Name: spheroid assay to measure tgf-&#946;-induced invasion
Uploaded: 2011-11-16T13:00:00
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우리는 세포 라인을위한 시약 및 프레드 밀러 (바바라 앤 Karmanos 암 Intitute, 디트로이트, 미국)의 켄 이와타 (OSI 제약, 뉴욕, 미국)에게 감사하고 있습니다.

1. methocel 솔루션의 준비 (500 ML) <ol><li> 자기 활동가를 포함한 500 ML 병에 메틸 셀룰로오스의 압력솥 6g. </li><li> 20 분에 대한 혈청 (60 ° C)없이 preheated DMEM/F12 250 ML에 메틸 셀룰로오스를 분해. </li><li> 10 % 말 혈청을 포함하는 DMEM/F12 (RT) 250 ML을 추가합니다. 믹스 하룻밤 (4 ° C). </li><li> 원심 분리 (5천그램, 2 시간, 4 ° C)의 솔루션을 취소합니다. </li><li> 새로운 튜브 (재고 솔루션의 9​​0-95 % 정도)에 명?...

<ol>
	<li>Akhurst, R. J., Derynck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+signaling+in+cancer--a+double-edged+sword.">TGF-&#946; signaling in cancer--a double-edged sword.</a> Trends. Cell. Biol. 11, S44-S51 (2001).</li><li>Massagu&#233;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-&#946;+in+Cancer.">TGF-&#946; in Cancer.</a> Cell. 134, 215-215 (2008).</li><li>Ghellal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prognostic+significance+of+TGF-&#946;1+and+TGF-&#946;+in+human+breast+carcinoma.">Prognostic significance of TGF-&#946;1 and TGF-&#946; in human breast carcinoma.</a> Anticancer. Res. 20, 4413-4413 (2000).</li><li>Sheen-Chen, S. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+oncogenesis+of+MCF10A+mammary+epithelial+acini+grown+in+three-dimensional+basement+membrane+cultures.">Morphogenesis and oncogenesis of MCF10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures.</a> 30, 256-256 (2011).</li><li>Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p21-Activated+kinase+1+coordinates+aberrant+cell+survival+and+pericellular+proteolysis+in+a+three-dimensional+culture+model+for+premalignant+progression+of+human+breast+cancer.">p21-Activated kinase 1 coordinates aberrant cell survival and pericellular proteolysis in a three-dimensional culture model for premalignant progression of human breast cancer.</a> 10, 314-314 (2011).</li><li>Li, Q., Chow, A. B., Mattingly, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+overlay+culture+models+of+human+breast+cancer+reveal+a+critical+sensitivity+to+mitogen-activated+protein+kinase+kinase+inhibitors.">Three-dimensional overlay culture models of human breast cancer reveal a critical sensitivity to mitogen-activated protein kinase kinase inhibitors.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 332, 821-821 (2010).</li></ol>

우리는 MCF10A1 세포와 악성 유도체는 TGF - β - 의존적으로 콜라겐 매트릭스에 침공하는 회전 타원체 모델을 설립했습니다. 첫째, spheroids은 메틸 셀룰로오스의 면전에서 96 우물 원형 바닥 서스펜션 플레이트를 형성하고 있습니다. 물론, 또한 U - 모양의 폴리 - HEMA 코팅 플레이트는 이러한 목적을 위해 사용될 수 있습니다. 세포 메틸 셀룰로오스의 부재에 죽을 이후 메틸 셀룰로오스는 절대적으로,이 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 (옵션) </td></tr><tr><td> 메틸 셀룰로오스 </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td> M0512 </td><td></td></tr><tr><td> PureCol </td><td> 고급 Biomatrix </td><td> 5005 - B </td><td></td></tr><tr><td> 산도 표시기 스트립 </td><td> 머크 </td><td> 9533 </td><td></td></tr><tr><td> 96 - 웰 정지 접시 </td><td> Greiner 바이오 - 원 </td><td> 650 185 </td><td></td></tr><tr><td> TC 접착 96 - 웰 접시 </td><td> Greiner 바이오 - 원 </td><td> 655 180 </td><td></td></tr></tbody></table>

spheroid assay to measure tgf-&#946;-induced invasion

TGF - β는 초기 단계에서 종양 억제 역할을하지만, 나중에 무대 1,2에서 침략과 전이를 자극하여 유방암의 진행에서 역할을 반대했다. 또한, TGF - β가 자주 유방암에 overexpressed과 그 표현이 불쌍한 예후와 전이 3,4와 상호입니다. TGF - β 유도의 공격을 잘 이해하지하는 메커니즘. TGF - β는 TGF - β 타입 II (TβRII)와 유형 I (TβRI) 수용체를 통해 세포의 반응을 elicits. TGF - β - 유발 heteromeric 복잡한 형성되면, TβRII는 TβRI을 phosphorylates. 활성 TβRI는 phosphorylating 수용체 Smads (R - Smads), 즉 Smad2 및 Smad3하여 세포내 표준 신호 경로를 시작합니다. 이러한 활성 R - Smads는 핵에 축적하고 목표 유전자 5 전사를 조절 Smad4와 heteromeric 단지를 형성하고 있습니다. 이전에 D 이외에escribed Smad 경로, 여러 비 Smad 신호 경로의 활성화에 수용체 활성화 결과가 예를 들어 Mitogen는 단백질 키나제를 활성화하면 (MAPK) 경로 6. 유방암의 여러 단계에서 TGF - β의 역할을 연구하기 위해, 우리는 MCF10A 전지 시스템을 사용했다. 이 시스템은 자발적으로 남을 MCF10A1 (M1) 유방 상피 세포를 7로 구성되어, H - RAS는 생쥐 8 premalignant 병변을 생산 M1 - 파생 MCF10AneoT (M2), 그리고에서 설립되었습니다 M2 - 파생 MCF10CA1a (M4)를 변형 M2 xenografts 및 양식 폐 9 전이하는 능력을 가지고 고급 carcinomas. 이 MCF10A 시리즈는 다른 유전 배경에 의해 편견없는 강한 악의의 다른 성적 세포의 반응을 연구하기위한 가능성을 제공합니다. TGF - β - 유발 침략의 분석을 위해, 우리는 homotypic MCF10A 회전 타원체 셀 문화 embe를 생성시험 관내 (그림 1)에서 3D 콜라겐 매트릭스에 dded. 이러한 모델은 밀접하게 회전 타원체 10 내부에 괴사성도 외부와 정지 또는 세포에 대한 활성화 및 침입 세포의 결과로, 산소와 영양소의 그라데이션을 확립하여 생체내 인간의 종양과 유사. 회전 타원체 기반 assays는 monolayer 문화 11 이상의 약물 저항을 잘 요점을 되풀이하는 표시되었습니다. 이 MCF10 3D 모델 시스템은 우리가 강한 악의의 다른 단계에서 유방암 세포의 침투 특성에 TGF - β 신호의 영향을 조사 수있었습니다.

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Spheroid Assay to Measure TGF-ÃƒÅ½Ã‚Â²-induced Invasion

양적 성장 인자 (TGF) - β - 유도 3 차원 콜라겐 젤의 침공을 변형 측정하는 분석이 설명되어 있습니다. 이 분석은 유방암 개발의 다른 단계를 나타내는 세포 라인의 MCF10A 시리즈의 활용합니다. 이 방법은 다른 세포 라인과 함께 사용하는 다른 가능성 activators 또는 침해의 억제제를 조사하기 위해 사용될 수 채택 수 있습니다.

TGF - β - 유발 침략을 측정하는 회전 타원체 분석

TGF-&beta; has opposing roles in breast cancer progression by acting as a tumor suppressor in the initial phase, but stimulating invasion and metastasis ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Spheroid Assay to Measure TGF-&#946;-induced Invasion

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

암 세포에 의해 내피 세포 단층의 침략을 측정하는 실시간 전기 임피던스 기반 기술

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연구

의학

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수정<em&gt; 시험관</em&gt; 침공 분석은 호르몬, 중재 암 세포 침략의 사이토 카인 및 / 또는 성장 인자의 잠재적 인 역할을 확인하는

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테스트를위한 병아리 심장 침략 분석 암 세포의 침윤과 잠재적 안티 침략 화합물의 활동

The goal of the chick heart assay is to offer a relevant organ culture method to study tumor invasion in three dimensions. The assay can distinguish ...