proben. L, 100 bp DNA-Leiter. <img alt="Abbildung 2" src="/files/ftp_upload/3281/3281fig2.jpg" /> Abbildung 2 Molecular Identifizierung PCR für Anopheles arabiensis C1 und M1, M2 und C2, C3 und M3 und M4 bedeuten C4 jeweiligen Amplikon aus Aussalzen &quot;M&quot; und vereinfacht Chelex &quot;C&quot; DNA Extrakte zur gleichen Moskito Proben;.. AR, Anopheles arabiensispositive Kontrolle; L, 100 bp DNA-Leiter. <img alt="Abbildung 3" src="/files/ftp_upload/3281/3281fig3.jpg" /> Abbildung 3. Erkennung von Positive auf Chelex und Aussalzen DNA-Extrakte für Moskito Feldproben mit PCR-Assays für die molekulare Identifizierung von Anopheles arabiensis (AR) 10, Arthropoden NADH-Dehydrogenase-Gen 4 (ND4) DNA Qualitätstest 11 und Antifolat drug resistance P . falciparum DHFR Genotypisierung 12 (F-M4). Ergebnisse bei Versuchen mit oder ohne BSA in der Reaktionsmischung ausgeführt dargestellt. McNemar-Chi-Quadrat-Test wurde verwendet, um festzustellen, ob die Unterschiede zwischen Prozent positive PCRs von DNA aus der vereinfachten Chelex extrahiert und die Standard Aussalzen Protokolle waren statistisch signifikant. <img alt="Abbildung 4" src="/files/ftp_upload/3281/3281fig4.jpg" /> <strong&gt; Abbildung 4. Anwendung des vereinfachten Chelex Protokoll Genotypisierung P. falciparum-Infektionen bei Mücken (mid-gut-Daten gezeigt) für Resistenz-Allele. BSTN I Verdauung auf Amplikon flankierenden Codon 108 des P. falciparum DHFR-Gen 12 zeigt Cycloguanil-resistente Mutanten in Moskito S108T Proben (M1-M5; mittleres Darm Daten gezeigt). U, unverdaute 522 bp Amplikon; FCR3, Labor-Standard P. falciparum positive Kontrolle Klon trägt S108T; K1, P. falciparum Laborstandard Klon negative Kontrolle Durchführung Cycloguanil-sensitive S108N; L, 100 bp DNA-Leiter.

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A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

Eine schnelle und kostengünstige Möglichkeit, die Qualität Malariaparasiten und Vektor-DNA aus mosquito Proben zu extrahieren beschrieben. Aufbauend auf chelatisierenden Eigenschaften der Chelex Harz, ermöglicht die einfache Methode Genotypisierung von Malaria-Parasiten in Mücken Mitte Darm und Speicheldrüsen Phasen sowie molekulare Identifizierung der<em&gt; Anopheles</em&gt; Geschwister Spezies durch PCR.

A Simple Chelex Protokoll zur DNA-Extraktion aus<em&gt; Anopheles</em&gt; Spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

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A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.

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A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

A Protocol for Collecting and Staining Hemocytes from the Yellow Fever Mosquito Aedes aegypti

Ein Protokoll für die Erfassung und Färbung Blutzellen aus dem Gelbfiebermücke Aedes aegypti</em

 Mosquitoes are vectors for a number  of disease-causing pathogens such as the yellow fever virus, malaria parasites  and filarial worms. Laboratories are ...

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Immunologie und Infektion

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol (PEG) Precipitation

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol PEG Precipitation

IgY-Technologie: Extraction of Chicken Antikörper aus Eidotter durch Polyethylenglykol (PEG) Niederschlag

Hens can be immunized by means of  i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume  0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun ...

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

High-und Low Throughput-Screens mit Wurzelknoten-Nematoden Meloidogyne spp.</em

Root-knot nematodes (genus Meloidogyne) are obligate plant parasites. They are extremely polyphagous and considered one of the most economically important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

Ein einfaches Protokoll für Thrombozyten-vermittelte Verklumpung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Infizierten Erythrozyten in einer Ressource Schlechte Einstellung

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

A Simple and Rapid Protocol to Non-enzymatically Dissociate Fresh Human Tissues for the Analysis of Infiltrating Lymphocytes

Eine einfache und schnelle Protokoll zum Nicht enzymatisch Dissociate Frische menschlichen Geweben zur Analyse der infiltrierenden Lymphozyten

The ability of malignant cells to evade the immune system, characterized by tumor escape from both innate and adaptive immune responses, is now accepted ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

Eine einfache und effiziente Methode zu konstruieren Mutant Vacciniavirusvektoren

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraktion von Hemocytes aus Drosophila Melanogaster Larven für mikrobielle Infektionen und Analyse

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Combining Analysis of DNA in a Crude Virion Extraction with the Analysis of RNA from Infected Leaves to Discover New Virus Genomes

Kombination von Analyse von DNA in eine grobe Virion-Extraktion mit der Analyse der RNA aus den infizierten Blättern, entdecken neue Virus-Genom

This metagenome approach is used to identify plant viruses with circular DNA genomes and their transcripts. Often plant DNA viruses that occur in low ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Schnelle, sichere und einfache manuelle am Krankenbett Nukleinsäure-Extraktion für den Nachweis des Virus in Vollblut-Proben

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Eine High-Throughput-Plattform für das Screening von Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...