Name: spheroid assay to measure tgf-&#946;-induced invasion
Uploaded: 2011-11-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spheroid Assay to Measure TGF-ÃŽÂ²-induced Invasion at JoVE.com

ونحن ممتنون لايواتا كين (OSI الصيدلة ، نيويورك ، الولايات المتحدة) عن الكواشف وفريد ​​ميلر (باربرا آن كارمانوس للسرطان Intitute ، ديترويت ، الولايات المتحدة الأمريكية) لخطوط الخلية.

1. إعداد الحل methocel (500 مل) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الأوتوكلاف 6 غرام من methylcellulose في زجاجة 500 مل تحتوي على مغناطيسي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> حل methylcellulose في 250 مل من دون DMEM/F12 محمى المصل (60 درجة مئوية) لمدة 20 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 2...

<ol>
	<li>Akhurst, R. J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+signaling+in+cancer--a+double-edged+sword.">TGF-&#946; signaling in cancer--a double-edged sword.</a> Trends. Cell. Biol. 11, S44-S51 (2001).</li><li>Massagu&#233;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+in+Cancer.">TGF-&#946; in Cancer.</a> Cell. 134, 215-215 (2008).</li><li>Ghellal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+TGF-&#946;1+and+TGF-&#946;+in+human+breast+carcinoma.">Prognostic significance of TGF-&#946;1 and TGF-&#946; in human breast carcinoma.</a> Anticancer. Res. 20, 4413-4413 (2000).</li><li>Sheen-Chen, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+levels+of+transforming+growth+factor-&#946;1+in+patients+with+breast+cancer.">Serum levels of transforming growth factor-&#946;1 in patients with breast cancer.</a> Arch. Surg. 136, 937-937 (2001).</li><li>ten Dijke, P., Hill, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+TGF-&#946;-Smad+signaling.">New insights into TGF-&#946;-Smad signaling.</a> Trends Biochem. Sci. 29, 265-265 (2004).</li><li>Moustakas, A., Heldin, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-Smad+TGF-&#946;+signals.">Non-Smad TGF-&#946; signals.</a> J. Cell Sci. 118, 3573-3573 (2005).</li><li>Soule, H. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+a+spontaneously+immortalized+human+breast+epithelial+cell+line,+MCF-10.">Isolation and characterization of a spontaneously immortalized human breast epithelial cell line, MCF-10.</a> Cancer Res. 50, 6075-6075 (1990).</li><li>Strickland, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+premalignant+MCF10AT+generates+heterogeneous+malignant+variants+with+characteristic+histologic+types+and+immunohistochemical+markers.">Progression of premalignant MCF10AT generates heterogeneous malignant variants with characteristic histologic types and immunohistochemical markers.</a> Breast Cancer Res. Treat. 64, 235-235 (2000).</li><li>Santner, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+MCF10CA1+cell+lines+derived+from+premalignant+human+breast+epithelial+MCF10AT+cells.">Malignant MCF10CA1 cell lines derived from premalignant human breast epithelial MCF10AT cells.</a> Breast Cancer Res. Treat. 65, 101-101 (2001).</li><li>Smalley, K. S., Lioni, M., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Life+isn't+flat:+taking+cancer+biology+to+the+next+dimension.">Life isn't flat: taking cancer biology to the next dimension.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. Anim. 42, 242-242 (2006).</li><li>Kobayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquired+multicellular-mediated+resistance+to+alkylating+agents+in+cancer.">Acquired multicellular-mediated resistance to alkylating agents in cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90, 3294-3294 (1993).</li><li>Inman, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SB-431542+is+a+potent+and+specific+inhibitor+of+transforming+growth+factor-b+superfamily+type+I+activin+receptor-like+kinase+(ALK)+receptors+ALK4,+ALK5,+and+ALK7.">SB-431542 is a potent and specific inhibitor of transforming growth factor-b superfamily type I activin receptor-like kinase (ALK) receptors ALK4, ALK5, and ALK7.</a> Mol. Pharmacol. 62, 65-65 (2002).</li><li>Wiercinska, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TGF-&#946;/Smad+pathway+induces+breast+cancer+cell+invasion+through+the+up-regulation+of+matrix+metalloproteinase+2+and+9+in+a+spheroid+invasion+model+system.">The TGF-&#946;/Smad pathway induces breast cancer cell invasion through the up-regulation of matrix metalloproteinase 2 and 9 in a spheroid invasion model system.</a> Breast Cancer Res. Treat. 128, 657-657 (2011).</li><li>Tang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+switches+from+tumor+suppressor+to+prometastatic+factor+in+a+model+of+breast+cancer+progression.">TGF-&#946; switches from tumor suppressor to prometastatic factor in a model of breast cancer progression.</a> J. Clin. Invest. 112, 1116-1116 (2003).</li><li>Provenzano, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+density+promotes+mammary+tumor+initiation+and+progression.">Collagen density promotes mammary tumor initiation and progression.</a> BMC. Med. 6, 11-11 (2008).</li><li>Ramaswamy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+signature+of+metastasis+in+primary+solid+tumors.">A molecular signature of metastasis in primary solid tumors.</a> Nat. Genet. 33, 49-49 (2003).</li><li>Debnath, J., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modelling+glandular+epithelial+cancers+in+three-dimensional+cultures.">Modelling glandular epithelial cancers in three-dimensional cultures.</a> Nat. Rev. Cancer. 5, 675-675 (2005).</li><li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue.">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 8, 839-839 (2007).</li><li>Lee, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+models+of+normal+and+malignant+breast+epithelial+cells.">Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells.</a> Nat. Methods. 4, 359-359 (2007).</li><li>Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+with+basement+membrane+serves+to+rapidly+distinguish+growth+and+differentiation+pattern+of+normal+and+malignant+human+breast+epithelial+cells.">Interaction with basement membrane serves to rapidly distinguish growth and differentiation pattern of normal and malignant human breast epithelial cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89, 9064-9064 (1992).</li><li>Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> 30, 256-256 (2011).</li><li>Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p21-Activated+kinase+1+coordinates+aberrant+cell+survival+and+pericellular+proteolysis+in+a+three-dimensional+culture+model+for+premalignant+progression+of+human+breast+cancer.">p21-Activated kinase 1 coordinates aberrant cell survival and pericellular proteolysis in a three-dimensional culture model for premalignant progression of human breast cancer.</a> 10, 314-314 (2011).</li><li>Li, Q., Chow, A. B., Mattingly, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+overlay+culture+models+of+human+breast+cancer+reveal+a+critical+sensitivity+to+mitogen-activated+protein+kinase+kinase+inhibitors.">Three-dimensional overlay culture models of human breast cancer reveal a critical sensitivity to mitogen-activated protein kinase kinase inhibitors.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 332, 821-821 (2010).</li></ol>

أنشأنا نموذجا كروي التي MCF10A1 الخلايا الخبيثة ومشتقاته في غزو مصفوفة الكولاجين بطريقة TGF - β - تعتمد. أولا ، يتم تشكيل الأجسام الشبه الكروية في 96 بئرا لوحات تعليق الجولة القاع في وجود methylcellulose. بالطبع ، يمكن أن تستخدم أيضا على شكل حرف U بولي HEMA لوحات مغلفة لهذا الغرض. مطلو?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> ميثيل السليلوز </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M0512 </td><td></td></tr><tr><td> PureCol </td><td> المتقدمة Biomatrix </td><td> 5005 - B </td><td></td></tr><tr><td> مؤشر الرقم الهيدروجيني الشرائط </td><td> ميرك </td><td> 9533 </td><td></td></tr><tr><td> 96 - جيدا تعليق لوحات </td><td> غرينر بيو واحد </td><td> 650 185 </td><td></td></tr><tr><td> 96 - TC التصاق جيد لوحات </td><td> غرينر بيو واحد </td><td> 655 180 </td><td></td></tr></tbody></table>

spheroid assay to measure tgf-&#946;-induced invasion

TGF - β ومعارضة الأدوار في تطور سرطان الثدي عن طريق العمل كمركز الكابتة للورم في المرحلة الأولي ، ولكن تحفيز الغزو والانبثاث في 1،2 مرحلة لاحقة. علاوة على ذلك ، كثيرا ما هى overexpressed TGF - β في سرطان الثدي وتعبيرها يرتبط بسوء التشخيص والانبثاث 3،4. الآليات التي لا TGF - β يدفع الغزو مفهومة جيدا. TGF - β يتسبب ردوده الخلوية عبر النوع الثاني TGF - β (TβRII) والنوع الأول (TβRI) المستقبلات. عند تشكيل TGF - β المعقدة التي يسببها مغايرة التغصن ، TβRII phosphorylates في TβRI. وTβRI تنشيط يبدأ في الخلايا مما يشير المسار الكنسي Smads بواسطة مستقبلات phosphorylating (R - Smads) ، أي Smad2 وSmad3. تنشيط هذه R - Smads شكل مجمعات مغايرة التغصن مع Smad4 والتي تتراكم في نواة وتنظيم النسخ للجينات الهدف 5. بالإضافة إلى د سابقامسار Smad escribed ، والنتائج في تنشيط مستقبلات تفعيل عدة مسارات أخرى غير Smad يشير ، على سبيل المثال Mitogen المنشط بروتين كيناز (MAPK) 6 مسارات. لدراسة دور β - TGF في مراحل مختلفة من سرطان الثدي ، والتي قطعناها على أنفسنا استخدام نظام MCF10A الخلية. حولت H - RAS هذا النظام يتألف من خلايا خلدت عفويا MCF10A1 الثدي (M1) الظهارية 7 ، M1 - المشتقة MCF10AneoT (M2) ، والتي تنتج آفات مرحلة ما قبل 8 في الفئران ، وMCF10CA1a M2 المشتقة (M4) ، الذي أنشئ من M2 xenografts وأشكال سرطان الدرجة العالية ، مع القدرة على metastasize إلى 9 في الرئة. هذه السلسلة MCF10A توفر إمكانية لدراسة استجابات الخلايا مع درجات مختلفة من الأورام الخبيثة التي ليست منحازة بواسطة خلفية وراثية مختلفة. لتحليل TGF - β بفعل الغزو ، ولدت لنا MCF10A كروي مثلي النمط embe الثقافات الخليةdded في مصفوفة 3D الكولاجين في المختبر (الشكل 1). مثل هذه النماذج البشرية تشبه الأورام في الجسم الحي من خلال إنشاء التدرج من الاوكسجين والمواد الغذائية ، مما أدى إلى خلايا نشطة والغازية على الخلايا خارج وهادئة أو حتى نخرية في الداخل من 10 كروي. كما تم عرض كروي المقايسات تستند إلى أفضل تلخيص مقاومة المخدرات من الثقافات أحادي الطبقة 11. يسمح هذا النموذج 3D MCF10 نظام لنا لتحقيق تأثير TGF - β يدل على خصائص الغازية من خلايا الثدي في مراحل مختلفة من السرطان.

Watch this Scientific Journal Video about Spheroid Assay to Measure TGF-ÃŽÂ²-induced Invasion at JoVE.com

Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

يوصف لفحص لقياس كميا تحويل عامل النمو (TGF) - β بفعل الغزو في المواد الهلامية الكولاجين 3 الأبعاد. هذا الاختبار يستفيد من سلسلة MCF10A من خطوط الخلايا التي تمثل مراحل مختلفة من تطور مرض السرطان الثدي. ويمكن اعتماد هذه الطريقة ليتم استخدامها مع خطوط الخلايا الأخرى ، ويمكن استخدامها لتفعيل التحقيق المحتملين الآخرين أو مثبطات الغزو.

كروي الفحص لقياس TGF - β بفعل الغزو

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

في الوقت الحقيقي المعاوقة الكهربائية تقنية تستند إلى قياس غزو أحادي الطبقة الخلية البطانية من قبل خلايا السرطان

Metastatic dissemination of malignant cells requires degradation of basement membrane, attachment of tumor cells to vascular endothelium, retraction of ...

How to Measure Cortical Folding from MR Images: a Step-by-Step Tutorial to Compute Local Gyrification Index

كيفية قياس الطي القشرية من صور MR : برنامج تعليمي خطوة بخطوة لحساب الرقم القياسي المحلي Gyrification

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will ...

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

النمذجة والتصوير 3 الأبعاد غزو الخلية الجماعية

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Method to Measure Tone of Axial and Proximal Muscle

طريقة لقياس النغمة من العضلات المحورية والدانية

The control of tonic muscular activity remains poorly understood.  While abnormal tone is commonly assessed clinically by measuring the passive resistance ...

Accuracy in Dental Medicine, A New Way to Measure Trueness and Precision

الدقة في طب الأسنان، طريقة جديدة لقياس الصدق والدقة

Reference scanners are used in dental medicine to verify a lot of procedures. The main interest is to verify impression methods as they serve as a base ...

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

A Modified In vitro Invasion Assay to Determine the Potential Role of Hormones, Cytokines and/or Growth Factors in Mediating Cancer Cell Invasion

والتعديل<em&gt; في المختبر</em&gt; الغزو الفحص لتحديد الدور المحتمل للالهرمونات، السيتوكينات و / أو عوامل النمو في التوسط السرطان غزو الخلايا

Blood serum serves as a chemoattractant towards which cancer cells migrate and invade, facilitating their intravasation into microvessels. However, the ...

Assessment of Ovarian Cancer Spheroid Attachment and Invasion of Mesothelial Cells in Real Time

تقييم سرطان المبيض كروي مرفق وغزو الخلايا الظهارية في الوقت الحقيقي

Ovarian cancers metastasize by shedding into the peritoneal fluid and dispersing to distal sites within the peritoneum. Monolayer cultures do not ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

القياس عن بعد داخل الرحم لقياس ماوس مقلص الضغط<em&gt; في فيفو</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

ثلاثي الأبعاد (3D) ورم الجسم الشبه الكروي الغزو الفحص

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Chick Heart Invasion Assay for Testing the Invasiveness of Cancer Cells and the Activity of Potentially Anti-invasive Compounds

فرخ القلب الغزو الفحص لاختبار الغازية من خلايا سرطان وآخر للمركبات يحتمل مكافحة الغازية

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...